肌肉钙黏蛋白突变体构建和细胞内定位分析

为研究肌肉钙黏蛋白(M-cadherin)三个钙离子结合位点对肌肉钙黏蛋白在细胞内定位的影响,以鼠肌肉钙黏蛋白基因及其钙离子结合位点突变序列为模板,利用PCR技术将其扩增后插入pEGFP-N1载体,使其与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达。转染HEK293细胞后,Western Blot检测蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察肌肉钙黏蛋白及不同钙离子结合位点突变体在HEK293细胞中的定位。结果显示,肌肉钙黏蛋白三个钙离子结合位点分别突变之后,第二个钙离子结合位点突变会导致肌肉钙黏蛋白细胞内定位发生改变,使蛋白在细胞内的分布发生改变。该研究为深入研究肌肉钙黏蛋白的结构和功能提供了基础。