HGF对TGF-β1诱导的α-SMA阳性肌腱成纤维细胞的影响

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性的肌成纤维细胞过度表达以及可能的内在作用机制。方法取大鼠跟腱原代培养成纤维细胞,应用TGF-β1(5.0 ng·mL-1)诱导肌成纤维细胞纤维化,加入或不加入HGF干预,采用MTT法测定细胞增殖水平,Western blot方法测定各组α-SMA表达水平及ERK蛋白表达水平。结果 HGF明显降低了TGF-β1诱导的肌腱成纤维细胞的过度增殖(0.127±0.083);HGF阻抑了α-SMA蛋白的过度表达(0.67±0.07)倍;而且,HGF使诱导ERK1/2的表达从(2.04±0.25)倍到(4.11±0.17)倍。结论 HGF可以有效阻抑TGF-β1诱导的肌腱成纤维细胞α-SMA过度表达,可能通过ERK1/2途径抑制其纤维化作用。

A型肉毒素对肌腱成纤维细胞增殖和TGF-β1、bFGF、MMP-2表达水平的影响

目的探究A型肉毒素(BTXA)对肌腱成纤维细胞增殖和TGF-β1、bFGF、MMP-2表达的影响。方法采用组织块法提取培养成年新西兰兔脚趾深屈肌腱成纤维细胞,分为对照组(Ctrl组)、低剂量组、中剂量组及高剂量组,分别给予0、10、30、50 U/mL BTXA。MTT检测细胞体外增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布;免疫荧光检测细胞黏附及形态变化;ELISA和qRT-PCR分别检测细胞内TGF-β1、bFGF、MMP-2蛋白及mRNA表达变化。结果经BTXA处理的各组细胞培养48 h后,细胞增殖活力均显著低于对照组,差异有统计学意义(F=95.573,P<0.05);0、10、30、50 U/mL BTXA阻滞细胞周期停滞在G0/G1期的比例分别为(38.74±4.21)%、(43.13±6.36)%、(48.37±7.58)%、(61.03±7.63)%,组间差异有统计学意义(F=76.684,P<0.05)。免疫荧光结果显示BTXA显著抑制细胞内Actin-tracker Green表达。ELISA及qRT-PCR结果显示,高剂量组细胞TGF-β1表达水平显著低于其他三组,中、高剂量组细胞MMP-2含量高于对照组和低剂量组;与对照组相比,中、高剂量组细胞TGF-β1、bFGF mRNA相对表达量显著降低,且高剂量组细胞TGF-β1 mRNA表达水平显著低于其他3组;各组细胞MMP-2 mRNA表达水平随BTXA浓度增加而升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BTXA可能通过抑制TGF-β1、bFGF表达促进MMP-2活性,发挥抑制肌腱成纤维细胞增殖的作用。

细胞肌腱膜纤维肉瘤因子调节免疫细胞分化及功能机制

细胞肌腱膜纤维肉瘤因子(c-MAF)是一种具有广泛功能的转录因子,其C端的碱性亮氨酸拉链(Basic Leucine Zipper,b-Zip)结构域高度保守,可与细胞核内含有b-ZIP结构的转录因子结合形成同源或异源二聚体形式并结合DNA发挥转录激活功能调节机体免疫状态。c-MAF通过与IL-10、IL-21、IL-4等细胞因子的基因座启动子或增强子部位结合调控其表达,从而双向调节包括2型辅助T(T helper type 2,Th2)细胞、Th17细胞、Tfh细胞和调节性T(Regulatory T,Treg)细胞在内的多种淋巴细胞及巨噬细胞的分化或功能形成。c-MAF信号网络的阐述对于免疫细胞绝对数及功能异常所引起的自身免疫性疾病的发病机制的探讨及靶向治疗具有重要意义。

先天性上睑下垂患者提上睑肌腱膜纤维特征及其与病情的相关性

目的探讨先天性上睑下垂患者提上睑肌腱膜纤维特征及其与病情的相关性。方法前瞻性病例研究。纳入2016年1月至2020年1月我院收治的50例(76只眼)先天性上睑下垂患者为研究对象;入院后根据患者病情的严重程度分为轻度组17例(25只眼)、中度组20例(31只眼)和重度组13例(20只眼),比较3组患者提上睑肌腱膜纤维特征,并分析其与病情的相关性。结果Ⅰ型胶原分布、Ⅲ型胶原分布、肌球蛋白分均随着患者病情的严重程度增加而增加(P<0.05),其余比较差异无统计意义(P>0.05);肌球蛋白分布、肌红蛋白分布评分轻度组低于中度组,中度组低于重度组,差异均有统计学意义(P<0.05),提上睑肌厚度轻度组高于中度组,中度组高于重度组差异均有统计学意义(P<0.05);logistics回归分析显示Ⅰ型胶原分布、Ⅲ型胶原分布、肌球蛋白分布是影响先天性上睑下垂患者的影响因子。结论Ⅰ型胶原分布、Ⅲ型胶原分布、肌球蛋白分均随着患者病情的严重程度增加而增加,且Ⅰ型胶原分布、Ⅲ型胶原分布、肌球蛋白是先天性上睑下垂患者病情的影响因素。

Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导干细胞分化为胰岛素分泌细胞移植治疗1型糖尿病大鼠的效果

目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染BMSCs诱导为IPCs,链脲佐菌素(STZ)制备45只1型糖尿病SD大鼠模型,BMSCs组(15只)肾被膜下移植2×10^(6) BMSCs,IPCs组(15只)大鼠肾被膜下移植2×10^(6) IPCs,sham-operation组(15只)大鼠肾被膜下注入等量生理盐水,另取15只健康SD大鼠肾被膜下注入等量生理盐水作为normal组。监测各组大鼠移植第0、7、14、21、28 d空腹血糖及体重;第21天对各组大鼠均行葡萄糖耐量试验;第28天取各组大鼠肾脏组织进行免疫组化。结果BMSCs和IPCs组大鼠血糖随时间下降,移植第21天两组大鼠空腹血糖低于移植第0天,且均低于同期sham-operation组(P<0.05),移植第28天IPCs组大鼠空腹血糖低于BMSCs组(P<0.05)。糖尿病大鼠中IPCs组和BMSCs组腹腔葡萄糖耐量实验曲线下面积小于sham-operation组,且IPCs组曲线下面积最小(P<0.05)。BMSCs组和IPCs组大鼠肾脏组织可见棕色荧光的胰岛素表达,且IPCs组胰岛素荧光光密度高于BMSCs组(P<0.05)。结论Pdx-1-Ngn3联合MafA诱导BMSCs形成的IPCs移植后在糖尿病大鼠体内可降低糖尿病大鼠的空腹血糖。

白藜芦醇对成纤维细胞分泌心钠素及脑钠素的影响

背景:白藜芦醇是从传统中药中提取的多酚类化合物,具有抑制成纤维细胞增殖作用。目的:观察白藜芦醇对成纤维细胞分泌心钠素和脑钠素的影响,验证白藜芦醇对肌腱瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用。设计、时间及地点:分组对照观察,与2007-03/12在广东医学院实验动物中心完成。材料:雌性健康成年日本大耳白兔6只,体质量2.0～2.5kg。白藜芦醇,中国药品生物制品鉴定所提供,纯度99%,用二甲基亚砜溶解成50mmol/L储存液,置-20℃保存。方法:采用差速贴壁法体外分离培养兔肌腱瘢痕成纤维细胞。将培养的细胞分为2组,对照组不加药物;白藜芦醇组又分为4个亚组,分别加入25,50,75,100μmol/L白藜芦醇作用72h。主要观察指标:采用放免法及ELISA法检测细胞培养液中心钠素及脑钠素水平;反转录-聚合酶链反应方法检测脑钠素、心钠素mRNA表达;硝酸还原酶法测细胞培养液中一氧化氮水平;化学比色法测细胞上清液中一氧化氮合酶水平;放免法测定细胞内环磷酸鸟苷水平。结果:白藜芦醇25～100μmol/L作用细胞后一氧化氮、一氧化氮合酶及环磷酸鸟苷水平升高,心钠素、脑钠素水平降低,心钠素、脑钠素mRNA的表达下降,在一定范围内有明显的剂量及时间依赖性。结论:白藜芦醇在一定浓度范围能降低培养液中心钠素及脑钠素水平,并抑制细胞中心钠素及脑钠素mRNA的表达。

带血供的掌长肌肌腱筋膜瓣移植应用解剖

掌长肌肌腱位置浅表,形态扁薄,与前臂的筋膜以及周围疏松结缔组织连结密切,因而分布血管丰富,临床上对掌长肌肌腱定位的取材方便,成活率高,对于指腱鞘内移植修补较为理想.手指腱纤维鞘管内指屈肌腱断裂的晚期修复,常在手指指间关节被动伸屈活动正常或接近正常时,采用游离肌腱移植术修补,移植多采用掌长肌腱.传统的游离移植法因肌腱没有血供,愈合过程必须依赖于植床周转供血,肌腱内部坏死及移植后发生粘连是整个手术失败的主要原因.因此,适当用脂肪、生物膜等[1]包绕肌腱,特别是肌腱吻合处,则效果会更好.我们对15例30侧上肢前臂标本进行了解剖,观察了掌长肌和周围筋膜以及血管分布,测量了掌长肌肌腱中点的左右径和前后径,为临床移植提供参考.

肾气丸加减方对高糖高脂诱导的MIN6细胞保护作用及PI3K/AKT/GSK-3β信号通路的影响

目的利用MIN6细胞损伤模型探讨肾气丸加减方通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸—苏氨酸激酶/糖原合成激酶3β(phosphoinositide3-kinase/threonine-protein kinase/glycogen synthase kinase-3β,PI3K/AKT/GSK-3β)信号通路保护胰岛β细胞功能的机制。方法将MIN6细胞分为空白组,模型组,肾气丸加减方低、中、高剂量组以及PI3K阻滞剂组(LY294002)。用CCK-8法检测各组细胞活性,胰岛素放射免疫分析试剂盒检测各组MIN6细胞上清液胰岛素含量,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,免疫蛋白印迹法检测各组细胞中PI3K、磷酸化(phosphorylated,p)-PI3K、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β及胰腺十二指肠同源盒-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)和肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homologue A,MafA)蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组MIN6细胞活性明显下降,胰岛素分泌水平下降,细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与模型组比较,肾气丸加减方低、中、高剂量组细胞活力升高,胰岛素分泌水平升高,细胞凋亡率均降低(P<0.05或P<0.01);各干预组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达明显下调,GSK-3β蛋白表达上调(P<0.05),PDX-1和MafA蛋白表达明显下调(P<0.01);与模型组比较,肾气丸加减方中、高剂量组PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达均明显上调(P<0.05或P<0.01),GSK-3β蛋白表达明显下调(P<0.01);PDX-1和MafA蛋白表达明显上调(P<0.01);加入通路阻滞剂LY294002后肾气丸加减方上述作用被抵消(P<0.05或P<0.01)。结论肾气丸加减方可提高糖脂毒性作用下MIN6细胞活力,减轻细胞凋亡,促进胰岛素分泌,以中、高剂量效果较佳,其机制可能与激活PI3K/AKT/GSK-3β信号通路、抑制GSK-3β的表达有关,进而升高PDX-1和MafA的蛋白表达,恢复胰岛β细胞功能。

微型骨锚在外伤性锤状指畸形中的应用

手指损伤形成的锤状指，是指伸终腱在末节指骨止点处或近止点处断裂，断端肌腱纤维往往呈抽麻样状态。如从止点处连同—小骨片撕脱，则外伤应力造成指伸肌腱或末节指骨基底背侧的连续性中断，由于指深屈肌腱的张力及掌板作用，远指间关节（DIP）往往掌屈移位，不能伸直呈锤状指畸形。锤状指的治疗主要分为保守与外科手术两类，其效果各家报道不一，特别是陈旧性锤状指的治疗，目前仍存在争论。

网球肘的那些事儿

近年来。网球肘等肌腱炎性疾病的发病率越来越高。网球肘不是网球运动员们的“专利”。经常反复使用肘关节的家庭主妇、建筑工人都可能出现。老年人由于肌腱纤维退变、老化，损伤后往往不能很快恢复，发病率也较高。网球肘加重时可出现握物无力。无法提拿重物，甚至端水、写字时都会疼痛，给患者带来痛苦，影响生活质量。

肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型同系物基因的单核苷酸多态性与非综合征型唇腭裂关联研究

目的揭示位于染色体20q12的肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型同系物基因(v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B,MAFB)上游单核苷酸多态性位点rs17820943与中国南方汉族人群非综合征型唇腭裂(non-syndromic cleft lip with or without cleft palate,NSCL/P)发病的相关性。方法采用引物单碱基延伸、基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱分析法检测了300例NSCL/P患者(病例组)和354例健康志愿者(对照组)以及168个完整患儿-健康父母3人核心家系的rs17820943基因型。并以测定的基因型为基础分别进行病例-对照研究以及患儿-健康父母3人家系研究。结果 rs17820943的等位基因和基因型频率在病例组与对照组间差异均有统计学意义(P等位基因=0.001和P基因型=0.002)。其中等位基因T(频率病例∶对照=0.358∶0.448)和基因型TT(频率病例∶对照=0.110∶0.195)的比值比(oddsratio,OR)和95%可信区间(95%confidence interval,95%CI)值分别为ORT=0.69(95%CI:0.55～0.86)和ORTT=0.43(95%CI:0.26～0.70)。患儿-健康父母3人家系研究也表明该位点与NSCL/P存在强阳性关联(ORT vs.C=0.55,95%CI:0.41～0.75,传递不平衡检验P=0.000)。结论 MAFB基因的rs17820943位点的单核苷酸多态性与中国南方汉族人群的NSCL/P易感性相关,表明MAFB基因可能是NSCL/P的易感基因。

Smad7在肌腱粘连组织中的表达及对肌腱成纤维细胞纤维化的作用

[目的]通过观察人肌腱粘连组织中Smad7的表达情况,并在TGF-β1诱导的肌腱成纤维细胞(TDFs))中沉默或过表达Smad7,观察细胞纤维化相关指标的变化,讨论Smad7在肌腱粘连中的作用及调控机制。[方法]收集肌腱粘连组织及正常肌腱腱周组织,Western blotting检测Smad7蛋白含量。设计并合成针对Smad7基因编码区的siRNA,同时构建Smad7基因表达载体,经脂质体转染至TDFs细胞,Real Time-PCR检测胞内Smad7基因含量,Western-blot检测细胞中Smad7蛋白表达;使用TGF-β1诱导转染后TDFs细胞,CCK-8检测细胞增殖活性变化,Western blotting检测纤维化相关的蛋白指标。[结果]与正常腱周组织比较,肌腱粘连组织中Smad7蛋白减少。siRNA及Smad7基因过表达载体转染TDFs,可以明显抑制或者上调细胞内Smad7基因含量及蛋白表达,与未转染组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);TGF-β1诱导的TDFs细胞,可以明显增强细胞增殖活性(P<0.01,vs未诱导组),siRNA转染后,TGF-β1诱导TDFs增殖活性和纤维化蛋白指标上升的趋势进一步增强,Smad7基因表达载体转染则使得TGF-β1诱导TDFs增殖活性和纤维化蛋白指标增强的趋势得到明显抑制,基因干预且诱导组与只诱导组细胞活性和蛋白含量相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]肌腱粘连组织中Smad7蛋白减少,提示肌腱粘连发生过程中Smad7表达受抑制;Smad7基因过表达可以抑制TGF-β1诱导TDFs细胞纤维化。

α-硫辛酸对高糖作用后βTc6细胞的保护作用

目的:研究α-硫辛酸对高糖毒性作用后βTc6细胞胰岛素基因、肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)基因表达的影响,对细胞的保护作用及其机制。方法:培养βTc6细胞,分为NG组(5mmol/L葡萄糖)、HG组(16.7mmol/L葡萄糖)和HG+ALA组(16.7mmol/L葡萄糖+200μmol/Lα-硫辛酸);培养48h后收集细胞培养液,检测胰岛素浓度并提取细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应检测胰岛素及MafAmRNA水平。结果:HG组与NG组比较,胰岛素和MafAmRNA的表达下降(P<0.05或P<0.01);HG+ALA组与HG组相比,胰岛素和MafAmRNA的表达均提高(均P<0.01);而与NG组相比,胰岛素和MafAmRNA的表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:糖毒性可能通过激活βTc6细胞内氧化应激反应使MafA的表达下降,进而导致胰岛素基因表达下降;α-硫辛酸可能通过上调MafA的表达而对β细胞起到保护作用。

多中心腕跗骨骨质溶解综合征一例

多中心腕跗骨骨质溶解综合征(multicentric carpotarsal osteolysis syndrome,MCTO)是一种罕见的常染色体显性遗传病。本文报道1例1岁11月龄患儿肘膝关节屈曲进行性加重,并伴有智力、运动落后,双手及双下肢正位片示多发骨质异常,经基因检测发现肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物B (V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene family protein B,MAFB)基因c.212C>T (p.P71L)杂合变异,该基因为国外已报道的致病突变,其父母无该基因突变。根据患儿临床表现及基因检测结果诊断为MCTO。同时,对本病进行文献复习,为今后诊断及治疗该类疾病提供借鉴。

MafA基因突变/变异与糖尿病的研究进展

肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(Maf A)是成熟胰岛β细胞的重要转录因子,对胰岛素基因的转录、胰岛素分泌和β细胞团的增殖、分化至关重要。Maf A与PDX-1和Neuro D1/BETA2协同作用,在胰岛β细胞和非胰岛β细胞中可诱导胰岛素基因的表达,有望成为糖尿病潜在的治疗靶点。在糖尿病小鼠模型和糖尿病患者的研究中发现,Maf A基因缺陷可导致糖耐量异常和糖尿病的发生。人类Maf A基因突变/变异可能与特殊类型糖尿病如新生儿糖尿病(NDM)或青少年成人起病型糖尿病(MODY)的致病及1型或2型糖尿病易感性的增加相关。

胰腺十二指肠同源异型盒-1、神经源性分化因子-1及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A三基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的 观察胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源异型盒-1（PDX-1）、神经源性分化因子-1（NeuroD1）及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A（MafA）对小鼠诱导多潜能干细胞（iPS）分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法 重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-绿色荧光蛋白（GFP）、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合转染小鼠iPS细胞,体外培养后逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测胰岛β细胞功能基因表达,免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同糖浓度下胰岛素的分泌量。将胰岛素分泌细胞移植到糖尿病小鼠肝脏,免疫组织化学检测其在体内胰岛素的表达,葡萄糖耐量试验及空腹血糖监测评估移植细胞在糖尿病小鼠体内的功能发挥。结果 三基因转染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛素分泌细胞,RT-PCR结果显示其胰岛β细胞功能基因的表达与小鼠胰岛β细胞株MIN6相似,免疫荧光检测见细胞内有胰岛素合成,ELISA检测结果显示细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。当葡萄糖浓度为30 mmol/L,胰岛素释放量最高为（0.309 3±0.017 9）ng。免疫组织化学染色显示移植细胞注射区域的肝实质内可见相对集中的棕黄色染色,表明移植细胞有胰岛素分泌。糖耐量试验及空腹血糖监测显示移植细胞能够控制糖尿病小鼠的血糖水平,在体内发挥良好的治疗作用。结论 胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三基因能使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞,在体内发挥一定的治疗作用。

MafA真核表达载体的构建及在人肝癌细胞中的表达

目的:构建肌腱膜纤维肉瘤肿瘤基因同系物A(MafA)真核表达载体pEGFP-N2/MafA,pEGFP-C1/MafA,观察MafA在人肝癌细胞HepG-2细胞内的表达。为研究Mafa基因功能和作用机制奠定基础。方法:提取胰腺总RNA,经RT-PCR获得MafA基因片段,在两端分别引入Hind Ⅲ和Sal Ⅰ的酶切位点,重组至有增强绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N2,pEGFP-C1中,用脂质体方法转染至人肝癌细胞HepG-2细胞中,通过荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,通过RT-PCR检测MafA基因和insulin Ⅱ基因的表达。结果:通过RT-PCR获取了MafA基因并成功克隆入载体,转染的细胞有绿色荧光蛋白表达及MafA基因表达,但没检测到insulin Ⅱ基因表达。结论:成功构建质粒pEGFP-N2/MafA和pEGFP-C1/MafA,并成功表达MafA基因,但没有insulin Ⅱ基因的表达。

广东潮汕地区汉族人群中MAFB基因rs6102085位点多态性与非综合征性唇腭裂的关联

目的:探讨广东潮汕地区汉族人群中v-maf肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物B(MAFB)基因的rs6102085多态性与非综合征性唇腭裂(NSCL/P)的关联。方法:纳入潮汕地区唇腭裂组430例和健康组450例。采用TAQMAN基因型鉴定技术对位于MAFB基因的rs6102085进行基因型检测。卡方检验分析rs6102085等位基因和基因型频率在唇腭裂组和健康组中的分布,分析其与唇腭裂的关联。结果:健康组rs6102085基因型分布符合哈迪温伯格平衡。临床亚组中唇裂合并腭裂位点等位基因与基因型的分布频率与健康组对比有统计学意义(P<0.0001),单纯唇裂和单纯腭裂与健康组对比无统计学意义(P>0.05)。男性和女性唇腭裂组分别与健康组对比均有统计学意义(P<0.05)。结论:MAFBrs6102085多态性与潮汕地区汉族人群唇裂合并腭裂有关联,与单纯的唇裂和腭裂无关联,与女性和男性均有关联,性别之间无差异。