肌节同源盒基因同系物2对小鼠晶状体发育的影响

目的观察肌节同源盒基因同系物2(Msx2)表达缺失后晶状体早期发育过程的变化,探讨Msx2对晶状体早期发育的影响。方法利用Msx2基因敲除小鼠胚胎,采取组织学染色及免疫组织化学方法观察晶状体发育过程中的异常变化及细胞增殖情况。结果Msx2基因敲除后,晶状体的发育受到明显的抑制,晶状体早期发育迟缓,晶状体与角膜组织分离延迟。同时Msx2表达缺失使晶状体细胞溴脱氧尿核苷(BrdU)标记比例下降。结论Msx2基因敲除小鼠晶状体发育出现异常,晶状体发育异常的原因之一是晶状体发育过程中晶状体上皮细胞细胞增殖受到抑制。

同源盒基因调控先天缺牙的研究进展

同源盒基因是一个进化上高度保守的含有同源结构域的转录因子,其编码的转录调节因子在器官发生上起着重要的调控作用。该家族中的多个亚家族不仅参与了牙胚的分化过程,而且常由于其异常的表达导致先天缺牙的发生。随着分子遗传学、基因工程和人类基因组计划在先天缺牙疾病上的不断深入探索,同源盒基因突变类型及表达模式的研究正成为先天缺牙疾病的主要研究方向。本文通过对近年来文献回顾,对同源盒基因的研究进展、与先天缺牙相关同源盒基因的表达模式和分子机制以及同源盒基因在先天缺牙临床诊疗中的应用前景进行综述。

远中缺失同源盒基因5和肌节同源盒基因1在双膦酸盐药物性颌骨坏死大鼠模型中的变化

目的探究远中缺失同源盒基因5（distal-less homeobox genes 5，Dlx-5）和肌节同源盒基因1（Msh homeobox 1，Msx-1）在双膦酸盐药物性颌骨坏死（bisphosphonate-associated osteonecrosis of the jaw，BRONJ）致病机制中的作用。方法将24只SD大鼠采用随机数字表法随机分为两组，每组12只。实验组腹腔注射唑来膦酸0.2 mg/kg，对照组腹腔注射等量生理盐水，每周3次，12周后拔除左下第一磨牙。拔牙后8周处死所有动物。通过影像学、大体及组织病理学观察，诊断BRONJ的发生。通过实时荧光PCR检测Dlx-5和Msx-1在骨坏死样本中的表达水平。结果BRONJ动物模型中，实验组Dlx-5基因表达（5.91±0.28）显著高于对照组（1.00±0.15）（t=15.778，P=0.001），实验组Msx-1基因表达（0.09±0.03）显著低于对照组（1.02±0.06）（t=-10.638，P=0.001）。结论腹腔注射唑来膦酸联合拔牙的方法可成功诱导大鼠发生BRONJ，Dlx-5和Msx-1基因在BRONJ的致病过程中发挥作用。

肌节同源盒-1基因A448T多态性与山西部分人群非综合征性唇腭裂发病的相关性

目的探讨肌节同源盒(msx)-1基因A448T的多态性与山西部分人群非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发病间的关系。方法以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法行msx-1基因A448T的多态性检测,并行其遗传统计分析。结果 msx-1等位基因频率在对照组和NSCL/P组之间的差异有显著性统计学意义(P<0.01),对照组T位点频率明显高于NSCL/P组(对照组0.55,NSCL/P组0.26)。结论 msx-1/A448T(rs13127820)基因的多态性与山西部分人群NSCL/P发病可能相关,此位点的T等位基因在NSCL/P的发生中可能起保护效应。

一个单纯性先天缺牙家系的临床及基因突变分析

目的探讨多数牙先天缺失患者的人类成对盒基因(PAX9)和肌节同源盒基因(MSX1)突变位点,为该疾病的病因学研究提供依据。方法对于该例患者与部分正常家庭成员进行口内检查及家系调查,取研究模型测量其牙冠宽度,并与正常值比较。拍摄曲面断层片和头颅侧位片进行头影测量分析,对比颅面形态和错畸形类型及特点。从静脉血中提取DNA,根据PAX9和MSX1的全序列设计引物,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增PAX9基因的外显子1、2、3、4及MSX1基因外显子1、2,而后通过对分段PCR纯化产物的测序,并结合系谱进行突变分析。结果患者伴有牙齿形态畸形,与中国人正常值相比较,牙冠宽度较小。头影测量分析结果提示先证者在骨面型及颌骨形态等方面无明显遗传倾向。基因筛查结果显示先证者及其母亲的PAX9外显子3第718位点上由G变为C,属错义突变,导致与之对应的第240位氨基酸由丙氨酸变为脯氨酸;MSX1未见突变。结论多数牙先天缺失可能与PAX9基因外显子3的第718位点上的错义突变有关。

非综合征性先天缺牙相关基因的研究进展

先天缺牙是牙发育过程中的数目异常,包括个别牙先天缺失、多数牙先天缺失和先天无牙症。先天缺牙根据是否有伴发症状可分为综合征性和非综合征性,表现为常染色体的显性或隐性遗传、X-连锁遗传特性等。先天缺牙可以是有家族遗传史的,也可以是散发的。本文就与非综合征性先天缺牙有关的配对盒基因-9、肌节同源盒基因-1、轴抑制基因-2和外胚叶发育不全综合征基因的研究进展作一综述。

一个先天缺牙家系的基因突变及病例对照研究

目的探讨非综合征型多数牙先天缺失患者的人类成对盒基因9(PAX9)、同源盒基因1(MSX1)、中轴抑制蛋白2(AXIN2)突变位点,为该疾病的病因学研究提供依据。方法对该例患者及其家庭成员进行全身系统检查、口腔专科检查(含拍摄曲面断层片)及家系调查;抽取外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增PAX9基因的外显子1、2、3、4,MSX1基因外显子1、2及AXIN2基因外显子2、3、4、5、6、7、8、9、10、11,通过对分段PCR纯化产物进行测序,并结合系谱图进行基因突变分析。同时,通过病例-对照实验(先天缺牙组50例,健康对照组100例)对突变位点AXIN2G1807C与先天缺牙的相关性进行分析。结果先证者的祖母和外祖父为兄妹关系。口内检查以及曲面断层片发现先证者为无牙牙合,仅见左侧下颌升支处有一阻生牙影像,其余家庭成员牙齿数目发育正常。均未合并其他组织器官的先天发育异常。先证者及部分表型正常者分别发现3个已知突变位点,分别为AXIN2外显子6第1 365位A变为G(rs9915936),外显子7第1 807位G变为C(rs145353986)以及外显子8第2 062位C变为T(p.Leu688Leu)。PAX9、MSX1未见异常。病例组和对照组间AXIN2G1807C的基因频率和基因型频率差异无统计学意义。结论 AXIN2c.2062C>T突变可能是导致中国人群非综合征型多数牙缺失的危险因素之一。AXIN2c.1807G>C与此类疾病之间不存在明显的相关性。

健骨颗粒对去卵巢小鼠miR-141及成骨基因Dlx5/Msx2/Runx2的影响

目的:观察健骨颗粒对去卵巢小鼠骨组织中miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2表达的影响,探讨健骨颗粒防治绝经后骨质疏松的作用机制。方法:30只C57小鼠按照随机数字表法分为假手术组、生理盐水组和健骨颗粒组,每组10只。假手术组只切除卵巢周围脂肪,不切除卵巢;生理盐水组和健骨颗粒组均手术切除双侧卵巢,并分别灌服生理盐水和健骨颗粒。干预8周后处死取材,采用micro CT观察胫骨形态并计量;realtime PCR检测骨组织miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2等mRNA的表达;Western blot法检测骨组织Dlx5、Msx2、Runx2等蛋白含量。结果:与生理盐水组比较,健骨颗粒组骨小梁数量、宽度、长度、形态和分布部分恢复,密度和联结性有所增加,仍无法恢复到假手术组水平,但皮质骨面积增加,骨髓腔缩小,基本恢复到假手术组水平;骨矿物质含量(BMC)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨表面积和骨组织体积比值(BS/TV)、骨小梁数量(Tb.N)均明显升高;骨小梁分离度(Tb.Sp)、结构模型指数(SMI)指标均明显降低;小鼠骨组织miR-141、Msx2相对含量明显降低;骨组织Runx2、Dlx5相对含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:健骨颗粒可以有效降低miR-141的表达,并通过影响骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化BMP信号通路Dlx5/Msx2/Runx2信号轴来提高Dlx5、Runx2等成骨关键因子的表达,提高成骨能力,达到预防和治疗骨质疏松的目的。

非综合征型先天缺牙致病基因和分子机制的研究进展

先天缺牙是牙齿发育过程中常见的牙数目发育异常,对患者的颌面部发育及美观和咀嚼功能产生严重的影响。根据有无伴发全身症状,先天缺牙可分为综合征型先天缺牙与非综合征型先天缺牙。近几年发现新的相关基因和新的突变位点及分子机制已成为目前非综合征型先天缺牙基因研究的主要方向。本文通过对近年来文献的回顾,对与非综合征型先天缺牙主要相关的Wnt/β-catenin信号通路、TGF-β/BMP信号通路、PAX9基因和MSX1基因、EDA/EDAR/NF-κb信号通路的分子机制以及相互调节的紧密联系进行综述,为未来先天缺牙的防治提供了新的理论基础。非综合征型先天缺牙致病基因的分子机制的研究目前甚少,对于其机制的精准探索将成为先天缺牙未来主要的研究方向之一。

壮骨伸筋胶囊对泼尼松致骨质疏松模型大鼠的改善作用及其机制研究

目的:研究壮骨伸筋胶囊对骨质疏松模型大鼠的改善作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为6组,即空白对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、骨疏康颗粒组[阳性药物,3 g(生药)/kg]和壮骨伸筋胶囊低、中、高剂量组[1.4、2.7、5.4 g(生药)/kg]。除空白对照组ig生理盐水外,其余各组大鼠于每周一、四ig醋酸泼尼松片(4.5 mg/kg)复制骨质疏松模型,并同时于每周一至六ig相应药物,连续13周。测定大鼠股骨骨密度、骨形态计量指标[骨小梁体积百分比、骨小梁矿化率(MAR)和骨皮质矿化率(mAR)]、肾组织中肌节同源盒基因Msx-2 mRNA及其蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠骨密度、骨小梁体积百分比降低,mAR升高,肾组织中Msx-2 mRNA及其蛋白表达减弱(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,骨疏康颗粒组和壮骨伸筋胶囊高剂量组大鼠骨小梁体积百分比升高、m AR降低,肾组织中Msx-2 mRNA表达增强;各给药组大鼠骨密度增加、Msx-2蛋白表达增强;中剂量组骨小梁体积百分比升高,以上差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);MAR差异无统计学意义(P>0.05)。结论:壮骨伸筋胶囊对泼尼松致大鼠骨质疏松有一定的改善作用,其机制可能与上调肾组织中Msx-2基因的表达有关。

唑来膦酸对大鼠不同胚胎来源骨骼Dlx-5和Msx-1表达的影响

目的:探讨唑来膦酸对远中缺失同源盒基因5(Distal-Less homeobox 5,Dlx-5)和肌节同源盒基因1(Msh homeobox 1,Msx-1)在大鼠下颌骨和髂骨表达水平的影响,以期为进一步研究双膦酸盐类药物导致颌骨骨坏死的致病机制提供理论基础。方法:选用24只8周龄雌性SD大鼠,实验组腹腔注射唑来膦酸持续12周,对照组腹腔注射等量生理盐水12周,采集下颌骨以及髂骨样本,应用免疫组化及RT-PCR检测大鼠上述两个部位Dlx-5和Msx-1在蛋白水平和基因水平的表达情况。结果:免疫组化及RT-PCR结果显示实验组中下颌骨Dlx-5的蛋白和基因表达水平均高于对照组(P<0.01),髂骨Dlx-5的蛋白和基因表达水平低于对照组(P<0.05),实验组中下颌骨和髂骨Msx-1的蛋白和基因表达水平均低于对照组(P<0.01)。对照组中与髂骨比较,下颌骨的Dlx-5基因表达水平降低(P<0.01),下颌骨的Msx-1基因表达水平升高(P<0.01)。结论:在唑来膦酸作用下,大鼠下颌骨和髂骨Dlx-5和Msx-1的表达水平存在差异性变化。在一定程度上解释了双膦酸盐类药物导致颌骨骨坏死特异性发生于颌骨的原因。

一个非综合征型先天缺牙家系的MSX1基因突变分析

目的对一个非综合征型先天缺牙家系进行候选致病基因测序,以寻找该家系的致病基因。方法收集首都医科大学附属北京儿童医院口腔科就诊的1例非综合征型先天缺牙患者及其家系成员的临床资料及血液标本,检测先天缺牙常见的致病基因,对寻找到的可疑突变进行生物信息学分析及表型分析。结果患者的肌节同源盒基因1(MSX1)携带一个错义突变:MSX1第2外显子发生杂合突变(c.547C>A),即核苷酸第547位C变为A,导致氨基酸第183位由谷氨酰胺(Glutamine)变为赖氨酸(Lysine),即Gln183Lys(p.Q183K)。保守性分析显示该位点在进化过程中高度保守。突变致病性预测显示该突变有很强的致病性。结论本研究在一个非综合征型先天缺牙患者中发现了MSX1基因的新突变c.547C>A,进一步证实了MSX1基因突变与非综合征型先天缺牙的关系,并扩大了MSX1基因突变谱。

Msx2和topo Ⅱ-α在鼻内翻性乳头状瘤中的表达及意义

目的:探讨肌节同源盒基因同系物2(Msx2)和人拓扑异构酶Ⅱ-α(topoⅡ-α)在鼻内翻性乳头状瘤(SNIP)组织中的表达和意义,及其在SNIP恶变发生、发展过程中的关系。方法:采用免疫组织化学SP法分别检测Msx2和topoⅡ-α在32例SNIP,30例鼻息肉,30例恶变SNIP组织中的表达情况,其中SNIP组又根据病理形态分为轻度不典型增生组、中度不典型增生组和重度不典型增生组。结果:SNIP、恶变SNIP组织中Msx2的平均光密度值分别为0.2183±0.0598和0.2521±0.0761,均显著高于鼻息肉组织的0.1878±0.0372(P<0.05或0.01)。SNIP、恶变SNIP组织中topoⅡ-α的平均光密度分别为0.230 3±0.039 7和0.266 6±0.048 3,均显著高于鼻息肉组织的0.197 8±0.038 8(P<0.01)。Msx2和topoⅡ-α阳性表达在SNIP的3个病理形态分组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01或0.05),且在SNIP中的表达呈正相关(P<0.05)。结论:Msx2和topoⅡ-α在SNIP恶变的发生、发展中起重要作用,有可能成为SNIP基因治疗的靶点。

Msx2、topoⅡ-α、HPV16及VEGF在鼻内翻性乳头状瘤中的定量及意义

目的:探讨Msx2、topoⅡ-α、HPV16及VEGF在鼻内翻性乳头状瘤(SNIP)组织中的定量及意义,研究上述四种因子之间是否具有相关性,进一步确定Msx2和topoⅡ-α在SNIP恶变发生、发展中的关系。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分别检测Msx2、topoⅡ-α、VEGF及HPV16在13例SNIP,10例鼻息肉(INP),10例鼻腔-鼻窦鳞状细胞癌组织(NSCC)中的表达。其中SNIP根据病理形态分为轻度不典型增生组、中度不典型增生组和重度不典型增生组。结果:SNIP和NSCC组织中Msx2、topoⅡ-α、HPV16及VEGF的表达均显著高于INP(P<0.05)。Msx2、topoⅡ-α、VEGF及HPV16在SNIP的3个病理形态组之间的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。采用Pearson相关系数得出HPV16、topoⅡ-α、VEGF、Msx2之间两两比较均呈正相关性(P<0.05)。结论:Msx2和topoⅡ-α在SNIP恶变的发生、发展中起重要作用,有可能成为SNIP和NSCC基因治疗的新靶点。

OPN和Msx2在鼻内翻性乳头状瘤中的表达及意义

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)和肌节同源盒基因同系物2(Msx2)在鼻内翻性乳头状瘤(SNIP)组织中的表达和意义,及两因子在SNIP恶变发生、发展过程中的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测OPN和Msx2在32例SNIP、30例鼻息肉(INP)和30例恶变SNIP蜡块组织中的表达情况,其中SNIP组又根据病理形态分为轻度不典型增生组、中度不典型增生组和重度不典型增生组。所有数据均采用SPSS13.0软件包进行统计学分析。结果:OPN和Msx2在恶变SNIP组中的阳性表达率均为100%(30/30),均显著高于SNIP组和INP组中的阳性表达率,且两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。OPN和Msx2在SNIP的三个病理形态分组间的阳性表达比较:轻度不典型增生组与重度不典型增生组比较差异具有统计学意义(P<0.05),而轻度不典型增生组与中度不典型增生组比较、中度不典型增生组与重度不典型增生组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。OPN和Msx2在SNIP中的表达呈正相关(P<0.01)。结论:OPN和Msx2在SNIP恶变的发生、发展过程中起重要作用,有可能成为SNIP基因治疗的靶点。