肌苷单磷酸脱氢酶在卵清蛋白诱导过敏性哮喘中的作用

目的探讨肌苷单磷酸脱氢酶(inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)在卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导过敏性哮喘发生发展中的作用。方法将36只BALB/c雌性小鼠随机分为健康对照组、OVA哮喘组和IMPDH抑制剂(利巴韦林)干预组,每组12只。收集每只小鼠的肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、肺组织、外周血及脾脏,采用苏木精-伊红染色分析肺组织病理改变,免疫组织化学法检测肺组织内CD3的表达情况,血球分析仪检测BALF和外周血中白细胞总数及分类计数,qRT-PCR和Western blot分别检测肺组织IMPDH mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光法检测肺组织IMPDH蛋白定位和表达情况,流式细胞术检测外周血和脾脏淋巴细胞亚群及其细胞内IMPDH蛋白表达水平。结果与健康对照组相比,OVA哮喘组小鼠肺内小气道周围及肺泡间隔大量炎症细胞浸润,BALF和外周血中白细胞总数均显著增加,以中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞的数量增多为主(均P<0.05),且肺组织内IMDPH蛋白水平显著升高(P<0.05),炎症细胞胞质内明显增多的IMPDH蛋白呈分散模式。给予利巴韦林干预后哮喘小鼠肺部炎症明显减轻,尤以BALF中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞显著减少为特征(均P<0.05),同时肺部IMPDH蛋白水平降低(P<0.05),炎症细胞胞质内IMPDH表达减少,但细胞核内出现较多IMPDH丝状结构。此外,OVA哮喘组小鼠脾脏中B细胞占比明显增多(P<0.05),但利巴韦林干预后哮喘小鼠脾脏中B细胞占比显著减少,而NK、CD3^(+)T和CD8^(+)T细胞占比较OVA哮喘组明显增高(均P<0.05)。同时利巴韦林干预组脾脏NK细胞内IMPDH蛋白表达水平较健康对照组升高,而CD8^(+)T细胞内IMPDH蛋白表达水平降低。结论抑制IMPDH可有效缓解以啫酸性粒细胞为主的气道及全身炎症反应,同时还能降低脾脏B细胞免疫应答,增强NK及CD8^(+)T细胞等杀伤细胞的免疫应答效应,其潜在的机制可能与炎症细胞内IMPDH表达量及其形成的丝状结构有关。

结直肠癌肝转移患者肠道菌群中肌苷单磷酸脱氢酶1的筛选及其临床意义

[目的]探讨肠道菌群及其相关代谢物肌苷单磷酸脱氢酶1(inosine monophosphate dehydrogenase 1,IMPDH1)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)肝转移中的临床意义。[方法]选取CRC非肝转移(CRCNLM)及肝转移(CRCLM)患者各9例。采用16S r DNA测序检测患者粪便,采用液质联用技术检测微生物样本中的代谢物,并筛选出与肝转移相关的Inosine 5′-Monophoshpate。分析TCGA数据库CRC资料中IMPDH1的表达及其对临床预后的影响。[结果]与CRCNLM比较,P.Sphingomonas、F.Bacillus、A.Skermanella等在CRCLM患者中明显升高。经非靶向代谢组学和Tax4Fun功能富集分析,Inosine 5′-Monophosphate等在肝转移组中升高,且Inosine 5′-Monophoshpate与F.Bacillus呈正相关(r=0.564,P<0.05)。IMPDH1是Inosine 5′-Monophoshpate的关键代谢酶,在CRC及其肝转移患者中显著升高。根据ROC曲线的cut-off值(16.4546)分为IMPDH1高低表达组,IMPDH1表达在CRC患者TNM分期组间差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素结果显示,TNM分期(HR=1.041,95%CI:1.020~1.063)、IMPDH1表达(HR=1.007,95%CI:1.000~1.014)是影响CRC预后的独立风险因素(P<0.05)。随访11.69年后,IMPDH1高低表达患者的总生存率分别为15.2%和31.8%(P=0.01);随访6.86年后,在CRC肝转移患者中,IMPDH1高低表达患者的总生存率及1、3、5年生存率分别为0、59.2%、47.4%、0和12.3%、76.6%、58.5%、24.6%,差异有统计学意义(P=0.03)。[结论]F.Bacillus及其相关代谢物Inosine 5′-Monophoshpate的增加可能是导致CRC肝转移发生的原因之一,后者的关键酶IMPDH1高表达可能也是导致CRC预后差的风险因子。

利用抑制消减杂交分离受褐飞虱取食下调的水稻基因

为了分离受褐飞虱取食抑制的水稻基因,采用抑制消减杂交的方法,以正常生长的水稻幼苗为目标群体,以褐飞虱胁迫32 h的水稻幼苗作为对照群体,构建了含200个重组质粒的SSH cDNA文库。随机挑选50个重组质粒进行反向Northern差异筛选后,再经Northern杂交验证,得到2个受褐飞虱取食抑制的基因:一个是Lhca,编码水稻光系统Ⅰ天线蛋白;另一个基因(BpHd002)与肌苷-5’-单磷酸脱氢酶基因有同源性。以BpHd002为探针筛选水稻幼苗cDNA文库分离出该基因的全长cDNA(BpHd002A)。其长度为1 285bp,含有一由519 bp组成的完整的阅读框,编码的蛋白质具有两个CBS结构域。