中药制剂—肌萎灵注射液对神经干细胞的促分化作用

施加不同浓度的肌萎灵注射液诱导神经干细胞分化7d,应用流式细胞仪和免疫组织化学方法检测神经元特异中间丝蛋白(NF -200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以观察肌萎灵注射液对神经干细胞分化的影响。结果表明: (1)肌萎灵注射液能促进神经干细胞的分化; (2) 1%肌萎灵注射液促进神经干细胞向神经元方向分化。本研究结果提示:中药制剂肌萎灵注射液能促进神经干细胞向神经元方向分化。

肌萎灵注射液对人骨髓基质细胞增殖和向神经细胞分化的影响

目的:观察肌萎灵注射液对人骨髓基质细胞增殖及向神经细胞分化的影响,为中医药与干细胞移植联合治疗运动神经元病提供实验依据。方法:应用密度梯度离心方法,体外分离培养人骨髓基质细胞,实验组施加不同浓度的肌萎灵注射液(0.1%、0.2%、0.5%、1%、2%JWL),对照组加等量培养基。应用液体闪烁法检测细胞增殖,免疫组织化学方法和流式细胞仪检测骨髓基质细胞分化后神经元特异中间丝蛋白(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果:肌萎灵注射液各浓度组人骨髓基质细胞生长较好,细胞增殖迅速,3H-TdR掺入法CPM显著提高,与对照组均有显著性差异(P<0.01)。人骨髓基质细胞在加入含血清培养基的情况下,对照组自然分化成神经元和胶质细胞数目很少,分别仅占5.85%±1.03%和8.90%±1.44%。肌萎灵注射液各剂量组NF-200和GFAP阳性细胞数均明显增多,与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论:肌萎灵注射液明显促进人骨髓基质细胞的增殖和向神经细胞的分化。

肌萎灵注射液对大鼠原代培养运动神经元生长的影响

为了观察中药制剂肌萎灵注射液对大鼠原代培养脊髓运动神经元生长的影响,本研究采用MTT方法观察神经元活力,并通过免疫组织化学技术进行NF-200染色后图像分析测定突起长度.结果表明:浓度为0.5%～5%的肌萎灵注射液能增加培养神经元活力,浓度为0.5%～1%的肌萎灵能促进神经元突起生长.本研究结果提示:肌萎灵注射液对培养的大鼠脊髓运动神经元生长有促进作用.

肌萎灵注射液对体外培养运动神经元的保护作用

目的:观察肌萎灵注射液(JWL)对体外培养运动神经元的保护作用。方法:应用密度离心法分离鼠胚脊髓运动神经元进行原代培养,加入谷氨酸建立兴奋性氨基酸毒性损伤模型,评价不同浓度肌萎灵注射液对运动神经元的保护作用。MTT法检测细胞活力,NF-200免疫组化染色并进行图象分析,测定神经突起主干长度,生化分析仪检测培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH),TUNEL阳性神经元计数观察细胞凋亡。结果:(1)肌萎灵注射液能明显促进体外培养运动神经元的活力,促进神经突起的生长;(2)肌萎灵注射液可减少兴奋性氨基酸毒性损伤运动神经元LDH的漏出;(3)肌萎灵注射液能显著减少谷氨酸诱导的运动神经元凋亡。结论:肌萎灵注射液对正常运动神经元和兴奋性氨基酸毒性损伤运动神经元均具有保护作用。

肌萎灵汤治疗多发性硬化的临床研究

目的观察肌萎灵汤配合西药治疗多发性硬化(MS)的临床疗效。方法将68例MS患者随机分为2组,治疗组36例采用肌萎灵汤配合西药等治疗,对照组32例仅采用常规西药治疗。结果治疗组总有效率94%,对照组总有效率78%,2组疗效比较有显著性差异(P<0.01)。结论中西医结合治疗MS具有一定优势。

原代培养鼠胚脊髓运动神经元活力状态与肌萎灵注射液的干预作用

目的:从细胞水平,观察扶元起萎,养荣生肌的中药制剂肌萎灵注射液对原代培养鼠胚脊髓运动神经元的保护作用。方法:实验于2004-03/2005-03在解放军第三军医大学完成。实验分组:清洁级SD雌性孕鼠,孕期10～14d。应用密度梯度离心法分离鼠胚脊髓运动神经元进行原代培养,运动神经元培养72h后,按培养板及孔分为4.5μg/L肌萎灵组(肌萎灵注射液,含生药0.9g/mL)、9μg/L肌萎灵组、45μg/L肌萎灵组、力如太组(力如太R利鲁唑片,应用时经0.9%NaCl-0.01NHCl溶解)和对照组。实验处理:各组分别加入用新鲜培养基稀释为0.5%(终浓度4.5μg/L)、1%(终浓度9μg/L)、5%(终浓度45μg/L)的肌萎灵注射液,力如太组加入利鲁唑(终浓度10μmo/L),对照组加入等量新鲜培养基。实验评估:①共同培养3d用四甲基偶氮唑盐法观察其对细胞活力的影响,以吸光度表示。②采用NF-200免疫组织化学染色并进行图像分析,测定神经突起主干长度。结果:①培养的运动神经元活力状态比较:4.5,9,45μg/L肌萎灵组培养运动神经元活力显著增强,与对照组相比,差异有显著性意义(0.317±0.054,0.396±0.087,0.329±0.097,0.230±0.130,P<0.05)。力如太组细胞生长与对照组相比无显著差异(0.266±0.141,0.230±0.130,P>0.05)。②脊髓运动神经元突起生长情况结果:4.5μg/L肌萎灵组和9μg/L肌萎灵组可促进其生长,与对照组相比,差异有显著性意义[(315.96±32.32),(373.46±80.24),(159.71±48.95)μm,P<0.05]。结论:肌萎灵注射液可增强运动神经元活力,促进脊髓运动神经元突起的生长。

肌萎灵系列制剂治疗肌萎缩侧索硬化症240例疗效观察

目的:观察肌萎灵系列制剂治疗肌萎缩侧索硬化症的临床疗效。方法:将320例患者随机分为2组。治疗组240例,以肌萎灵注射液静脉滴注治疗,并根据临床表现,分别口服肌萎灵胶囊1～3号;对照组80例,以神经营养因子静脉滴注治疗,并口服力如太。2组均治疗3疗程。结果:总有效率治疗组为85.42%,对照组为3.75%,2组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01),治疗组疗效明显优于对照组,并能显著改善肌萎缩侧索硬化症的主要症状与体征。结论:肌萎灵系列制剂对肌萎缩侧索硬化症有明显的治疗作用。

肌萎灵冻干粉对运动神经元的保护作用

目的观察肌萎灵冻干粉对大鼠脊髓损伤后的神经保护作用,并研究其对谷氨酸诱导的原代神经细胞凋亡的影响。方法以质量30 g静态压迫硬膜外脊髓10 min建立大鼠脊髓损伤模型,于术后第1天、7天、14天进行各实验组神经功能评价,并观察损伤处脊髓形态学改变;建立低浓度谷氨酸诱导原代神经细胞的兴奋性毒性损伤模型,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western检测Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果 (1)肌萎灵冻干粉可明显提高脊髓损伤大鼠各时间段的BBB评分,改善后肢运动功能,减轻脊髓神经元水肿。(2)肌萎灵冻干粉可增强谷氨酸损伤后的神经细胞活力,缓解神经细胞损伤。(3)肌萎灵冻干粉能显著减少谷氨酸诱导的神经细胞凋亡。(4)肌萎灵冻干粉可不同程度的上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达。结论肌萎灵冻干粉可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复,增强神经细胞活力,抑制谷氨酸诱导的神经细胞凋亡,调节凋亡相关蛋白表达,具有一定的神经保护作用。

中药肌萎灵国际合作项目获新进展

近日，科技部国际科技合作项目“中药肌萎灵冻干粉质量及作用机制研究”通过了河北省科学技术厅国际合作处的验收。

高效液相色谱法测定肌萎灵冻干粉中黄酮类成分人血浆蛋白结合率

目的测定肌萎灵冻干粉中淫羊藿苷和朝藿定A、B、C 4种黄酮类成分的血浆蛋白结合率。方法采用平衡透析法结合高效液相色谱法,测定肌萎灵冻干粉中4种黄酮类成分在透析袋内血浆中的质量浓度与透析袋外缓冲液中的质量浓度,计算血浆蛋白结合率。结果肌萎灵冻干粉血浆浓度分别为20、10和5 g.L-1时,肌萎灵冻干粉中淫羊藿苷和朝藿定A、B、C与人血浆的蛋白结合率分别为(67.7±s 1.1)%、(73.4±0.4)%、(70.0±1.5)%;(56.3±2.4)%、(62.2±1.4)%、(62.0±1.4)%;(56.5±1.0)%、(59.7±1.5)%、(57.3±2.7)%;(62.4±1.4)%、(67.7±0.8)%、(66.8±1.8)%。结论肌萎灵冻干粉中4种黄酮类成分与人血浆均属中度结合,且蛋白结合率与血药浓度无明显依赖性。

高效液相色谱法测定注射用肌萎灵中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量

目的：建立高效液相色谱（HPLC）法测定肌萎灵冻干粉中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量的方法。方法：采用Symmetry@C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈水梯度洗脱流速1．0mL·min^-1;柱温30℃；检测波长203nm。结果：人参皂苷Rg1、Re、Rb1分别在0．96～4．80，0．84～4．20，1．164-5．820μg范围内呈良好的线性关系，3种皂苷的平均回收率分别为98．62％（RSD为2．32％），99．19％（RSD为3．14％），100．17％（RSD为2．44％）。结论：该方法简便快捷，准确可靠，为肌萎灵冻干粉的质量控制提供了依据。

注射用肌萎灵细菌内毒素检查方法的研究

目的:建立注射用肌萎灵细菌内毒素的检查方法。方法:按照2010年版《中国药典》(一部)细菌内毒素检查法,用不同厂家的鲎试剂对不同批号的样品进行干扰试验和细菌内毒素检查。结果:注射用肌萎灵供试品初始浓度稀释40倍对细菌内毒素的检测无干扰作用。结论:所建立的方法可用于注射用肌萎灵的细菌内毒素检查。

毛细管顶空气相色谱法测定肌萎灵冻干粉中有机溶剂的残留量

目的建立肌萎灵冻干粉中AB-8型大孔吸附树脂有机溶剂(正己烷、苯、甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯)残留量的检测方法。方法采用顶空气相色谱程序升温方法,以AT-WAX毛细管色谱柱分离,氢火焰离子化检测器检测。结果 8种大孔吸附树脂残留溶剂分离良好;在各自线性范围内峰面积和浓度均有良好的线性关系,r为0.9991~0.9998;方法精密度良好,RSD均小于3%;样品在8h内稳定;正己烷检测限为0.08μg·mL- 1、苯为0.025μg·mL- 1、甲苯为0.04μg·mL- 1、(对、间、邻)二甲苯均为0.2μg·mL- 1、苯乙烯为0.4μg·mL- 1、二乙烯苯为0.1μg·mL- 1。结论本法操作简便、准确可靠,可用于控制肌萎灵冻干粉中AB-8型大孔吸附树脂有机溶剂残留量。

HPLC-ESI/MS对肌萎灵冻干粉指纹图谱特征峰的鉴定

目的采用液相色谱-质谱联用法对肌萎灵冻干粉特征峰进行指认鉴定。方法采用Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水-1%乙酸,流速1.0 mL.min-1;柱温:30℃;离子源为大气压电喷雾电离源(ESI),雾化气压力:275.8 kPa;辅助气压力:137.9 kPa;毛细管温度:340℃;喷雾电压:4.2 kV。选择正负离子扫描方式,记录总离子流(TIC)色谱图及其特征碎片。结果肌萎灵冻干粉指纹图谱特征峰标出12个峰,其中7个色谱峰为人参主要成分,另外5个峰为淫羊藿主要成分。结论本试验确定了肌萎灵冻干粉主要功效的化学物质基础及其来源,对肌萎灵冻干粉化学表征及质量评价有重要的参考价值。

从奇经络脉治疗创伤性坐骨神经、腓总神经损伤临床观察

目的观察应用中医奇经络脉理论治疗坐骨神经、腓总神经损伤的治疗效果。方法将180例患者随机分为2组,治疗组应用中药肌萎灵注射液、桂龙通络胶囊及中药外洗、针刺治疗,对照组应用中药复方丹参注射液、弥可保片治疗,3个月后观察疗效。结果治疗组有效率(93%)明显高于对照组(74%)(P<0.05)。治疗组治疗后中医症状评分较对照组明显降低。治疗后2组神经传导速度均明显改善,但2组无显著性差异。结论应用中医奇经络脉理论可以有效治疗坐骨神经、腓总神经损伤。

从奇经络脉论治外伤性截瘫90例临床观察

目的观察从奇经论治外伤性截瘫的疗效。方法120例患者随机分为治疗组90例与对照组30例,治疗组针灸治疗、静脉滴注肌萎灵注射液及口服通心络胶囊;对照组针灸治疗、静脉滴注复方丹参注射液。结果治疗组总有效率91.11%,对照组总有效率76.67%。经统计学处理有显著性差异。结论从奇经络脉论治用肌萎灵注射液合通心络胶囊治疗外伤性截瘫效果好。

HPLC-UV-ELSD同时测定大鼠尿样中人参皂苷和淫羊藿黄酮苷类成分

目的:建立HPLC紫外检测器串联蒸发光散射检测器的方法同时测定大鼠尾静脉注射肌萎灵冻干粉后尿样中人参皂苷和淫羊藿黄酮苷类成分。方法:采用C18色谱柱,流动相乙腈-水,梯度洗脱,紫外检测器:检测波长220nm;蒸发光散射检测器:漂移管温度80℃,气体压力172.4kPa。结果:所检测的12种成分在检测的范围内线性关系良好,R2均大于0.998,提取回收率在88.67%～101.2%,日内和日间精密度的RSD小于9.1%,RE在-11.58%～10.89%。结论:该方法专属性好,精密度好,可用于大鼠尾静脉注射肌萎灵冻干粉后尿样中皂苷和黄酮苷类成分的测定,该结果可为肌萎灵冻干粉的体内药物代谢和临床用药提供参考。

大鼠胆汁中人参皂苷和淫羊藿黄酮苷的HPLC-UV/ELSD法测定

建立了HPLC-紫外检测器串联蒸发光散射检测器同时测定大鼠尾静脉注射肌萎灵冻干粉后胆汁中的人参皂苷Rg1、Re,淫羊藿苷和朝藿定A、B、C。采用C_(18)色谱柱,乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长220 nm;蒸发光散射检测器检测:漂移管温度80℃,气体压力25 psi。人参皂苷Rg1、Re,淫羊藿苷和朝藿定A、B、C分别在11.64～698.1、8.59～515.4、2.70～323.4、1.53～183.6、1.04～499.2和1.37～878.4μg/ml浓度范围内线性关系良好,提取回收率为89.53～99.54%,日内和日间RSD均小于9.28%,相对误差-9.85%～5.10%。