绝经后女性盆底功能障碍患者肛提肌中抗肌营养不良蛋白和结蛋白表达及意义

目的探讨抗肌营养不良蛋白和结蛋白mRNA的表达与绝经后女性盆底功能障碍(PFD)的关系。方法选择30例压力性尿失禁患者(SUI组)、30例盆底组织膨出患者(POP组)及6例无SUI和POP的直肠癌患者(对照组),术中行肛提肌活组织检查(活检),应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的方法检测肛提肌中抗肌营养不良蛋白和结蛋白的表达。结果 POP组和SUI组肛提肌中肌营养不良蛋白和结蛋白mRNA表达较对照组均降低(P<0.01)。POP组和SUI组比较,肛提肌中抗肌营养不良蛋白和结蛋白mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝经后女性盆底功能障碍性疾病的发生与女性肛提肌中抗肌营养不良蛋白及结蛋白的表达降低有关。

金属蛋白酶组织抑制剂对涎腺腺样囊性癌表达β-肌营养不良蛋白聚糖的影响

目的研究涎腺腺样囊性癌(SACC)中β-肌营养不良蛋白聚糖(β-DG)的表达情况,探讨金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)对SACC细胞表达β-DG的影响。方法采用免疫细胞化学染色法检测经不同浓度(10、15、20、25μmol.L-)1TIMPs作用后SACC肺高转移株ACC-M和肺低转移株ACC-2中β-DG的表达情况,以未经TIMPs作用的ACC-M和ACC-2细胞作为对照。收集7例SACC患者的肿瘤组织样本,以10例正常涎腺组织作为对照,采用免疫组织化学染色法检测β-DG的表达情况。结果未经TIMPs作用前,ACC-2和ACC-M细胞均未见β-DG表达,经不同浓度TIMPs作用后,ACC-2和ACC-M细胞β-DG表达均为阳性。10例正常涎腺组织中,β-DG主要表达于腺泡的基膜上;SACC组织的癌巢周围及癌细胞中β-DG表达阴性。结论 SACC细胞外基质和细胞骨架连接处的β-DG发生了断裂,可能使其更容易发生侵袭和转移,而TIMPs能够逆转β-DG的表达,为治疗SACC提供了新思路。

DMD、BMD患者骨骼肌、皮肤立毛肌肌营养不良蛋白同时欠损

目的研究、对比肌营养不良蛋白(dystrophin)在杜兴型肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)和贝克型肌营养不良(Becker muscular dystrophy,BMD)患者活检骨骼肌、皮肤立毛肌中的表达。方法用肌营养不良蛋白三个不同区域的单克隆抗体(Dystrophin-N、-C、-R)对11例DMD患者,5例BMD患者和3例其他神经肌病患者同时行活检骨骼肌、皮肤免疫组织化学染色分析。结果与对照例相比,11例DMD患者抗Dystro-phin-N、-C、-R单克隆抗体免疫组织化学染色显示:骨骼肌肌纤维膜Dystrophin-N、-C、-R呈完全欠损;皮肤立毛肌Dystrophin-N、-R完全欠损,Dystrophin-C轻微表达。5例BMD患者抗Dystrophin-N、-C、-R单克隆抗体免疫组织化学染色显示:肌营养不良蛋白在骨骼肌肌纤维膜和皮肤均呈不完全欠损。结论DMD和BMD患者肌营养不良蛋白在骨骼肌肌纤维膜、皮肤立毛肌呈完全/不完全欠损,与骨骼肌活检相同,皮肤活检也是分子病理学诊断DMD、BMD简便、易行、可靠的方法。

肌营养不良蛋白聚糖复合物在RT4细胞中的表达

目的 观察大鼠神经鞘瘤细胞 (RT4)中肌营养不良蛋白聚糖复合物的表达状况。方法 常规培养RT4细胞 ,应用免疫荧光染色、蛋白电泳、免疫印迹等方法观察肌营养不良蛋白聚糖复合体在 RT4细胞中的表达并鉴定分子量。结果 肌营养不良蛋白聚糖复合体表达于 RT4细胞的细胞膜上。结论 肌营养不良蛋白聚糖复合体对于

DMD/BMD肌细胞抗肌营养不良蛋白免疫荧光组化研究

目的:研究Duchenne/Becker型肌营养不良症(DMD/BMD)患者肌细胞中抗肌营养不良蛋白(dystrophin)的表达及其诊断意义。方法:采用免疫荧光抗体染色技术对5例DMD,2例BMD肌细胞中抗肌营养不良蛋白进行检测,以2例正常人的肌细胞作为以照。结果:对照组肌细胞膜上染色阳性,胞核及胞浆呈阴性;DMD患者肌膜完全无显色;BMD患者染色弱阳性,可见沿肌细胞膜分布的间断斑片状荧光带。结论:抗肌营养不良蛋白缺乏或表达异常是DMD/BMD基本病理基础。应用免疫荧光抗体染色法检测抗肌营养不良蛋白。

肌营养不良蛋白表达对肌营养不良症的诊断意义

目的 探讨肌营养不良蛋白在肌营养不良症患者肌组织中表达的意义。方法 运用免疫组化法对 12例 Duchenne型肌营养不良症 (DMD)患者及 5例 Becker型肌营养不良症 (BMD)患者的肌组织中肌营养不良蛋白的表达进行分析 ,并用 6例非神经肌肉疾病患者的肌组织作为对照。结果 对照组 6例肌组织标本中均可见肌营养不良蛋白表达 ,其阳性染色勾画出肌细胞的边界 ,胞核及胞浆呈阴性。在 DMD中有 10例 (83.33% )肌细胞膜肌营养不良蛋白不表达。BMD中 3例 (6 0 % )可见沿肌细胞膜分布的不连续斑片状弱阳性染色。结论 肌营养不良蛋白的缺失或异常表达 ,是 DMD/ BMD型较为特异的改变。运用免疫组化法检测患者肌组织中肌营养不良蛋白的表达 ,可为 DMD/

难治性癫痫细胞模型中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Vb和肌营养不良蛋白聚糖基因的表达变化及意义

目的探讨难治性癫痫细胞模型(Sombati癫痫细胞模型)中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Vb(GnT-Vb)和肌营养不良蛋白聚糖(dystroglycan)基因的表达变化及意义。方法取新生24 h内SD乳鼠,分离其双侧海马进行原代海马神经元培养。将培养至第14天的海马神经元分为对照组和模型组,模型组利用低镁细胞外液培养3 h制备Sombati癫痫细胞模型。通过实时定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)方法测定对照组和模型组造模后第1天和第4天GnT-Vb和dystroglycan的基因表达水平。结果造模后第1天,模型组GnT-Vb基因表达水平低于对照组(P<0.05);而两组dystroglycan基因表达水平间无差异(P>0.05)。造模后第4天,模型组GnT-Vb、dystroglycan基因表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论 GnT-Vb和dystroglycan基因在Sombati癫痫细胞模型中表达呈增高趋势,并呈现一定时间的动态变化;GnT-Vb和dystroglycan基因可能同时参与了难治性癫痫的形成过程。

肌营养不良蛋白表达在萎缩性肌病鉴别诊断中的意义

目的探讨肌营养不良蛋白(Dystrophin蛋白)在萎缩性肌病中的表达及其临床意义。方法对均表现为双下肢近端肌肉萎缩的43例肌营养不良患者、3例其他神经肌肉疾病患者(包括1例脂质沉积性肌病、2例运动神经元病)及5例正常对照者的骨骼肌标本进行Dystrophin蛋白免疫组化染色。结果 Duchenne型肌营养不良(DMD)患者肌细胞膜上无显色,Becker型肌营养不良(BMD)患者全部为弱阳性,BMD/LGMD(肢带型肌营养不良)患者中6例肌细胞膜上显色浅淡、不连续或呈斑片状,其余15例患者肌细胞膜上染色正常;2例运动神经元病患者中1例肌细胞膜显色浅淡、呈斑片状,另1例染色正常。脂质沉积性肌病患者和正常对照肌细胞膜上染色均正常。结论对于存在双下肢近端肌肉萎缩的临床表现相似的肌病患者,Dystrophin免疫组化染色可以将其大致区分,对早期预测肢体功能影响程度及正确地进行遗传咨询具有重要意义。

肌营养不良蛋白聚糖在胃癌原发灶与转移灶中的表达及临床意义

目的探讨肌营养不良蛋白聚糖（DG）在胃癌发生、发展中的表达变化及其与临床病理特征的关系。方法选择20例经手术证实的合并淋巴结及远处转移且病理资料完整的胃癌患者，分别对患者的正常胃黏膜、胃癌原发灶、淋巴结转移灶以及远处转移灶的石蜡标本采用免疫组织化学染色（SP法）检测DG亚基（α—DG）的表达，并分析其与相关临床和病理特征之间的关系。结果α—DG在正常黏膜、胃癌原发灶、转移淋巴结及远处转移灶的阳性表达率分别为95％、70％、25％、5％；原发灶中α—DG的阳性表达率显著低于正常黏膜，且高于淋巴结转移灶及远处转移灶（P〈0．01）；OC—DG在印戒细胞癌中的阳性表达率低于乳头状腺癌、管状腺癌和低分化腺癌（P〈0．05）；而OC—DG在不同大体病理分型、肿瘤分化程度、浸润深度及淋巴结分期者之间阳性表达率的差异则均无统计学意义（均P〉0．05）。结论检测DG在胃癌组织中的表达水平有助于了解其生物学行为，且DG在胃癌的发生和发展中可能起重要作用。

肌营养不良蛋白聚糖在限制心肌运动负荷损伤中的必要作用

目的探讨肌营养不良蛋白聚糖（Dystroglycan，DG）与心肌运动负荷损伤的关系。方法对心肌组织特异性DG敲除的基因突变小鼠及其野生型对照小鼠实施平板运动试验，比较两组由运动负荷引起的心肌损伤程度。结果基因突变型小鼠的细胞膜破损，cTnI的降解率在突变型小鼠为13．60％，显著高于对照野生型小鼠6．81％的降解率，P〈O．01；cTnT的降解率在突变型小鼠为21．20％，显著高于对照野生型小鼠10．55％的降解率，P〈O．01。结论DG在限制心肌运动负荷损伤中起着必不可少的关键性心肌保护作用。

肌营养不良蛋白在假肥大肌营养不良双生子肌组织中的表达

[目的]假肥大肌营养不良是男性最常见的X-连锁隐性遗传病,而肌营养不良蛋白(dystrophin)在DMD患者肌细胞上的表达异常是导致该病发生的最根本的病理生理机制。[方法]应用兔抗Anti5-7多克隆抗血清及免疫组化技术检测dystrophin在两对DMD孪生子肌组织中的表达。[结果]显示dystrophin在无症状的孪生子肌组织中存在着阳性表达,而在DMD患儿肌组织中则表达缺失。[结论]检测肌细胞膜上dystrophin蛋白的表达对DMD患者的诊断及预后判定有着重要的应用价值。

热休克因子1对肌营养不良蛋白71的表达调控及其可能机制

目的热休克因子1(heat shock factor-1,HSF1)是热休克反应中启动各种热休克蛋白(heat shock pro-tein,HSP)的诱导表达最重要的转录因子。肌营养不良蛋白71(dystrophin-71,Dp71)是肌营养不良蛋白表达最广泛的一个剪切本,在细胞信号传递、细胞生长等方面具有一定功能。HSF1是否可以调控DP71蛋白的表达,尚不清楚。本文对此问题进行了研究。方法生物信息学TESS分析Dp71启动子区;Western blot、RT-PCR等检测HSF1基因敲除小鼠脑、肺、心脏等器官Dp71表达;Hela细胞与A549细胞转染HSF1过表达与表达抑制质粒,然后检测Dp71表达水平。结果 TESS分析显示Dp71的启动子区有一个高评分的HSF1结合位点。HSF1基因敲除小鼠中,脑、肺、心脏等器官Dp71表达下降。转染HSF1过表达与表达抑制质粒后,Hela细胞与A549细胞中的Dp71表达水平出现相应变化。结论 HSF1极有可能是调控Dp71蛋白表达的一个转录因子,其调控机制与生物学意义有待进一步研究。

表现为急性呼吸衰竭的强直性肌营养不良1型一例

强直性肌营养不良1型(DM1)是一种常染色体显性遗传、多系统受累的肌营养不良,临床上主要表现为进行性肌肉无力、肌肉萎缩及肌强直。本文报道一例以急性呼吸衰竭为主要表现就诊的33岁DM1女性患者。神经电生理提示肌源性损害合并部分神经源性损害,股外侧肌活检提示肌细胞存在大量核内移。基因检测提示19号染色体DMPK基因CTG重复扩增(847±76)次,从而明确诊断为DM1。本例报道拓宽了临床医师对DM1不典型临床表现的认识,从而避免漏诊误诊。

杜氏肌营养不良症的治疗研究进展

杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy, DMD)是一种x连锁的进行性致死性神经肌肉疾病,这种疾病无法治愈,预期寿命在30岁至50岁之间,死亡与心脏或呼吸并发症有关。近年来,DMD的治疗也取得了一些重要进展,极具前景的CRISPR/cas9介导的基因组编辑有望从基因水平彻底治愈DMD,本文将对DMD治疗的研究现状进行综述,并分析不同治疗策略在其治疗中的研究进展和潜力。

抗肌营养不良蛋白通过MAPK信号通路参与特发性肺纤维化发病机制的研究

目的结合生物信息学分析结果研究抗肌营养不良蛋白(DMD)在特发性肺纤维化(IPF)中的作用及分子机制。方法从GEO数据库下载IPF数据集GSE47460、GSE150910及GSE135893,验证DMD表达,随后下载IPF数据集GSE27957、GSE28042和GSE93606,分析DMD表达水平与IPF患者预后的关系。挑选GSE150910数据集,根据DMD表达水平的中位数,将样本分为DMD高表达组和DMD低表达组,采用R 4.1.3软件对2组基因进行差异基因分析,根据差异基因进行功能富集分析和通路预测。采用随机数字表法,将12只6~8周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组,每组6只。实验组小鼠气管内滴注博来霉素(BLM)构建肺纤维化模型。取小鼠肺组织进行免疫组织化学染色和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR),检测DMD的蛋白和mRNA表达水平。将A549细胞分为NC-shRNA组、BLM组、NC-shRNA+BLM组和DMD-shRNA+BLM组。应用蛋白质印迹法检测各组衰老相关蛋白p21、凋亡蛋白Bax、MAPK信号通路相关蛋白以及Ⅰ型胶原蛋白的表达,并应用衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测各组衰老细胞所占的比例,用流式细胞术检测各组凋亡细胞所占的比例。结果DMD在GSE47460、GSE150910及GSE135893数据集中均为高表达,并且主要表达于Ⅱ型肺泡上皮细胞内,高表达DMD患者预后更差。GSE150910数据集中,DMD高表达组和DMD低表达组共有147个差异基因,上述基因主要富集在细胞衰老和凋亡的生物学过程,富集的通路得分最高的是MAPK信号通路。RT-qPCR及免疫组织化学染色结果提示DMD在BLM诱导的小鼠肺纤维化组织中为高表达(均P<0.05)。BLM组A549细胞中的DMD蛋白表达高于NC-shRNA组和DMD-shRNA+BLM组(均P<0.05)。BLM组A549细胞的p21、Bax、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白以及Ⅰ型胶原蛋白表达水平高于NC-shRNA组和DMD-shRNA+BLM组(均P<0.05)。衰老相关β-半乳糖苷酶染色结果提示BLM组A549细胞的衰老细胞的比例高于NC-shRNA组和DMD-shRNA+BLM组(均P<0.05)。流式细胞术结果提示BLM组A549细胞的凋亡细胞的比例高于NC-shRNA组和DMD-shRNA+BLM组(均P<0.05)。结论DMD在BLM诱导的小鼠肺纤维化组织内呈高表达,干扰DMD可以通过MAPK信号通路减轻BLM诱导的A549细胞衰老和凋亡,从而抑制IPF的进展。

肌营养不良蛋白病遗传学诊断专家共识

Dystrophin基因的变异可导致X连锁隐性遗传的肌肉疾病,包括进行性杜兴(杜氏)肌营养不良(DMD)、贝克(贝氏)肌营养不良(BMD)和扩张型心肌病,严重威胁人类的生命和健康。遗传学诊断对于这类患者的诊断、治疗、预防具有十分重要的价值。如何合理选择、规范应用各项基因检测技术是临床医师必须掌握的技能。本共识经过同行专家的共同探讨,结合国内外经验和指南,从遗传学诊断角度,针对dystrophin基因检测技术的选择、检测策略、检测流程等方面提供指导性建议。

肌营养不良蛋白聚糖的研究现状

肌营养不良蛋白聚糖是一种跨膜糖蛋白,广泛表达于各种组织的基底膜和细胞膜交界面。肌营养不良蛋白聚糖基因在骨骼肌等多种类型的细胞中表达,虽然肌营养不良蛋白聚糖基因突变本身未发现与疾病有关。但是,肌营养不良蛋白聚糖翻译后加工(主要是糖基化)水平的改变会导致肿瘤等疾病。文中对肌营养不良蛋白聚糖的结构和作用、肌营养不良蛋白聚糖与疾病的关系、肌营养不良蛋白聚糖的研究进展进行综述。

低氧性微损伤时大鼠腓肠肌抗肌营养不良蛋白和结蛋白的变化

为了观察低氧性微损伤时大鼠腓肠肌抗肌营养不良蛋白(dystrophin)和结蛋白(desmin)的变化特征及其调节机制,本实验将雄性Sprague-Dawley大鼠40只随机分为常氧对照组和10%氧浓度的低氧刺激1、2、4、7d组(n=8),每组各取2只大鼠进行伊文氏蓝(EBD)腹腔注射来检测肌纤维膜通透性,同时用异染ATP酶法鉴别EBD阳性肌纤维的类型;其余6只采用Western blot、RT-PCR和荧光法进行蛋白含量和基因表达等测定。结果显示,低氧第1天即出现EBD阳性纤维,主要为ⅡA和ⅡB型。各低氧组的EBD阳性细胞率和平均光密度均大于常氧对照组(P<0.05)。低氧第1天dystrophin和desmin蛋白显著增加或有增加趋势,第2天有所下降,第4天又急剧增加,第7天恢复至接近对照组水平,其变化呈波动性起伏;低氧组基因表达在第2天开始大幅度增加,与蛋白含量变化趋势相对应。除了低氧第2天外,其余各组钙激活中性蛋白酶(calpain)总活性均高于常氧对照组。热休克蛋白HSP70和HSP90分别在低氧第4天和第7天增加(P<0.05)。上述结果表明,机械应力并非细胞膜完整性破坏的唯一原因,但是仅靠低氧引起腓肠肌微损伤时的dystrophin和desmin变化与离心运动不一样,二者蛋白含量并没有出现明显的丢失。低氧性肌损伤的表现形式可能与肌纤维动员类型以及calpain活性有密切关系。

低氧训练诱导大鼠腓肠肌抗肌营养不良蛋白和代谢酶变化及延长高速力竭运动时间

本文旨在探讨抗肌营养不良蛋白(dystrophin)和膜通透性在低氧训练中的变化及其作用。8周龄的Sprague Dawley (SD)大鼠共72只,随机分为4组:常氧安静(normoxic non-train, NC)组、常氧运动(normoxic train, NT)组、低氧安静 (hypoxic non-train, HC)组、低氧运动(hypoxic train, HT)组;每组又随机分为3个亚组:无力竭亚组、低速力竭亚组和高速力竭亚组。常氧运动组和低氧运动组进行4周运动训练;低氧组在氧浓度为12.7% (相当于海拔高度4 300 m)的常压低氧环境下生活训练。训练4周后,对各组的无力竭亚组取材,分别测定腓肠肌组织的乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)活性和dystrophin含量以及血清LDH活性。其余大鼠分别进行力竭测验,记录力竭时间。结果显示,相对常氧运动组,低氧运动组大鼠体重增长减缓,而骨骼肌dystrophin水平无显著变化。低氧运动对MDH和LDH活性的作用明显。氧浓度和运动训练及其交互作用对MDH均有显著性影响(P<0.05),腓肠肌LDH仅受氧浓度的影响(P<0.05),而血LDH受氧浓度和运动训练交互作用的影响(P<0.05),表现为肌LDH活性下降,血清LDH活性增高。对于大鼠力竭时间,力竭测验速度、运动训练及其交互作用有显著影响(P<0.05),运动训练和氧浓度的交互作用也有显著影响(P<0.05),而氧浓度的作用没有显著影响。低氧运动组的高速力竭亚组力竭总时间大于常氧运动组的高速力竭亚组,而且在力竭测试中疲劳出现较早但恢复迅速。以上结果提示,低氧运动能够有效延长大鼠高速力竭运动的时间,其作用机制可能与低氧运动后膜通透性增加而引起的血LDH含量上升有关。

Duchenne型肌营养不良症患儿肌膜抗肌萎缩蛋白-糖蛋白复合物表达研究

研究背景离心运动或高张力运动可以损伤骨骼肌结构,使抗肌萎缩蛋白(dystrophin)缺失,并继发性引起抗肌萎缩蛋白-糖蛋白复合物(DGC)缺乏,表明dystrophin蛋白表达下降是离心运动对骨骼肌损伤的关键标记之一。DMD基因突变致dystrophin蛋白缺失继而导致Duchennne型肌营养不良症,表明Duchenne型肌营养不良症患儿自出生起即处于骨骼肌离心运动所承载的高张力力量传递通路的自然状态。本研究探讨Duchenne型肌营养不良症患儿骨骼肌功能进行性下降与DGC复合物表达水平之间的关系。方法共197例9天至12岁Duchennne型肌营养不良症患儿,采用免疫荧光染色观察肱二头肌肌膜DGC复合物中的肌营养不良蛋白聚糖(α-和β-DG),肌聚糖蛋白(α-、β-、γ-和δ-SG),互生蛋白(syntrophin)表达变化。结果各年龄段Duchenne型肌营养不良症患儿肌膜α-和β-DG,α-、β-、γ-和δ-SG,syntrophin蛋白均呈现不同程度缺乏,但与增龄伴随的肌力下降并无关联性。结论 DGC复合物缺乏可能在出生前即已发生,建议Duchenne型肌营养不良症患儿在日常生活活动和康复训练中避免离心运动和抗高阻力动作对骨骼肌的进一步损伤。