用基因缺陷、蛋白质空间结构改变浅析Duchenne型肌营养不良症发病机制

目的:研究dystrophin基因缺陷、蛋白疏水性改变和空间结构改变与临床表型的关系,从分子水平探索Duchenne型肌营养不良症(DMD)发病机制。方法:分析59例缺失型突变的DMD/BMD患者基因检测结果,以信息生物学方法分析dystrophin蛋白疏水性和三维结构改变与临床表型的关系。结果:50例移码突变均为DMD。累及第3疏水峰的5例整码突变4例为DMD,1例BMD。3号外显子缺失后dystrophin的氨基端空间位置发生扭转,影响dystrophin与肌钙蛋白结合而致病。结论:肌营养不良的临床表型轻重与缺失是否破坏阅读框、累及第3疏水峰以及蛋白空间结构改变有关。

持续非卧床腹膜透析与蛋白质营养不良的相关因素分析

蛋白质营养不良是尿毒症腹膜透析的重要并发症，它可以显著增加心血管意外的发生率和尿毒症患者的病死率。本文回顾性分析腹膜透析（腹透）患者残余肾功能、Kt／V、腹膜转运系数、腹透剂量、腹透蛋白丢失量与血清白蛋白的相关性，以探讨它们在腹膜透析患者营养不良中的作用。

假肥大肌营养不良症患儿腓肠肌组织中抗肌萎缩蛋白相关蛋白mRNA表达的检测

目的:探讨抗肌萎缩蛋白相关蛋白(Utrophin)在Duchenne型肌营养不良症(DMD)与Becker型肌营养不良症(BMD)患儿腓肠肌组织中的表达水平及临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR方法检测肌营养不良症组(n=31)[包括DMD组(n=24)与BMD组(n=7),DMD组又分为DMD1组(n=6)、DMD2组(n=12)、DMD3组(n=6)]与对照组(n=21)腓肠肌组织中抗肌萎缩蛋白相关蛋白(Utrophin)及抗肌萎缩蛋白(Dystrophin)mRNA的表达水平,分析肌营养不良症患儿腓肠肌组织中Utrophin mRNA表达水平与Hammersmith功能运动评分(HFMS)之间的相关性。结果:与对照组比较,肌营养不良症组腓肠肌组织中Utrophin mRNA的表达水平升高(P=0.002)。与BMD组比较,DMD组Utrophin mRNA的表达上调(P=0.003)。与DMD1组比较,Utrophin mRNA在DMD2组与DMD3组的表达水平上调,其中以DMD3组上调最为显著(P<0.05)。肌营养不良症患儿Utrophin mRNA的表达水平与HFMS呈正相关(rS=0.671,P=0.003)。结论:Utrophin在肌营养不良症患儿腓肠肌组织中表达上调,Utrophin可能替代成熟骨骼肌纤维中Dystrophin的部分功能,在阻遏DMD进展过程中起着重要作用。

中药合用不同浓度蛋白质对营养不良模型大鼠呼吸肌的影响

目的观察健脾补肾中药合用不同浓度蛋白质对营养不良(ND)动物呼吸肌的治疗作用。方法通过限量饲喂复制营养不良大鼠模型,模型大鼠被分为高蛋白(HP)组、低蛋白(LP)组、中药加高蛋白(HC)组和中药加低蛋白(LC)组,观察动物膈肌最大颤搐收缩力(Pt)、最大强直性收缩力(Po)、快颤搐(FT)纤维、慢颤搐(ST)纤维及膈肌超微结构等变化。结果 ND组大鼠体质量、膈重显著下降;各治疗组动物膈重、Pt、Po、FT纤维、ST纤维等指标不同程度改善。尤其是中药对膈重,Pt、FT纤维、ST纤维恢复作用显著(P<0.05),并与蛋白质有显著协同治疗作用(P<0.05)。HC组动物的膈肌超微结构改变最明显。结论中药合用不同浓度蛋白质对动物营养不良呼吸肌具有明显治疗作用。

肝硬化营养不良及肌少症治疗研究进展

营养不良是由营养摄入不足或过量引起的组织或器官功能障碍的一种临床综合征。营养不良在肝硬化人群中发生率约为20%~50%^([1,2])。肌少症是指一种进行性和广泛性骨骼肌疾病,肌少症的诊断包括肌肉质量、肌肉力量、肌肉表现三方面,目前大部分研究仅使用肌肉质量的测量来诊断肌少症。临床研究表明,肝硬化合并肌少症时往往提示感染风险增加^([3])、住院时间延长等^([4])。肌少症发生率与肝硬化严重程度密切相关,在Child-Pugh A~C级患者,其发病率分别为10%~20%、30%~40%和50%~70%。

TNF-α对慢性阻塞性肺疾病模型鼠营养状态和呼吸肌蛋白质分解代谢的影响

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型鼠的营养状态和呼吸肌蛋白质分解代谢率的影响。方法将90只健康Wistar大鼠随机分为模型组(A)70只,对照组(B)20只。采用气管内注入猪胰弹性蛋白酶、熏香烟和限制营养的方法建立COPD鼠模型和COPD营养不良鼠模型。模型制作成功后,将A组分为COPD营养正常组(A1),COPD营养不良组(A2)和COPD营养不良干预组(A3)。A3组采用尾静脉注射TNF-αMcAb 0.1 mg/kg,进行干预。酶联免疫吸附法测定大鼠血清、呼吸肌匀浆中TNF-α含量,自动生化仪测定血浆葡萄糖、白蛋白、甘油三酯含量,反相高效液相色谱荧光法测定呼吸肌中三甲基组氨酸(3-MH)、酪氨酸(Tyr)含量。结果 1:A2组血清和呼吸肌匀浆TNF-α含量和血浆葡萄糖、甘油三酯明显高于B、A1和A3组(P<0.01);A2组膈肌重量,白蛋白含量明显低于B、A1和A3组(P<0.01);2:A2组呼吸肌匀浆中3-MH、Tyr含量均明显高于B、A1和A3组(P<0.01);3:A2组呼吸肌TNF-α含量与3-MH、Tyr含量呈明显正相关(R=0.866,P<0.01;R=0.883,P<0.01),TNF-αMcAb干预后,蛋白质分解代谢率降低。结论 TNF-α是引起COPD鼠发生营养不良和呼吸肌蛋白质分解代谢率增高的因素之一。

Duchenne型肌营养不良症患儿肌膜抗肌萎缩蛋白-糖蛋白复合物表达研究

研究背景离心运动或高张力运动可以损伤骨骼肌结构,使抗肌萎缩蛋白(dystrophin)缺失,并继发性引起抗肌萎缩蛋白-糖蛋白复合物(DGC)缺乏,表明dystrophin蛋白表达下降是离心运动对骨骼肌损伤的关键标记之一。DMD基因突变致dystrophin蛋白缺失继而导致Duchennne型肌营养不良症,表明Duchenne型肌营养不良症患儿自出生起即处于骨骼肌离心运动所承载的高张力力量传递通路的自然状态。本研究探讨Duchenne型肌营养不良症患儿骨骼肌功能进行性下降与DGC复合物表达水平之间的关系。方法共197例9天至12岁Duchennne型肌营养不良症患儿,采用免疫荧光染色观察肱二头肌肌膜DGC复合物中的肌营养不良蛋白聚糖(α-和β-DG),肌聚糖蛋白(α-、β-、γ-和δ-SG),互生蛋白(syntrophin)表达变化。结果各年龄段Duchenne型肌营养不良症患儿肌膜α-和β-DG,α-、β-、γ-和δ-SG,syntrophin蛋白均呈现不同程度缺乏,但与增龄伴随的肌力下降并无关联性。结论 DGC复合物缺乏可能在出生前即已发生,建议Duchenne型肌营养不良症患儿在日常生活活动和康复训练中避免离心运动和抗高阻力动作对骨骼肌的进一步损伤。

肌营养不良症模型鼠神经元型一氧化氮合酶抑制蛋白的表达及定位

目的:观察肌营养不良症模型鼠(mdx)肌肉组织神经元型一氧化氮合酶抑制蛋白(proteininhibitorofnNOS,PIN)的表达及定位,以及与dys-trophin复合物及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的关系。方法:取mdx鼠(18只,实验组)和C57BL/10ScSn鼠(15只对照组)骨骼肌作常规染色,比较其组织学改变;同时对mdx鼠,C57BL鼠骨骼肌作Northernblot和固定化蛋白质印迹法(Westernblot)及免疫组化分析。结果:Northernblot分析发现,mdx鼠肌肉组织PINmRNA显著高于C57BL/10ScSn鼠,对照组骨骼肌有少量PINmRNA表达,其杂交斑点A值为1352.4±219.7,mdx组杂交斑点灰度A值为2724.2±394.6,两者差异有非常显著性意义(t=11.985,P<0.05);固定化蛋白质印迹法(Westernblot)显示,PIN蛋白的杂交信号在mdx组与对照组均出现在约8ku处,两者的吸光度平均值(A)几乎相等,mdx组的杂交斑点灰度A值为2378.2±486.7,对照组PIN蛋白的杂交斑点灰度A值为2438.5±494.9,两者差异无显著性意义(t=0.352,P>0.05);免疫组化及激光共聚焦扫描显微镜均揭示,在C57BL/10ScSn鼠肌纤维中,PIN蛋白在肌膜、周边核附近呈强阳性表达,肌质中弱表达,而mdx鼠的PIN蛋白在肌膜及中心核附近呈强阳性表达,细胞质中亦弱表达;PIN于mdx鼠肌纤维表达明显,而nNOS及dystrophin复合物表达明显减少?

蛋白质对呼吸肌营养治疗的实验研究

本实验观察了营养不良大鼠膈肌功能及形态学变化。其膈肌萎缩、Pt、Po显著下降,FT纤维萎缩重于ST纤维,肌原纤维疏松,线粒体肿胀、空化。分组经肠道给予高蛋白和低蛋白营养治疗4周,两组动物膈肌Pt、Po及形态学改变均可恢复。高蛋白治疗组膈重、隔肌Po、FT纤维横断面积恢复显著优于低蛋白治疗组,接近正常对照组。高蛋白营养治疗是呼吸肌康复的一种有效手段。

以睡眠相关呼吸功能不全为突出表现的儿童硒蛋白N1相关肌病1例报告

目的探讨以睡眠相关呼吸功能不全为突出表现的硒蛋白N1相关肌病(SEPN1-RM)的临床特征。方法分析以睡眠相关呼吸功能不全为突出表现的1例SEPN1-RM患儿的临床资料,对患儿及其父母外周血基因组DNA进行全外显子高通量测序,并进行相关文献回顾。结果患儿起病隐匿,进展缓慢,活动后乏力;自8岁跳跃困难,肌病面容,脊柱侧弯,睡眠相关呼吸功能不全,限制性通气功能障碍;肌肉MR显示肌群广泛性肌肉萎缩,肌电图示肌源性损害。基因检测发现SEPN1基因复合杂合变异,c.1396(exon11)C>T(父源),c.156(exon1)_c.183+7(IVS1)delCGCCGAGGCCCAGGCGGCCGCGCGGCAGGTC CGGG(母源)。结论对于睡眠相关呼吸功能不全、肌力下降、脊柱畸形、限制性通气功能障碍患儿,注意考虑SEPN1-RM。基因检查可为确诊SEPN1-RM提供依据。

CRPPA基因变异导致肢带型肌营养不良症1例

报告1例CRPPA基因变异所致常染色体隐性遗传性肢带型肌营养不良症患者,总结CRPPA基因相关肌病的临床特点和致病变异谱。患者主要临床表现为双下肢无力7年,进行性加重。血清肌酸激酶水平轻度增高。肌电图提示肌源性损害。肌肉MRI表现为双侧大腿、小腿多发肌群信号异常。骨骼肌活检组织电镜下可见肌细胞胞浆内肌浆网轻度扩张,小脂滴轻度增多,可见少量萎缩肌细胞。基因检测提示携带CRPPA基因c.1114_1116delGTT(p.V372del)纯合变异。患者父母携带该位点杂合变异。根据ACMG指南将该变异分类为致病性变异。患者明确诊断为肌营养不良-抗肌萎缩相关糖蛋白病C7型。本文拓展了CRPPA基因和抗肌萎缩相关糖蛋白病的遗传变异谱和临床表型谱。

强直性肌营养不良骨骼肌Akt通路活性与病理改变的相关性分析

目的:研究强直性肌营养不良(myotonic dystrophy,DM)患者骨骼肌Akt信号通路活性改变及与骨骼肌病理改变之间的相关性。方法:7例经临床、电生理和病理检查确诊的DM1型(DM1)患者为实验组,7例无骨骼肌病理改变的患者为对照组。实验组患者发病年龄6～35岁,病程1～20年,临床均表现为肢体远端为主的肌强直、肌无力和肌萎缩,肌酸激酶在271～1325U/L之间,肌电图显示肌源性损害伴随大量强直电位发放。所有患者均进行了肌肉活检病理检查,并用Westernblot测定总Akt、磷酸化Akt(p-Akt)和其下游信号分子磷酸化核糖体蛋白S6激酶(ribosomalproteinS6kinase,p70s6k)的活性,比较骨骼肌Akt、p-Akt、磷酸化p70s6k(p-p70s6k)活性在实验组与对照组之间的差异,及实验组骨骼肌总Akt、p-Akt、p-p70s6k活性与患者肌纤维肥大、核内移和肌浆块等病理改变之间的相关性。结果:肌肉活检发现肌营养不良改变伴随大量核内移现象以及肌膜下出现嗜碱性胞浆块,DM1患者的总Akt、p-Akt、p-p70s6k及p-Akt/Akt的光密度值显著高于对照组(Akt:t=4.110,P=0.006;p-Akt:t=4.408,P=0.004;p-p70s6k:t=4.113,P=0.005;p-Akt/Akt:t=4.055,P=0.002)。实验组总Akt、p-Akt、p-p70s6k的活性水平和肌纤维肥大均呈显著正相关(Akt:r=0.825,P=0.015;p-Akt:r=0.914,P=0.004;p-p70s6k:r=0.916,P=0.004),与肌浆块以及核内移的出现频率无显著相关。结论:DM1患者的骨骼肌存在Akt信号通路的广泛活化,并可能因此导致该病的肌纤维病理性肥大。

杜氏肌营养不良症(DMD)及其动物模型研究进展

杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)属于X连锁隐性遗传病。DMD基因是人类最大基因,突变机制复杂。随着分子生物学的研究进展,对DMD的基因和其编码的抗肌萎缩蛋白(dystrophin)及抗肌萎缩蛋白相关蛋白(utrophin)的认识不断深入。本文就DMD的病理学特点,Dys基因结构、表达、功能,DMD突变及其相关检测技术,DMD实验动物模型及相关治疗的研究进展进行综述。

干腌牛肉加工过程中蛋白质变化对品质的影响

以原料期、腌制期、风干期、发酵中期、发酵后期、成熟期的干腌牛肉为研究对象,对产品色泽、质构、游离氨基酸含量及蛋白质变化进行测定,以期明确干腌牛肉加工过程中蛋白质氧化、降解及结构变化对产品品质的影响。结果表明:干腌牛肉色泽呈暗红,硬度、胶着性、咀嚼性、黏性和回复性呈显著增加(P<0.05)趋势;加工过程中肌浆蛋白和肌原纤维蛋白羰基含量显著增加(P<0.05)、巯基含量显著下降(P<0.05),与原料期相比,成熟期的羰基含量分别增加了53.51%、36.83%,巯基含量减少了40.70%、49.27%;SDS-PAGE凝胶电泳图谱显示蛋白质在加工过程中均发生显著降解;拉曼光谱分析表明,蛋白质结构由有序向无序变化。加工过程中游离氨基酸总含量整体呈显著上升趋势(P<0.05),以谷氨酸、赖氨酸和天冬氨酸增长最显著(P<0.05),分别增长了51.38%、42.77%、42.47%;相关性分析显示,干腌牛肉色泽与咀嚼性、黏性、羰基、巯基、α-螺旋、β-转角具有显著相关性,蛋白质氧化、降解使蛋白质结构发生变化,进而影响产品的食用品质。综上所述,干腌牛肉加工过程中蛋白质生化变化对产品品质有促进作用。

Duchenne型肌营养不良症中神经元型一氧化氮合酶和utrophin的表达水平

目的研究神经元型一氧化氮合酶(n NOS)和抗肌萎缩蛋白相关蛋白(utrophin)在Duchenne型肌营养不良症(DMD)中的表达水平及与病情的关系,并探讨DMD中抗肌萎缩蛋白(dystrophin)、n NOS、utrophin 3者间的相关性。方法收集DMD患者26例,并分为轻症组(19例)和重症组(7例),收集正常对照患者21例,利用免疫荧光方法检测n NOS和utrophin的表达并进行统计分析。结果 DMD患者中23例n NOS呈完全缺失、3例明显减少,22例DMD患者utrophin表达增多,4例患者utrophin阴性表达,正常对照中n NOS均为阳性、utrophin均为阴性,DMD患者n NOS表达减少而utrophin表达增多(Z=-6.557、-5.426,P<0.05)。轻症组与重症组比较n NOS、utrophin的表达水平均无统计学意义。相关分析DMD中utrophin与dystrophin的表达水平呈负相关(r=-0.419,P<0.05),而n NOS与utrophin、dystrophin均无相关性。结论 DMD患者中n NOS的表达减少、utrophin的表达增多,且两者可能参与DMD的病理过程。

Duchenne型肌营养不良肌肉病变机制研究

Duchenne型肌营养不良(DMD)是一种X连锁隐性遗传的致死性肌病,至今尚无有效治疗方法,尽管人类对DMD致病基因及其产物抗肌萎缩蛋白的研究已有15年之久,然而对抗肌萎缩蛋白缺失如何引起肌肉变性、坏死的具体机制至今仍不清楚,因此有必要对DMD发病机制做进一步研究。目前对DMD的发病机制主要有两种假说,一种是机械损伤假说,另一种是钙稳态失衡假说。

B3GALNT2基因突变致先天性肌营养不良2例并文献复习

目的探讨B3GALNT2基因突变致先天性肌营养不良的临床特点。方法收集2019年1-6月河北省儿童医院收治的B3GALNT2基因突变致先天性肌营养不良亚型α-抗肌萎缩相关糖蛋白病(α-dystroglycanopathy,α-DGP)患儿的临床资料,并检索相关文献对其致病特点进行临床分析。结果共有2例B3GALNT基因突变致α-DGP患儿,均为复合杂合突变。1例等位基因突变位点为c.1068dup T(p.D357D358delinsX)和c.40G>C(p.G14R),另1例等位基因突变位点为c.261-2A>G(Splicing)和c.979G>A(p.D327N)。文献检索到19例B3GALNT2基因突变致α-DGP患者。总结分析其特点:①神经系统均受累,常见临床症状为认知、运动发育障碍(100%),癫痫发作(52.6%),肌张力低(64.3%);②头颅MRI异常可表现为脑室周围白质病变(81.3%),神经元移行障碍(68.8%),脑干和/或小脑发育不良(56.3%),小脑皮层囊肿(50%),重度脑积水(31.25%)等;③肌受累患者可达63.2%,肌酶升高多为300~1740U/L,重症者可更高;④眼受累患者占28.6%,常见症状为视神经萎缩、眼裂畸形,严重者可见青光眼、白内障,甚者失明;⑤推测该基因截短突变且突变位置靠前者症状较重,错义突变往往症状较轻,突变位点c.979G>A(p.D327N)及c.822823dup(p.I276Lfs*26)可能为热点突变;⑥该基因突变部分症状有自愈倾向。结论 B3GALNT2基因应作为婴幼儿期α-DGP、智力运动发育落后、癫痫及多种脑发育畸形等表现的候选筛查基因之一。

先天性肌营养不良1C型1例临床特点和FKRP基因突变分析

先天性肌营养不良1C型(MDCl C)是由FKRP基因纯合或复合杂合突变引起。该文报道1例MDCl C患儿的临床和基因突变特点。患儿,男,8月龄,因发育落后就诊。临床表现为翻身不佳、独坐不稳,肌张力低下,膝腱、跟腱反射不能引出,表情刻板,眼内斜视。基因检测证实患儿FKRP基因存在c.350C>G和c.1303C>T复合杂合突变;c.350C>G来自于母亲,为已报道的致病性错义突变;c.1303C>T来自于父亲,是新发错义突变,生物信息学软件分析预测其有致病可能。结合患儿早发肌张力低下、运动发育落后的临床特征和FKRP基因突变测序结果,确诊为MDC1C。