微小RNA-4286调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型对胃癌细胞系HGC-27生长、迁移及侵袭的影响

目的探讨微小RNA-4286(miRNA-4286)调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型(INPP4A)对胃癌细胞系NGC-27生长、迁移及侵袭的影响。方法将胃癌HGC-27细胞分为空白对照组和阴性对照组、干预组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染p EGFP-N1质粒,干预组转染pEGFP-N1-miRNA-4286质粒,采用Real-time PCR检测3组胃癌HGC-27细胞miRNA-4286表达量,采用Western blotting检测3组胃癌HGC-27细胞中INPP4A蛋白表达量,采用八肽胆囊收缩素(CCK8)法检测3组胃癌HGC-27细胞增殖率,采用Transwell小室侵袭实验检测3组胃癌HGC-27细胞侵袭能力,采用划痕实验检测3组胃癌HGC-27细胞迁移能力。结果干预组miRNA-4286表达量、增殖率、穿过小室膜的HGC-27细胞数明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);干预组INPP4A蛋白表达量、划痕伤口愈合间距明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);阴性对照组miRNA-4286表达量、INPP4A蛋白表达量、增殖率、穿过小室膜的HGC-27细胞数、划痕伤口愈合间距较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论MiRNA-4286可能通过下调INPP4A表达而促进胃癌细胞系HGC-27生长、迁移及侵袭。

miR-765靶向Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶调控肝细胞癌细胞的增殖

目的:探讨微小RNA(miR)-765对Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)调控及其对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的影响。方法:采用实时定量PCR检测8例HCC组织和癌旁组织以及8组HCC细胞株中的miR-765的表达水平;MTT法检测过表达miR-765对HCC细胞增殖的影响;利用分子生物学技术构建INPP4B的3′-UTR报告基因,分析miR-765对INPP4B的调控作用,然后采用Western blotting法分别检测过表达和沉默miR-765对INPP4B蛋白表达的影响;应用Western blotting法和克隆形成实验探讨特异性抑制INPP4B对HCC细胞株增殖的影响。结果:在HCC癌组织以及HCC细胞株中高表达miR-765(P<0.05)。转染miR-765促进HCC细胞的增殖[(3.78±1.25)vs(2.06±0.47),P<0.05]。miR-765能够显著下调INPP4B的3′-UTR报告基因的荧光表达[(0.42±0.01)vs(1.01±0.01),P<0.05],显著上调INPP4B蛋白的表达[(0.92±0.04)vs(0.42±0.02)、(0.62±0.03),P<0.05]。特异性抑制INPP4B后明显促进HCC细胞的增殖[(238.0±1.73)vs(66.33±5.04),P<0.05]。结论:miR-765通过调控INPP4B的表达来促进HCC细胞的增殖。

过表达INPP4B对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制

目的:探讨二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)对人急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将携带INPP4B的重组质粒载体p EAK-Flag/INPP4B转染人THP-1细胞系(Flag-INPP4B组),同时设立未处理组为对照(Mock组)。采用qRT-PCR和Western blot分别检测实验组和对照组细胞INPP4B mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2(Bcl-2-associated X/B-cell lymphoma-2,Bax/Bcl-2)以及磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)下游信号分子蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)和血清糖皮质激素调节激酶-3(serum and glucocorticoid regulated kinase-3,SGK3)蛋白的磷酸化水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞内PI(3,4)P2和PI(3)P的水平。结果:INPP4B重组质粒载体转染THP-1细胞后,INPP4B的mRNA和蛋白水平均明显上升(mRNA:t=9.724,P=0.000;蛋白:t=19.520,P=0.000),提示在THP-1细胞中成功过表达INPP4B。与Mock组相比,Flag-INPP4B组细胞体外增殖能力明显增强(F=31.870,P=0.000)。同时,过表达INPP4B可明显降低细胞凋亡率(t=6.999,P=0.002);使促凋亡蛋白Bax的表达水平下降(t=24.710,P=0.000)、抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平增加(t=6.398,P=0.003)。此外,过表达INPP4B可增强THP-1细胞SGK3蛋白的磷酸化水平(t=10.470,P=0.000),而对AKT蛋白的磷酸化水平无明显影响(t=0.285,P=0.790)。最后,过表达INPP4B还可明显降低THP-1细胞中PI(3,4)P2的水平(t=4.515,P=0.011),同时明显升高PI(3)P的水平(t=5.681,P=0.005)。结论:本研究结果表明过表达INPP4B可促进人急性髓系白血病THP-1细胞的体外增殖并抵抗凋亡,其机制可能与INPP4B介导激活PI3K/SGK3信号通路有关,这提示INPP4B可作为急性髓系白血病治疗的一个潜在靶点。

肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅱ型表达对结肠癌预后及5-FU化疗敏感性的作用研究

[目的]研究肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅱ型(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)的表达对结肠癌预后及氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)药物敏感性的影响及其机制。[方法]通过免疫组织化学方法和R2在线工具分析INPP4B在结肠癌组织的表达及其与预后的关系。构建敲减或过表达INPP4B质粒,分别转染结肠癌细胞株WiDr细胞和SW480细胞,通过实时荧光定量PCR技术检测INPP4B mRNA的表达情况。通过Western blot技术检测细胞中INPP4B、磷酸化的Akt(pAkt)和p27的表达情况。使用CCK-8检测细胞的增殖能力。采取流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期的分布。[结果]INPP4B高表达与结肠癌患者预后不良相关(P<0.05)。敲减INPP4B后,5-FU处理细胞24 h,发现与WiDr shControl细胞相比,Wi Dr shINPP4B细胞存活率显著降低(P=0.011),凋亡率显著增高(P<0.001),G_(0)/G_(1)期细胞比例显著升高(P<0.001)。过表达INPP4B后,与SW480空载细胞相比,SW480 INPP4B细胞存活率显著升高(P=0.002),凋亡率显著降低(P=0.002),G_(0)/G_(1)期的细胞比例显著降低(P=0.001)。5-FU处理结肠癌细胞后,与WiDr shControl细胞相比,WiDr shINPP4B细胞中pAkt(Ser473)的水平显著降低(P=0.003),pAkt(Thr308)的水平显著降低(P<0.001),p27蛋白的表达显著升高(P<0.001);与SW480空载细胞相比,SW480INPP4B细胞中pAkt(Ser473)的水平显著升高(P<0.001),pAkt(Thr308)的水平显著升高(P<0.001),p27蛋白的表达显著降低(P<0.001)。[结论]INPP4B高表达与结肠癌患者不良预后相关,并通过激活Akt/p27信号轴降低结肠癌细胞对5-FU的敏感性。

Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶在甲状腺乳头状癌中的作用及其机制

目的观察Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(INPP4B)在人甲状腺乳头状癌组织及其癌旁正常组织的表达,观察INPP4B表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响,探讨其调节机制。方法采用定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测2019年1月至2019年12月期间30例甲状腺乳头状癌患者癌组织及其癌旁正常组织中INPP4B的表达水平。在甲状腺乳头状癌细胞系IHH4细胞中敲减INPP4B表达,采用系列体外试验检查INPP4B表达水平改变对IHH4细胞功能的影响。计量资料用两独立性t检验,并进行Mann-Whitney U检验非参数分析。结果RT-PCR结果显示,在30例甲状腺乳头状癌组织中,有22例INPP4B mRNA水平明显升高,癌组织中INPP4B的高表达率为73.3%(22/30),显著高于癌旁正常组织(3.3%,1/30)(P<0.01)。Western blot结果显示,在30例甲状腺乳头状癌组织中21例INPP4B蛋白呈上调表达,与RT-PCR检测结果符合率为95.5%。在IHH4细胞中敲减INPP4B表达可上调上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达3.61倍(χ^2=33.800,P<0.05);下调磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)表达0.24倍(χ^2=14.300,P<0.05)、下调血清/糖皮质激素调节激酶3(SGK3)表达0.18倍(χ^2=19.400,P<0.05)、下调卷曲蛋白(Twist)表达0.31倍(χ^2=8.700,P<0.05)和下调波形蛋白(Vimentin)表达0.25倍(χ^2=15.800,P<0.05);但敲减INPP4B表达对磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达影响很小,仅下调0.96倍(χ^2=0.000,P>0.05)。噻唑蓝(MTT)增殖试验表明,敲减INPP4B表达可显著抑制IHH4细胞的增殖能力。细胞克隆形成试验结果显示,与对照组[(138±11)个]比较,敲减INPP4B表达组[(76±9)个]的体外集落数量显著减少,差异有统计学意义(t=9.692,P<0.05)。刮痕愈合试验结果表明,敲减INPP4B表达组和对照组的IHH4细胞刮痕愈合率分别为(33.48±0.05)%和(93.29±0.07)%,差异有统计学意义(t=68.582,P<0.01)。Transwell试验结果显示,敲减INPP4B表达组和对照组的IHH4细胞迁移细胞数分别为8(4,16)个和129(94,186)个,差异有统计学意义(U=0,P<0.01)。结论INPP4B在甲状腺乳头状癌组织中呈高表达,提示其可能对甲状腺癌的发生发展有重要作用;体外细胞水平敲减INPP4B表达能够抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,提示INPP4B在甲状腺乳头状癌中起促癌作用。

INPP4B调控Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的探讨磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型(INPP4B)调控蛋白激酶B(Akt)信号通路影响胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡的机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹分别测定胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中INPP4B表达变化。INPP4B过表达慢病毒感染HGC-27细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白、p-Akt蛋白表达。Akt信号激活剂处理感染INPP4B过表达慢病毒的HGC-27细胞,检测细胞增殖、凋亡和Bax、Bcl-2、p-Akt蛋白表达变化。结果胃癌细胞中INPP4B mRNA和蛋白水平均明显低于正常胃黏膜细胞。INPP4B过表达慢病毒感染后的HGC-27细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡率明显升高,细胞中Bax蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,p-Akt蛋白表达水平明显降低。Akt信号激活剂可以提高INPP4B过表达慢病毒感染的HGC-27细胞增殖能力,明显减少细胞凋亡,明显减少细胞中Bax蛋白表达,明显促进细胞中Bcl-2、p-Akt蛋白表达。结论INPP4B调控Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖并诱导细胞凋亡。

磷脂酰肌醇-4-磷酸酶Ⅱ型对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨磷脂酰肌醇-4-磷酸酶Ⅱ型(INPP4B)对宫颈癌细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法Western blotting检测常见的宫颈癌细胞系中INPP4B的基础表达水平,对INPP4B阴性的Si Ha、C33a细胞转染表达质粒LHCX-INPP4B,高表达INPP4B的Ca Ski细胞转染INPP4B特异性的siRNA,Western blotting检测细胞中INPP4B表达的变化。CCK-8、克隆形成实验检测INPP4B对宫颈癌细胞生长增殖的影响;Brd U染色检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 CCK-8和克隆形成实验显示,过表达INPP4B使Si Ha和C33a细胞的活性和克隆形成能力明显下降(P均<0.05);Brd U实验表明,转染INPP4B后Si Ha细胞和C33a细胞进入S期的比例减少(P=0.04,P=0.01)。与之相应,干扰INPP4B表达后Ca Ski细胞的生长增殖能力增强,进入S期的细胞比例增加(P<0.01)。但INPP4B表达的变化对Si Ha、C33a和Ca Ski细胞的凋亡无明显影响。结论 INPP4B可抑制宫颈癌细胞的生长增殖和细胞周期进程。

人磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型重组慢病毒载体的构建及其在人雄激素抵抗型前列腺癌PC3细胞中的表达

目的构建人磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)重组慢病毒表达载体,并检测其在人雄激素抵抗型前列腺癌细胞株PC3中的表达。方法以人工合成的人INPP4B基因为模板,PCR扩增目的基因片段,克隆入pGC-FU载体构建重组质粒pGC-FU-INPP4B,将其与辅助包装原件PHelper 1.0和PHelper 2.0载体经Lipofectamine TM 2000介导共转染293T细胞,包装获得携带人INPP4B基因的重组慢病毒LentiINPP4B,免疫荧光法测定病毒滴度。用Lenti-INPP4B感染PC3细胞(Lenti-INPP4B组),以慢病毒Lenti-GFP(携带GFP基因)感染的PC3细胞为阴性对照,RT-PCR及Western blot检测PC3细胞中INPP4B m RNA水平和蛋白的表达,CCK8法检测PC3细胞增殖;Western blot检测PC3细胞中p-AKT水平。结果经PCR及测序鉴定,重组质粒p GC-FU-INPP4B构建正确;Lenti-INPP4B病毒滴度达2×10-8 TU/mL。与阴性对照组比较,Lenti-INPP4B组PC3细胞中INPP4B m RNA水平显著提高(P<0.05),细胞活力抑制显著(P<0.05),细胞内p-AKT水平降低;INPP4B蛋白在Lenti-INPP4B组细胞中表达,在阴性对照组中未表达。结论成功构建了INPP4B慢病毒表达载体,其在PC3细胞中的表达能显著抑制细胞增殖,可能是通过下调p-AKT水平发挥作用。本文为靶向治疗雄激素抵抗型前列腺癌提供了新思路。

Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶、蛋白激酶B在食管鳞癌组织中表达的临床意义及其相关性

目的探讨Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(INPP4B)及蛋白激酶B(Akt)在食管鳞癌组织中表达的临床意义及其相关性。方法采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测32例食管癌患者的癌组织及相应的癌旁组织中(距癌组织>5 cm)中INPP4B m RNA的表达情况,并分析其与食管癌临床病理特征之间的关系。采用免疫组织化学SP法检测70例食管癌组织及20例正常食管上皮组织中INPP4B、Akt蛋白的表达情况,并分析与食管癌临床病理特征的关系及其之间的相关性。结果与癌旁组织相比,32例食管癌组织中INPP4B m RNA表达水平上调的比例为65.5%(P<0.05)。INPP4B m RNA的表达水平与食管癌患者的年龄、性别、肿瘤直径、有无淋巴结转移及TNM分期均无相关性(P>0.05)。在70例食管癌组织中及20例正常食管上皮组织中,INPP4B蛋白的阳性表达率显著高于正常食管组织(67.1%vs 40.0%,P<0.05),Akt蛋白的阳性表达率显著高于正常食管组织(72.8%vs 25.0%,P<0.05)。INPP4B蛋白的表达水平与食管癌患者的年龄、性别及临床病理特征无明显相关(均P>0.05);Akt蛋白的表达水平与肿瘤直径、分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期均有关(均P<0.05)。INPP4B与Akt蛋白表达呈正相关(r=0.531,P=0.000)。结论 INPP4B在食管鳞癌组织中的表达上调,INPP4B可能通过激活Akt的活化从而在食管癌中起着癌基因的作用,其可能成为食管癌靶向治疗的一个新的靶点。

胃癌患者外周血INPP4B表达水平与临床病理特征、化疗敏感性及PI3K/AKT通路的关系

目的探讨胃癌患者外周血Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(INPP4B)表达水平与临床病理特征、化疗敏感性及磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的关系。方法选取2018年12月至2019年12月医院收治的79例晚期胃癌患者作为研究组,另外选取同期于医院体检的健康体检者40例作为对照组。比较研究组与对照组外周血INPP4B表达水平,分析外周血INPP4B与晚期胃癌患者临床病理特征之间的关系。研究组接受含奥沙利铂的方案化疗,根据化疗2个周期后的临床疗效将研究组患者分为敏感组和抵抗组,比较两组外周血INPP4B及外周血PI3K和AKT mRNA表达水平,采用Pearson分析外周血INPP4B与PI3K和AKT mRNA水平的相关性。以INPP4B mRNA水平的中位数将研究组患者分为高表达组(≥0.25)与低表达组(<0.25),采用Kaplan-Meier分析生存曲线。结果研究组外周血中INPP4B mRNA的相对表达量低于对照组(P<0.05)。Ⅳ期胃癌患者外周血INPP4B mRNA低表达占比高于ⅢB期患者(P<0.05)。抵抗组的INPP4B mRNA表达水平低于敏感组,抵抗组PI3K和AKT mRNA表达水平高于敏感组(P<0.05)。化疗前研究组胃癌患者外周血INPP4B mRNA表达水平与PI3K和AKT mRNA表达水平呈负相关(r=-0.551、-0.312,P<0.05)。高表达组与低表达组的中位生存时间为12.00个月(95%CI:10.515~13.954)和11.00个月(95%CI:10.046~12.794),2组中位累积生存曲线比较,差异具有统计学意义(Log rankχ^(2)=7.669,P=0.006)。结论外周血INPP4B与胃癌晚期TNM分期、化疗敏感程度及预后生存有关,且INPP4B调控化疗抗性的机制可能与负调控PI3K/AKT通路有关。

INPP4B蛋白在胃腺癌组织中的表达及临床病理意义

目的探讨Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(INPP4B)蛋白在胃腺癌中表达情况及其对患者手术预后的影响。方法采用免疫组织化学染色(IHC)S-P三步法检测平均随访5年的140例胃腺癌患者(2011年7月至2016年7月在该院行首次胃癌手术)的癌组织及相应的癌旁组织(肉眼观察距离癌组织边缘大于5cm)中INPP4B蛋白表达情况。通过SPSS17.0统计学软件分析胃腺癌组织中INPP4B蛋白的表达情况与胃腺癌患者临床病理结果之间的关系;运用生存分析Kaplan-Meier法分析其对于患者手术预后的影响。结果IHC结果显示,INPP4B蛋白在胃腺癌组织、癌旁组织中表达阳性率分别为21.43%、83.57%,前者小于后者,差异有统计学意义(χ^2=1.084,P<0.01)。INPP4B蛋白在胃腺癌组织中的表达水平与淋巴结转移、分化程度、肿瘤TNM分期呈负相关(P<0.01),而与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。生存分析Kaplan-Meier法显示,INPP4B高表达组较低表达组的生存期明显延长,无进展生存期及总生存期均延长,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论INPP4B蛋白在胃腺癌组织中均表达下调,可能是胃腺癌的一种抑制因子,与胃腺癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期呈负相关,可作为胃腺癌患者预后评估的重要指标。

INPP4B基因在胃癌组织中的表达及意义

目的:本研究通过检测人类胃癌组织及相应的癌旁组织中Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(inositol polyphosphate-4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)的mRNA及蛋白表达情况,分析其与胃癌临床病理特征的关系,探讨其在胃癌发生发展中的意义.方法:采用实时荧光定量PCR法(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)及免疫组织化学SP法检测50例胃癌患者的癌组织及相应的癌旁组织(距癌组织边缘>5 cm)中INPP4B mRNA及蛋白表达情况.并分析INPP4B表达与胃癌临床病理特征的关系.结果:q RT-PCR结果显示,胃癌组织中INPP4B mRNA表达均明显低于相应的癌旁组织(P<0.01).免疫组织化学结果显示胃癌组织中INPP4B蛋白的表达阳性率明显低于相应癌旁组织的阳性率(28.0%vs 82.0%,P<0.01).INPP4B mRNA及蛋白表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.01),而与患者的性别、年龄、肿瘤直径无关(P>0.05).结论:INPP4B mRNA及蛋白均在胃癌组织中表达下调,与胃癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关;INPP4B可能在胃癌中起着抑癌基因的作用,其研究可能为胃癌的治疗提供新的方向.

INPP4B和PTEN蛋白在肝细胞癌中的表达及其意义

目的:通过检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者肝癌、癌旁组织及正常肝组织中Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)和磷酸酯酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)的表达情况,结合HCC的临床病理特征,探讨其在HCC发生发展中的作用及意义.方法:应用免疫组织化学方法分别检测74例肝癌组织、对应癌旁组织及30例正常肝脏组织中INPP4B和PTEN的表达情况.结果:(1)肝癌组织中INPP4B和PTEN的表达水平显著低于癌旁组织和正常肝脏组织(均P<0.05);(2)INPP4B和PTEN的表达与HCC患者的性别、年龄、肝硬化病史无关,与分化程度、包膜完整程度相关.INPP4B的表达与肿瘤直径相关,PTEN的表达与肿瘤直径无关;(3)肝癌组织中INPP4B和PTEN的表达呈正相关(r=0.561,P=0.000).结论:INPP4B和PTEN在肝癌组织中的低表达及两者表达呈正相关提示两者可能共同参与了HCC的发生发展.