灰葡萄孢菌AUR1基因内含子对肌醇磷脂酰神经酰胺合成酶表达的影响及致病性

【目的】AUR1编码的肌醇磷脂酰神经酰胺(IPC)合成酶是真菌鞘脂代谢的关键酶,在转录水平和翻译水平研究AUR1内含子对其基因表达的影响,以及AUR1内含子对相关致病因子的影响,为内含子调控基因表达的分子机制提供理论依据。【方法】实时定量PCR测定野生型灰葡萄孢菌(BcAUR1)和AUR1缺失115 bp内含子突变体(BcAUR1a)的mRNA表达量,高效液相层析测定IPC合成酶活性,分别采用辣根过氧化物酶法、邻苯三酚自氧化法、愈创木酚法和紫外分光光度法测定单位菌体的H2O2含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的酶活力。【结果】突变体BcAUR1a的IPC合成酶基因cDNA测序结果表明,IPC合成酶无氨基酸突变。实时定量PCR和高效液相层析的结果表明BcAUR1a的AUR1基因mRNA表达量和IPC合成酶活力比野生型BcAUR1分别增加了50.2%和14.16%。短梗霉素A(AbA)显著刺激BcAUR1 H2O2、SOD、POD和CAT的分泌,但对BcAUR1a的这几种物质的分泌无显著影响。【结论】突变体BcAUR1a的AUR1基因在转录和翻译水平上表达上调,AbA显著增强野生型灰葡萄孢菌致病力,但对突变体影响较小。突变体产生了对AbA的抗性,推测AUR1基因内含子在AUR1基因表达调控中起转录抑制子的作用。

肝细胞癌中磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、热休克蛋白和谷氨酰胺合成酶的表达及其临床意义

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、热休克蛋白70(HSP70)和谷氨酰胺合成酶(GS)在肝细胞癌中的表达及临床意义。方法运用组织芯片技术,通过免疫组织化学Envision法检测182例肝细胞癌和92例癌旁肝组织中GPC3、HSP70和GS的表达情况,并结合临床病理因素进行分析。结果 GPC3、HSP70和GS在肝细胞癌中表达均明显高于癌旁肝组织(P<0.05),GPC3表达与肝细胞癌分化程度、脉管内瘤栓、TNM分期与转移显著相关(P<0.05);HSP70和GS表达与肝细胞癌TNM分期、转移和术后复发显著相关(P<0.05)。结论 GPC3、HSP70和GS在肝细胞癌的发生、发展中起着不同程度的作用。联合检测GPC3、HSP70和GS可能有助于判断肝细胞癌的恶性程度、转移潜能及预后分析。

二氢槲皮素对异丙肾上腺素所致急性心肌缺血大鼠心肌磷脂酰肌醇3-激酶/糖原合成酶激酶-3β信号通路的影响

目的探讨二氢槲皮素对异丙肾上腺素所致的急性心肌缺血大鼠心肌磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号通路的影响。方法将60只清洁级SD大鼠按随机数字表法随机分为空白组,模型组,地奥心血康组(54 mg/kg),二氢槲皮素高(60 mg/kg)、中(30 mg/kg)、低(15 mg/kg)剂量组,连续灌胃给药14 d,第12天开始异丙肾上腺素腹腔注射建立大鼠急性心肌缺血模型。检测各组大鼠血液流变学变化;测定各组大鼠血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)水平,以及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的水平;Western blot法检测心肌PI3K、磷酸化蛋白激酶B(PKB)和GSK-3β蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠全血黏度、血浆黏度、血细胞比容均明显升高(P<0.05),血清中LDH、CK水平明显增加(P<0.05),NO水平明显降低(P<0.05),心肌组织SOD、GSH-Px、CAT水平和PI3K蛋白表达明显降低(P<0.05),MDA水平和GSK-3β蛋白表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,二氢槲皮素高、中、低剂量组血浆黏度均降低(P<0.05),二氢槲皮素中、低剂量组血细胞比容明显降低(P<0.05),二氢槲皮素高、中剂量组血清中LDH、CK水平均明显降低(P<0.05),二氢槲皮素各剂量组NO水平明显升高(P<0.05),二氢槲皮素各剂量组大鼠心肌组织中SOD、GSH-Px、CAT水平和PI3K蛋白表达明显升高(P<0.05),MDA水平明显降低(P<0.05)。二氢槲皮素高、中剂量组GSK-3β蛋表达明显降低(P<0.05)。结论二氢槲皮素能通过调控PI3K/GSK-3β信号通路抑制氧化应激级联反应,调节心肌血流量,阻断心血缺血的进程,从而发挥抗心肌缺血的作用。

电针对APP/PS1小鼠皮质区磷脂酰肌醇-3激酶/糖原合成酶激酶-3α通路相关蛋白表达和老年斑沉积的影响

目的观察电针对APP/PS1双转基因小鼠皮质区磷脂酰肌醇-3激酶/糖原合成酶激酶-3α(PI3K/GSK3α)信号通路上相关蛋白的分布表达,以及老年斑沉积的影响。方法基因鉴定后,3月龄雄性转基因小鼠随机分为模型组和电针组,野生型C57小鼠为对照组,每组6只。电针组电针百会(GV20)和双侧肾俞(BL23)14 d。治疗后,Western blotting和免疫组化法检测各组小鼠皮质区老年斑数量,PI3K亚单位P85α和P110α,以及GSK3α和pS21-GSK3α等蛋白的分布和表达。结果模型组皮质区老年斑数较对照组显著升高(P<0.001);电针组老年斑数较模型组显著降低(P<0.001)。各相关蛋白主要表达于皮质神经元胞质。与对照组相比,模型组pS21-GSK3α、P110α和P85α蛋白表达明显降低(P<0.01),GSK3α蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,电针组pS21-GSK3α、P110α和P85α的蛋白表达明显升高(P<0.01),GSK3α蛋白表达降低(P<0.05)。结论电针能调节APP/PS1双转基因小鼠皮质区PI3K/GSK3α通路相关蛋白表达,减少老年斑沉积。

二氮嗪后处理对大鼠缺血再灌注心肌损伤和糖原合成酶激酶-3β表达的影响

目的探讨激活磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路对二氮嗪后处理大鼠缺血再灌注(I/R)心肌保护作用的影响及其机制。方法60只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分入假手术组、I/R组、二氮嗪后处理组(予二氮嗪7mg/kg)、渥曼青霉素组(予渥曼青霉素15μg/kg)和二氮嗪+渥曼青霉素组(复合组)。结扎左冠状动脉前降支30min、再开放120min建立心肌I/R损伤模型。再灌注末,采用比色法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)表达水平,应用电子显微镜观察心肌超微结构变化,采用比色法测定心肌组织内半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)活性,Western免疫印迹试验检测糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的表达水平。结果I/R组、二氮嗪后处理组、渥曼青霉素组、复合组的LDH、CK表达水平,心肌组织内Caspase-3的活性值均显著高于假手术组(P值均<0.01);二氮嗪后处理组和复合组均显著低于I/R组(P值均<0.01);复合组均显著高于二氮嗪后处理组(P值均<0.05);I/R组与渥曼青霉素组间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。二氮嗪后处理组和复合组的p-GSK-3β表达水平显著高于假手术组和I/R组(P值均<0.01),复合组显著低于二氮嗪后处理组(P<0.01),假手术组、I/R组和渥曼青霉素组间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论二氮嗪后处理通过激活PI3K/Akt信号通路减轻大鼠心肌I/R损伤的机制与p-GSK-3β的表达增加有关。

异泽兰黄素对脑出血继发性脑损伤的神经保护作用及相关机制研究

目的 探讨异泽兰黄素(EP)对脑出血(ICH)继发性脑损伤的神经保护作用及相关机制。方法 体内动物实验:将无特定病原体雄性小鼠按随机数字表法分为假手术组(0.9%氯化钠溶液)、模型组(0.9%氯化钠溶液)、EP低剂量组(5 mg/kg EP)、EP中剂量组(10 mg/kg EP)、EP高剂量组(20 mg/kg EP),每组18只;除假手术组外,其余4组均采用Ⅳ型胶原酶诱导ICH法构建小鼠ICH模型。检测并比较5组小鼠给药7 d后改良神经功能缺失评分(m NSS)、水迷宫实验结果(逃避潜伏期、平台停留时间、穿越平台次数)、血脑屏障通透性、脑含水量、脑组织病理学改变、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]、细胞凋亡数、炎症因子指标[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)]以及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶-3β(GSK-3β)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)]、水通道蛋白4(AQP4)蛋白表达水平。体外细胞实验:将培养后的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞分别设空白组、模型组、EP低剂量组(12.5μmol/L)、EP中剂量组(25μmol/L)、EP高剂量组(50μmol/L),每组设6复孔;除空白组不作任何处理外,其余4组均加入冈田酸构建ICH神经细胞损伤模型。检测并比较4组细胞存活率、细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白表达水平。结果 体内动物实验结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠脑组织结构破坏明显,神经细胞坏死且大量炎性细胞浸润,m NSS评分、逃避潜伏期、血脑屏障通透性、脑含水量以及脑组织MDA、细胞凋亡数和Cleaved caspase-3、AQP4蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05),平台停留时间、穿越平台次数、体重以及脑组织SOD、CAT、Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K、p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β均明显降低(均P<0.05)。与模型组比较,EP低、中、高剂量组脑组织结构以及上述指标均得到明显改善(均P<0.05),且呈剂量依赖性(均P<0.05)。体外细胞实验结果显示,与空白组比较,模型组细胞存活率、Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K、p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β均明显降低(均P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,EP低、中、高剂量组上述指标均得到明显改善(均P<0.05),且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论 EP能减轻小鼠ICH后神经细胞凋亡和炎症反应,进而保护神经功能,且呈剂量依赖性;其作用机制可能与EP激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路进而对ICH后神经细胞损伤起保护作用有关。

GM1通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路减轻脑出血小鼠的神经功能损伤

目的研究单唾液酸四己糖基神经节苷脂(GM1)对急性脑出血小鼠的神经功能保护作用及其机制。方法构建小鼠脑出血神经损伤模型。将小鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、GM1(25 mg/(kg·d))组、GM1+LY294002(6μg/(kg·d))组各10只。于造模结束1 h后腹腔注射GM1或LY294002,连续1 w,Sham组和Model组腹腔注射等量生理盐水。采用神经功能缺损评分、脑含水量等检测各组神经功能损伤;苏木素-伊红(HE)染色试剂盒和尼氏染色试剂盒检测各组脑组织和神经元损伤水平;酶联试验免疫吸附试验(ELISA)法测定血清炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶(cleaved caspase)-3、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶(PI3K/AKT/GSK)3β蛋白表达。结果与Sham组相比,Model组神经功能损伤严重(P<0.05),且神经细胞出现大量凋亡。Western印迹结果显示,Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达明显下调,Bax、cleaved caspase-3、p-GSK3β/GSK3β蛋白表达明显上调(P<0.05);与Model组相比,GM1治疗组神经功能损伤明显减轻,脑组织损伤和炎症明显减轻且神经细胞凋亡明显被抑制(P<0.05),而GM+LY294002使得这一治疗作用明显被弱化(P<0.05)。结论GM1能有效保护急性脑出血小鼠的神经功能,其作用机制可能与PI3K/AKT/GSK3β信号通路有关。

丁基苯酞通过激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路及其在局部脑缺血损伤脑梗死中的神经保护作用

目的探讨丁基苯酞(butylphthalide,NBP)对局部脑缺血损伤脑梗死的保护作用及在PI3K/Akt/GSK 3β信号通路的调节机制。方法将100只12~15周龄的SPF级Wistar雄性大鼠随机分为5组(n=20):假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、丁基苯酞组(NBP组)、P13K特异性抑制剂LY294002组(LY组)和丁基苯酞+LY294002组(NBP+LY组),采用大脑中动脉阻塞法构建大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,造模后第1天开始,NBP组、LY组、NBP+LY组分别腹腔注射10 mg/kg NBP、10 mg/kg LY和10 mg/kg NBP+10 mg/kg LY,注射剂量10μL,每天1次,连续给药7 d,Sham和Model组腹腔给予等量生理盐水。第7天给药30 min后对大鼠进行神经功能缺损程度(mNNS)评分,并采用磁共振成像法测量脑梗死体积,再用尼氏染色检测脑组织中神经元数损伤情况,同时在光镜下观察记录完整神经元数目,蛋白免疫印迹检测PI3K/Akt/GSK 3β信号通路中的Akt、P Akt、GSK 3β、P GSK 3β蛋白表达。结果与Sham组相比,Model组大鼠神经功能损伤评分明显升高,脑梗死体积明显增大,脑组织中完整的神经元数量及Akt、GSK 3β磷酸化水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);与Model组相比,NBP组神经功能损伤评分明显下降,脑梗死体积明显减小,脑组织中完整神经元的数量及Akt、GSK 3β磷酸化明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);LY组、NBP+LY组与Model组各指标相比组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论NBP可以激活缺血性脑梗死所致的PI3K/Akt/GSK 3β信号通路,从而减轻神经功能损害,发挥对局部缺血致脑梗死的保护作用。

白藜芦醇通过PI3K/Akt/GSK-3β通路对6-OHDA致帕金森病小鼠神经退行性病变改善的作用研究

目的探讨白藜芦醇通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)通路改善6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致帕金森病小鼠神经退行性病变。方法将30只SPF级C57BL/6小鼠随机分为3组,其中6-OHDA致病组和白藜芦醇治疗组(Res治疗组)脑内分别注射6-OHDA诱导帕金森病模型,正常组注射等量生理盐水,造模后Res治疗组给予Res灌胃治疗(20 mg/kg),6-OHDA致病组和正常组给予等量生理盐水灌胃,14 d后腹腔注射吗啡,观察小鼠行为学变化,TUNEL染色观察脑黑质内多巴胺神经元凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠脑黑质内Caspase-3表达,蛋白印迹法(Western Blot)检测实验小鼠脑黑质内PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合酶激酶3(p-GSK-3β)蛋白含量。结果Res治疗组小鼠30 min内向右旋转圈数低于6-OHDA致病组;6-OHDA致病组小鼠脑黑质内多巴胺神经元凋亡率高于正常组(P<0.05),Res治疗组小鼠脑黑质内多巴胺神经元凋亡率低于6-OHDA致病组(P<0.05);6-OHDA致病组小鼠脑黑质内Caspase-3较正常组增加,Res治疗组小鼠脑黑质内Caspase-3含量较6-OHDA致病组降低(P<0.05)。6-OHDA致病组小鼠脑黑质内PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白含量均低于正常组(P<0.05),且Res治疗组PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白含量较6-OHDA致病组升高(P<0.05)。结论白藜芦醇可有效改善由6-OHDA诱导的帕金森病小鼠运动功能障碍,并降低脑黑质内多巴胺神经元凋亡,这种抑制作用可能通过激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路,抑制GSK-3β活性实现。

基于PI3K/AKT/GSK-3β信号通路探讨EA改善APP/PS1双转基因小鼠认知功能障碍的内在机制

目的探讨鞣花酸(ellagicacid,EA)对APP/PS1双转基因小鼠认知功能的影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3(PI3K/AKT/GSK-3β)信号通路探讨鞣花酸对双转基因小鼠海马氧化应激水平的调节机制。方法将32只SPF级6月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为4组,即APP/PS1组、APP/PS1+EA组、APP/PS1+LY294002组、APP/PS1+EA+LY294002组,每组8只,另外选取8只SPF级C57BL/6J野生型小鼠(Wildtype)作为空白对照组,即WT组。APP/PS1+EA组给予50mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃EA;APP/PS1+LY294002组予以1.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射PI3K抑制剂LY294002;APP/PS1+EA+LY294002组予以50mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃EA,同时按1.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射LY294002;WT组和APP/PS1组于相同时间点灌胃等体积10%二甲基亚砜(DMSO)。每日给药1次,连续给药60天。Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,免疫组化、蛋白免疫印迹法检测PI3K、AKT、GSK-3β相关蛋白的表达,透射电镜观察小鼠海马组织超微结构变化。结果与WT组相比,其他四组的逃避潜伏期均增长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.01);APP/PS1组、APP/PS1+LY294002组和APP/PS1+EA+LY294002组中的PI3K、AKT蛋白表达量显著降低(P<0.01),GSK-3β表达量显著升高(P<0.01);APP/PS1+EA组的PI3K表达量降低(P<0.05),AKT表达量显著降低(P<0.01),GSK-3β表达量升高(P<0.05);与WT组相比,APP/PS1组海马神经元细胞数目较少,线粒体结构破坏,大部分线粒体出现肿胀,线粒体的内膜和外模不完整,部分线粒体嵴消失,微管、微丝缠结,排列紊乱,而APP/PS1+EA组神经元细胞数较APP/PS1组增多,线粒体结构较清晰,可见清楚的线粒体嵴,线粒体轻度水肿。微管、微丝排列较整齐有序。结论鞣花酸改善AD模型小鼠的学习和记忆能力、减少海马神经元细胞损伤和凋亡,其作用机制可能是通过调节PI3K、AKT、GSK-3β等相关蛋白降低AD模型小鼠海马氧化应激水平。

利拉鲁肽对糖尿病合并心肌梗死小鼠心功能的影响及其作用机制

目的探讨利拉鲁肽对糖尿病合并心肌梗死小鼠心功能的影响及其作用机制。方法按随机数字表法将75只KM雄性小鼠分为对照组15只和模型处理组60只。对模型处理组的60只小鼠建立糖尿病小鼠模型,建模成功后再按随机数字表法选取模型处理组的45只小鼠建立糖尿病合并心肌梗死小鼠模型,剩余的15只小鼠作为假手术组,且仅对小鼠开胸而不结扎冠状动脉。将45只糖尿病合并心肌梗死小鼠模型按随机数字表法分为模型组(n=15)、心梗干预组(n=15)、糖干预组(n=15),给予心梗干预组小鼠灌胃硫酸氢氯吡格雷+阿托伐他汀钙片干预,给予糖干预组小鼠腹腔注射利拉鲁肽注射液干预,其余小鼠均不做特殊处理。干预7d后,使用心电图机观察各组小鼠的心电图,采用HE染色及2,3,5-氯化三苯四氮唑染色观察各组小鼠的病理情况及心肌梗死面积,采用Western blot检测各组小鼠心肌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的蛋白表达量。结果(1)对照组、假手术组小鼠心电图无明显异常,模型组小鼠心电图存在明显的ST段抬高及变异T波,心梗干预组、糖干预组小鼠心电图ST段抬高及变异T波较模型组明显改善,且心梗干预组的改善效果优于糖干预组。(2)对照组、假手术组小鼠心肌纤维排列整齐紧凑,心肌细胞形态完整;相比于对照组、假手术组,模型组小鼠心肌组织可见梗死区,梗死周边区域心肌细胞形态不完整,排列混乱,有大量炎症细胞浸润和纤维组织增生;相比于模型组,心梗干预组和糖干预组小鼠上述病理改变程度均得到改善,心梗干预组改善程度优于糖干预组。(3)与对照组相比,假手术组小鼠心肌梗死区面积百分比无明显变化(P>0.05);与对照组和假手术组相比,模型组小鼠的心肌梗死区面积百分比明显增加(P<0.05);与模型组相比,心梗干预组与糖干预组小鼠的心肌梗死区面积百分比均减少(P<0.05),且心梗干预组小鼠的心肌梗死区面积百分比小于糖干预组,但差异无统计学意义(P>0.05)。(4)与对照组相比,假手术组小鼠心肌组织的PI3K、AKT和GSK-3β蛋白表达量升高,而模型组小鼠心肌组织的AKT蛋白表达量降低,GSK-3β蛋白表达量则升高(P<0.05),PI3K蛋白表达量的变化无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,糖干预组小鼠心肌组织的PI3K、AKT和GSK-3β蛋白表达量升高,而心梗干预组小鼠心肌组织的PI3K、AKT蛋白表达量升高(P<0.05),但GSK-3β蛋白表达量变化无统计学意义(P>0.05);与心梗干预组小鼠相比,糖干预组小鼠心肌组织的AKT、GSK-3β蛋白表达量升高(P<0.05),而PI3K蛋白表达量的变化无统计学意义(P>0.05)。结论利拉鲁肽可改善糖尿病合并心肌梗死小鼠模型的心功能损伤、心肌梗死面积及心肌间质纤维化,其可能通过PI3K/AKT信号通路调节GSK-3β的表达而发挥作用。

香烟烟雾对大鼠气道上皮细胞γ谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的调控作用

氧化／抗氧化失衡是慢性阻塞性肺疾病（COPD）的主要发病机制之一。本研究室前期的研究结果表明，抗氧化剂谷胱甘肽（GSH）及其合成限速酶γ谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）在COPD的抗氧化机制巾起重要作用。红系衍生的核因子相关因子2（Nrf2）是上调抗氧化基因表达的关键转录冈子，在抗氧化机制中发挥重要的作用，在COPD大鼠肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（P13k／Akt）信号通路可能通过激活Nrf2参与γ-GCS的表达调控。

小红参乙酸乙酯提取物调控PI3K/AKT/GSK3-β通路对心肌缺血再灌注损伤大鼠雌激素的影响

目的研究小红参乙酸乙酯提取物通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-OH kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/糖原合成酶激酶3-β(glycogen synthase kinase 3-β,GSK3-β)通路对心肌缺血再灌注损伤大鼠雌激素的影响。方法选取SPF级SD雌性大鼠50只,空白组10只,建模中死亡10只,随机分为模型组、低剂量组、高剂量组,每组10只。对照组不做任何处理,模型组、低剂量组、高剂量组进行心肌缺血再灌注损伤模型建模,建模成功后模型组不做任何处理,低剂量组、高剂量组分别给予小红参乙酸乙酯提取物灌胃,其剂量分别为56.7 mg/kg、280 mg/kg。观察大鼠心肌损伤[肌钙蛋白I(CTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]、氧化应激[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]、一氧化氮(NO)、内皮-氧化氮合酶(eNOS)含量、性激素、PI3K/AKT/GSK3-β信号通路表达量情况。结果与空白组比较,模型组、低剂量组、高剂量组cTnI、CK-MB、MDA、E2水平均升高(P<0.05),SOD、GSH-Px、NO、eNOS水平、PI3K、AKT、GSK3-β表达均降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量组、高剂量组cTnI、CK-MB、MDA、E2水平均降低(P<0.05),SOD、GSH-PxNO、eNOS水平、PI3K、AKT、GSK3-β表达均升高(P<0.05);与低剂量组比较,高剂量组cTnI、CK-MBE2水平均降低(P<0.05),SOD、GSH-PxNO、eNOS水平、PI3K、AKT、GSK3-β表达均升高(P<0.05)。结论小红参乙酸乙酯提取物能对心肌缺血再灌注损伤大鼠能心肌损伤情况进行改善,抑制氧化应激状态,恢复雌激素水平,通过调节PI3K/AKT/GSK3-β通路能够反映出对心肌缺血再灌注损伤的干预效果。

血清GPC3、GS和HSP70检测在乙肝相关肝癌诊断中的应用

目的探讨磷脂酰肌醇聚糖3(glypican3,GPC3)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)在血清中的浓度及对乙肝相关肝癌(HCC)的诊断价值。方法收集100例乙肝相关HCC患者(HCC组)、20例乙肝肝硬化者(肝硬化组)、20例慢性乙肝患者(慢性乙肝组)及20例正常健康人(正常对照组)血清,用ELISA方法检测GPC3、GS、HSP70的水平。结果 HCC组血清GPC3水平与其余3组差异有统计学意义,GPC3诊断乙肝相关肝癌ROC曲线示AUC为0.697,敏感度84.21%,特异度55.1%。HCC组与肝硬化组及慢乙肝组间血清GS水平差异无统计学意义,GS诊断乙肝相关肝癌ROC曲线示AUC为0.603,敏感度46.67%,而特异度79.66%;HCC组与其余3组血清HSP70水平差异有统计学意义,HSP70诊断乙肝相关肝癌ROC曲线示AUC为0.725,敏感度58.06%,特异度89.55%;针对AFP<200 ng/m L的HCC患者,仅HSP70的血清检测AUC达0.725,其他指标对于小肝癌的诊断AUC均未达0.7。结论 ELISA法检测血清GPC3、GS、HSP70水平对诊断乙肝相关肝癌无临床实际价值。

PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中的调控作用及重组人红细胞生成素预保护效应

目的探讨PI3K/Akt/GSK-3β通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的预保护作用。方法正常培养的HK-2细胞,分为7组,正常对照组、缺血再灌注(I/R)组、LY294002干预组(PI3K/Akt阻断剂10μmol/L)、LiCl干预组(GSK-3β阻断剂20μmol/L)、rHuEPO干预组(20U/L)、rHuEPO+LY294002双干预组、rHuEPO+LiCl双干预组。Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、AktSer473、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、GSK-3βSer9及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3活性;MTT法检测细胞活力;An-nexinⅤ/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡。结果缺血再灌注损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调[(15.2±1.4)%]、Akt活性水平下降、GSK-3β及Caspase3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与I/R组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调[(18.2±2.1)%]、Akt活性水平下调、GSK-3β及Caspase3酶活性上调;LiCl干预使细胞凋亡率下调[(12.3±0.8)%]、Akt活性水平上调、GSK-3β及Caspase3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。rHuEPO干预与I/R组相比,细胞凋亡率下降[(11.1±1.6)%]、Akt活性水平升高而GSK-3β及Caspase3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与rHuEPO干预组比较,rHuEPO+LY294002双干预组细胞凋亡率升高[(13.4±1.9)%]、Akt活性水平下降而GSK-3β及Caspase3酶活性上调;rHuEPO+LiCl双干预组细胞凋亡率下调[(7.5±1.3)%]、Akt活性水平上升而GSK-3β及Caspase3酶活性下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论缺血再灌注损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡,Akt活性降低及GSK-3β活性升高,影响Caspase3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一。rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及Caspase3酶活性,减少细胞凋亡,对HK-2缺血再灌注损伤有一定的保护作用。

血清GPC3、GS和Hsp70检测在乙肝相关肝癌诊断中的应用价值

为了探讨血清磷脂酰肌醇聚糖3(GPC3)、热休克蛋白70(Hsp70)、谷氨酰胺合成酶(GS)检测在乙型肝炎(以下简称“乙肝”)相关肝癌诊断中的应用价值,本研究于2015年1月至2016年1月对在本院接受诊断与治疗的乙肝相关肝癌患者、乙肝肝硬化患者、慢性乙肝患者及健康者采用ELISA法进行血清GPC3、GS和Hsp70检测,比较不同组别之间血清GPC3、GS、Hsp70水平差异,现将研究结果报道如下。

PI3K/AKT/GSK-3β信号在脑缺血预处理中的作用及对海马细胞凋亡的影响

目的研究脑缺血预处理(CIPC)中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路调节变化及对海马细胞凋亡的影响。方法制作脑缺血、CIPC及LY294002干预模型。进行神经功能缺损评分;TTC染色计算脑梗死体积;TUNEL法检测海马细胞凋亡;Western blot检测p-PDK1、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β(ser9)、Mc-l1的蛋白表达,RT-PCR检测GSK-3β的转录。结果①与脑缺血组比较,CIPC组在神经功能缺损评分、脑梗死体积、细胞凋亡、GSK-3β蛋白表达及转录水平均降低(均P<0.05),但脑缺血组与LY294002组比较,上述各检测值差异均无统计学意义(均P>0.05);②与脑缺血组比较,CIPC组的p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mc-l1的蛋白表达均增高,LY294002组各蛋白表达较CIPC组均降低(均P<0.05),LY294002组与脑缺血组比较各蛋白表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论脑缺血预处理降低GSK-3β的转录和蛋白表达,增加p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mc-l1的表达,减少神经元凋亡。LY294002可抵消脑缺血预处理的保护作用。

慢性鼻-鼻窦炎鼻黏膜中糖原合成酶激酶3β与PI3K／Akt及白细胞介素6间的相关性

目的研究慢性鼻-鼻窦炎鼻黏膜中糖原合成酶激酶3B（glycogensynthasekinase313，GSK3p）与P13K／Akt信号通路以及细胞因子白细胞介素（intedeukin，IL）6之间的相关性及其意义。方法分别用半定量反转录聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫组化法检测30例慢性鼻一鼻窦炎伴鼻息肉（chronicrhinosinusitiswithnasalpolyps，CRSwNP）患者、20例慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉（chronicrhinosinusitiswithoutnasalpolyps，CRSsNP）患者的组织标本以及20例鼻中隔偏曲患者的鼻黏膜标本中GSK313、P13K、Akt的mRNA和蛋白质的表达，并用半定量RT—PCR检测细胞因子IL-6在CRSwNP组、CRSsNP组和对照组鼻黏膜中的表达。采用SPSS16．0软件进行统计学分析。结果GSK313、P13K、Akt、IL-6mRNA在CRSwNP组中的相对表达量分别为0．6254±0．0584、0．8239±0．7186、0．9369±0．0823、0．8973±0．0680，在对照组分别为0．2684±0．0726、0．3578±0．0994、0．6721±0．0590、0．5898±0．0891，差异有统计学意义（t值分别为2．358、3．071、2．764、2．239，P值均〈0．05）。以上四项指标在CRSwNP组和CRSsNP组之间的表达差异无统计学意义（t值分别为1．597、1．842、1．468、0．926，P值均〉0．05）。GSK3B、P13K、Akt蛋白主要表达在黏膜上皮细胞、黏膜下腺体细胞及炎性细胞中，阳性染色主要定位于胞质，其在CRS鼻黏膜中的阳性表达率明显高于对照组中的阳性表达率，差异有统计学意义（x。值分别为16．42、16．25、15．57，P值均〈0．01）。GSK313、P13K、Akt蛋白在CRSwNP组和CRSsNP组的阳性表达率差异无统计学意义（x2值分别为3．27、2．85、2．46，P值均〉0．05）。GSK3B与P13K、Akt以及IL-6在CRS患者中的表达呈正相关趋势（r值分别为0．645、0．617、0．583，P值均〈0．01）。结论IL-6、P13K、Akt、GSK3B在CRS鼻黏膜中的异常表达可能在CRS的发生、发展过程中发挥着一定的作用。

GPC3、GS、HSP70在肝细胞癌中的表达及意义

目的研究免疫组织化学套餐磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)、热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)、谷氨酰胺合成酶(glutamyne synthetase,GS)在肝细胞癌(HCC)诊断中的应用。方法对85例HCC进行组织学观察,病理学分级;免疫组织化学方法检测上述病例中GPC3、GS、HSP70的表达情况。结果 85例HCC病例中,GPC3阳性表达率为88.24%(75/85),GPC3在肝细胞癌的阳性表达率随着分化的升高而递增,高分化与中低分化者GPC3的表达差异有统计学意义,与分化程度相关,其中7例可见癌旁再生结节个别细胞阳性表达;85例中80例HSP70均有不同程度的阳性表达,与HCC分化无明显相关,3例癌周组织中可见汇管区周围肝细胞着色;GS在HCC及周围肝组织的表达方式不同,HCC中有67.06%(57/85)阳性表达,GS的阳性表达与分化无明显相关性。结论 HSP70、GS、GPC3 3个指标的应用对于HCC的诊断具有各自的优点和缺点,在日常工作中,需在HE形态学基础上,结合上述3个指标的分布特点和表达强弱综合评估,免疫组化指标的应用可以进一步提高HCC诊断的可靠性。

PI3K/AKT/GSK-3β信号通路与心肌缺血/再灌注损伤的相关性研究

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在肿瘤细胞中被发现。随着分子医学的发展,研究发现,该通路通过调控下游的多种效应分子对器官的缺血/再灌注损伤起保护作用,其中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是主要效应分子,两者联合被称为PI3K/AKT/GSK-3β信号通路。该通路在心肌细胞缺血/缺氧培养、心肌暖缺血/再灌注损伤及离体心脏心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用已经得到证实,但在心脏移植中对于心肌缺血冷保护及移植后的再灌注损伤的作用报道较少,需要进一步探讨。