微小RNA-155/含有SH2结构的5肌醇磷酸酶-1与非酒精性脂肪性肝病患者发生心血管事件的相关性

目的分析微小RNA-155(microRNA,miR-155)-155/含有SH2结构的5肌醇磷酸酶-1(SHIP-1)与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者发生心血管事件的相关性。方法选取2018年3月-2019年7月云南省第一人民医院收治的NAFLD患者104例,以及同期接受健康体检志愿者110例作为对照组。检测两组受试者BMI、血压及空腹血糖(FPG)、TC、TG、LDL-C、HDL-C、ALT、AST、GGT、TBil等指标,采用荧光定量PCR法检测两组受试者外周血miR-155及SHIP-1 mRNA表达。计量资料2组间比较采用t检验;计数资料组间比较采用χ^2检验;等级资料组间比较采用Kruskal-Wallis H秩和检验。相关性检验采用Pearson分析。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析miR-155/SHIP-1值对患者心血管事件的预测价值。结果NAFLD组患者BMI、FPG、TC、TG、LDL-C、ALT、AST、GGT、TBil水平均明显高于对照组,HDL-C水平明显低于对照组,miR-155 mRNA相对表达量明显高于对照组,SHIP-1 mRNA相对表达量明显低于对照组,且miR-155/SHIP-1值、心血管事件发生率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(t值分别为6.617、9.323、6.668、8.633、4.285、22.099、24.093、20.438、12.366、6.515、18.893、18.411、29.967,χ^2=10.476,P值均<0.01)。根据患者miR-155/SHIP-1值将患者分为3组,3组间BMI、FPG、TC、TG、LDL-C、HDL-C、ALT、AST、GGT、TBil以及心血管事件发生率比较,差异均有统计学意义(H值分别为20.923、7.936、6.256、16.181、21.572、8.435、18.912、22.869、7.665、18.657、9.701,P值均<0.05)。miR-155/SHIP-1值与BMI、FPG、TC、TG、LDL-C、ALT、AST、GGT、TBil呈显著正相关(r值分别0.297、0.317、0.332、0.327、0.286、0.334、0.352、0.342、0.350,P值均<0.001),与HDL-C呈显著负相关(r=-0.279,P<0.001)。发生心血管事件患者miR-155/SHIP-1值(3.642±1.082)明显高于未发生心血管事件患者(2.237±0.703),差异有统计学意义(t=11.104,P<0.05);miR-155/SHIP-1值预测NAFLD患者发生心血管事件的ROC曲线下面积为0.902。结论NAFLD患者糖脂代谢及肝功能异常与miR-155/SHIP-1表达密切相关,且miR-155/SHIP-1值对NAFLD患者发生心血管事件具有一定的预测价值。

电针足阳明经穴后家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度、三磷酸肌醇及环磷酸腺苷含量的变化

目的:通过测定胃窦平滑肌细胞内信使物质钙离子浓度及三磷酸肌醇、环磷酸腺苷含量的变化,探讨针刺足阳明经穴对胃窦平滑肌细胞内信息转导通路的影响。方法:实验于2003-06/2004-05在湖南中医学院针灸基础实验室完成。选用清洁级健康成年新西兰大耳白兔55只,随机分为5组,每组11只。①生理盐水组耳缘静脉滴注9g/L氯化钠溶液。②阿托品组耳缘静脉滴注0.25mg/L阿托品。③电针足阳明经穴组、电针足少阳经穴组和电针足太阳经穴组均在滴注阿托品总量的一半时,分别电针双侧足阳明经穴、足少阳经穴、足太阳经穴30min。各组分别处理后,分离胃窦平滑肌细胞,制成活的单个平滑肌细胞悬液;测定胞内钙离子浓度采用荧光法;测定胞内三磷酸肌醇含量应用蛋白质竞争结合分析法;测定胞内环磷酸腺苷含量采用放射免疫计数法。结果:纳入家兔55只,每组11只。最终进入结果分析动物数为:钙离子浓度分析55只,每组11只,无脱失;三磷酸肌醇及环磷酸腺苷含量分析数均为45只,均脱失10只。①各组家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度的比较:阿托品组、足少阳经穴组与足太阳经穴组钙离子浓度明显低于足阳明经穴组[(172.97±60.38),(203.57±72.20),(183.52±76.81),(321.22±55.36)nmol/L(F=9.37,P<0.01)]。②各组家兔胃窦平滑肌细胞内三磷酸肌醇含量的比较:阿托品组、足少阳经穴组、足太阳经穴组三磷酸肌醇含量均明显低于足阳明经穴组[(21.87±10.16),(21.08±10.97),(23.81±12.06),(39.00±12.97)pmol/106(F=3.61,P<0.01)]。③各组家兔胃窦平滑肌细胞内环磷酸腺苷含量的比较:各组差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:针刺足阳明经穴可使家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子、三磷酸肌醇含量明显增高。脑肠肽是足阳明经与胃相关的重要物质基础,参与调节胃平滑肌运动的脑肠肽受体后信号转导通路可能与胞内钙离子、三磷酸肌醇等信使物质有关。

六磷酸肌醇对人前列腺癌细胞增殖的抑制作用及其与胰岛素样生长因子结合蛋白-3的关系

目的：研究六磷酸肌醇（IP6）抑制人前列腺癌细胞LNCaP细胞增殖的情况,及该抑制过程与胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）表达水平的关系.方法：将LNCaP细胞分为四组：空白对照组不做任何处理;小分子干扰RNA（siRNA）组使用siRNA技术对LNCaP细胞实施IGFBP-3基因沉默;siRNA＋ IP6组为接受IP6刺激的IGFBP-3基因沉默的LNCaP细胞;IP6组为接受IP6刺激的普通LNCaP细胞.MTT法计算不同浓度IP6处理后各组细胞的存活率.PI染色结合流式细胞技术分析各组细胞的细胞周期,AnnexinV-FITC/PI双染结合流式细胞技术分析IP6对LNCaP细胞的凋亡诱导情况.荧光实时定量PCR技术和蛋白质印迹法分析各组细胞内IGFBP-3和Bcl-2的表达变化.结果：1.5 mmol的IP6可以引起LNCaP细胞的增殖抑制,诱导G2期阻滞,并可以诱导细胞凋亡.IP6刺激细胞后可以引起IGFBP-3的表达增高,Bcl-2的表达降低,而IGFBP-3基因沉默可以减轻IP6对LNCaP细胞的增殖抑制作用,同时抑制Bcl-2的表达降低.结论：IP6可引起LNCaP细胞的增殖抑制,其机制可能与IGFBP-3的高表达有关,IGFBP-3可能通过影响Bcl-2的表达发挥作用.

神经降压素对人结肠癌细胞株生长调控及其机制

目的 研究神经降压素对人结肠癌细胞株的生长调控作用及其的信号传导途径。方法 以不同浓度的神经降压素处理人低分化结肠癌细胞系Clone A细胞,用MTT法观察细胞的生长情况;分别应用液体闪烁测量法、γ-闪烁记数仪测定细胞内三磷酸肌醇(IP3)及环磷酸腺苷(c AMP)含量。结果 不同浓度的神经降压素(10 - 9～10 - 5m ol/ L)能显著地促进Clone A细胞的生长(P<0 .0 1) ,且呈剂量依赖关系(r=0 .94 2 ,P<0 .0 1) ,这种促生长作用可以被神经降压素受体拮抗剂所阻断。神经降压素能显著促进Clone A细胞内IP3、c AMP含量增加,这些作用也可以被神经降压素受体拮抗剂所抑制。结论 神经降压素能促进Clone A细胞生长,且可被神经降压素受体拮抗剂所抑制,其受体后信息传递途径,可能是通过磷酸肌醇和腺苷环化酶途径。

TNFα增强肾小球系膜细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体表达受PKCα调控

目的 通过研究蛋白激酶Cα（PKCα）参与调控肿瘤坏死因子α（TNFα）增强肾小球系膜细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP3RI）表达的信号机制,揭示TNFα引起肝肾综合征肾小球滤过率（GFR）下降的分子机制.方法 选择大鼠系膜细胞株（GMCs）进行体外培养.按TNFα处理GMCs的不同时间点,分为对照组（D）、TNFα-2 h组、TNFα-4 h组、NFα-8 h组、TNFα-24 h组,另设2组分别为Sanfingol-8 h组（S）、TNFα＋ Sanfingol共培养8h组（TS）,共6组.应用免疫细胞化学染色、Western blot、Real time-PCR检测方法,观察TNFα孵育的GMCs中IP3RI表达的变化.结果 免疫细胞化学染色发现：IP3RI主要分布于GMCs的胞浆内,对照组阳性信号较弱,TNFα处理各组棕褐色阳性信号增强,以TNFα-8 h组最明显.Western blot分析发现：TNFα-4 h组、TNFα-8 h组、TNFα-24 h组与对照组差异有统计学意义（4 h：1.82±0.63,8 h：2.95±0.66,24 h：2.48±0.72,D：1±0.02,F=9.24,P＜0.05）.其中TNFα-8 h组、TNFα-24 h组IP3RI表达最高（P＜0.05）.S组、TS组与对照组差异无统计学意义（S：1.39 ±0.65,TS：1.35±0.37,P＞0.05）.Real time-PCR发现：TNFα处理各时间点组与对照组相比IP3 RI表达均明显增加,差异有统计学意义（2 h：3.35±1.97;4 h：3.16±1.35,8 h：3.70±1.76;24 h：4.49±1.70,D：1±0.01,F=6.167,P＜0.05）. TNFα各处理组组间差异无统计学意义（P＞0.05）.S组、TS组与对照组比较差异无统计学意义（S：1.53±0.79,TS：1.32±0.38,P＞0.05）.结论 IP3 RI主要分布于GMCs的胞浆内,TNFα可增加肾小球系膜细胞IP3 RI蛋白、mRNA的表达,并可被PKCα抑制剂Sanfingol所阻断,这可能是肝肾综合征时TNFα引起GFR下降的重要信号机制.

鼻咽癌中IGF-1、PI3K、mTOR和caspase-3的表达及意义

【目的】观察鼻咽癌(NPC)组织中IGF-1、PI3K、mTOR和caspase-3的表达,探讨其相互关系及其在NPC发生发展中的作用。【方法】应用免疫组织化学方法检测IGF-1、PI3K、mTOR和caspase-3在60例NPC组织与23例鼻咽部慢性炎症组织中的表达水平。【结果】60例NPC中,IGF-1,PI3K,mTor的阳性率分别为78.3%(47/60),86.7%(52/60),93.3%(56/60),明显高于鼻咽部慢性炎症组的52.2%(12/23),60.9%(14/23),69.6%(16/23)(P<0.05);60例NPC中,caspase-3的表达率为48.3%(29/60),明显低于鼻咽部慢性炎症组73.9%(17/23)(P<0.01);60例NPC中,IGF-1的表达与mTOR、PI3K的表达强度正相关(P<0.05),IGF-1、mTOR、PI3K的表达与caspase-3的表达呈负相关(P<0.01)。【结论】胰岛素样生长因子可能通过激活mTOR信号通路而促进肿瘤细胞的增殖;其与mTOR信号通路的激活可能通过抑制caspase-3的表达而减少肿瘤细胞的凋亡,其在NPC的发病机制中起重要的作用。

小牛血清去蛋白联合甲钴胺治疗糖尿病周围神经病变疗效观察

目的评价小牛血清去蛋白联合甲钴胺治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的疗效。方法 65例糖尿病周围神经病变患者,随机分为治疗组和对照组,治疗组给予小牛血清去蛋白800 mg加入0.9%氯化钠注射溶液250 ml静脉滴注,1次/d,甲钴胺1000 u加入0.9%氯化钠注射溶液100 ml静脉滴注,1次/d。对照组给予α-硫辛酸600 mg加入0.9%氯化钠注射溶液250ml静脉滴注,1次/d,甲钴胺1000 u加入0.9%氯化钠注射溶液100 ml静脉滴注,1次/d。疗程2周。比较两组治疗前后主观症状、跟腱反射及神经传导速度(NCV)改善情况。结果两组患者治疗后症状及腱反射改善明显(>60%),最高达91.9%,神经传导速度增加显著(P<0.05)。但两组间比效差异无统计学意义。结论小牛血清去蛋白联合甲钴胺治疗糖尿病周围神经病变疗效确切,可推荐作为治疗糖尿病周围神经病变的一线治疗。

RNA阵列技术检测自发性高血压大鼠G蛋白-肌醇磷脂途径基因表达改变

目的探讨G蛋白-肌醇磷脂途径基因表达改变在原发性高血压病理机制中的作用。方法分别提取2、4、6、8、10、12周龄各组雄性自发性高血压大鼠(SHR,38只)和正常血压大鼠(WKY,38只)心室肌、血管平滑肌、肝脏和肾脏组织的总RNA,共294个样品,利用高通量RNA阵列技术检测组织中G蛋白G11、Gq和PLCβ在不同周龄SHR中mRNA的表达谱改变。结果(1)SHR在6、8、10、12周龄血压[158mm Hg±8mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),174mm Hg±4mm Hg,198mm Hg±13mm Hg,217mm Hg±9mm Hg],显著高于同周龄WKY组(109mm Hg±6mm Hg,128mmHg±5mm Hg,142mm Hg±4mm Hg,141mm Hg±5mm Hg,P均<0.01),10、12周龄心室肌重量/体重比显著增加(P均<0.01);(2)SHR在4、6、8、10、12周龄,心肌组织G11的表达(1.42±0.35、1.87±0.40、1.96±0.24、2.09±0.38、2.34±0.45)显著性高于WKY(1.05±0.18、1.25±0.37、1.26±0.35、1.45±0.30、1.51±0.42,P<0.05或P<0.01),G11在血管平滑肌和肾脏组织的表达有类似的结果;(3)SHR在4、6、8、10、12周龄心肌组织Gq的表达(1.12±0.21、1.30±0.26、1.45±0.35、1.77±0.42、2.05±0.46)显著高于WKY(0.88±0.09、0.96±0.10、1.03±0.10、1.21±0.38、1.29±0.39,P<0.05或P<0.01),血管平滑肌和肾脏组织亦有相似的结果;(4)PLCβ基因表达在心肌组织和肾脏中在4、6、8、10、12周龄出现显著性升高(P<0.05或P<0.01),而在血管平滑肌组织中未见PLCβ的明显差异表达;(5)肝脏组织中未见上述基因的明显差异表达。结论G蛋白-肌醇磷脂途径相关基因mRNA表达增加是原发性高血压的发生和发展过程中重要的分子生物学机制。

大鼠肾α_1肾上腺素受体亚型:特征,功能与调制(英文)

Renal α_1-adrenoceptors are involved in the regulation of renal blood flow, glomerular filtration rate, renin secretion, and sodium, calcium and bicarbonate reabsorption. This paper reviews the characterization of rat renal α_1-adrenoceptor subtypes, their signaling mechanisms, their possible functional roles, and their regulation in the spontaneously hypertensive rat(SHR).