羊驼皮肤中肌钙蛋白C(TnC)基因表达分析

从羊驼皮肤cDNA文库中筛选到TnC基因的克隆,经PCR鉴定并测序得知:克隆大小为722 bp,含有一个完整的开放阅读框(ORF)。并利用生物信息学方法对该基因进行分析,发现该基因编码160个氨基酸,为膜蛋白,部分具有高度同源性,并还有一个EFh家族的保守区域,是该蛋白的功能区域。

CODEHOP法设计简并引物克隆鲫鱼肌钙蛋白C(TnC)基因及序列分析

本文结合生物信息学资源和生物软件的使用,针对特定的氨基酸序列设计简并引物,利用CODEHOP法设计简并引物克隆鲫鱼肌钙蛋白C(Tn C)基因,并构建系统进化树。证明该基因片段与其他鱼类Tn C基因具有较高的同源性,其中与斑马鱼同源性最高达到96%,与大西洋鲑、白斑狗鱼、虹鳟、斜带石斑鱼、斑点叉尾鮰的同源性分别为92%、92%、91%、91%、85%。研究表明,应用此种方法设计出的引物简并度相对较低,Tm值的修改较为灵活,产物特异性强。

猪骨骼肌快肌肌钙蛋白C2基因的cDNA克隆与表达分析

从人骨骼肌快肌肌钙蛋白C2（TNNC 2）基因出发，在dbEST数据库中进行同源性搜索，找到一个有较高同源性且在猪背最长肌中表达EST（BM083186）。通过电子克隆和进一步RT-PCR实验验证，获得猪TNNC 2基因全长cDNA序列，其全长843bp，开放阅读框为201-683bp，编码有160个氨基酸。同源性分析结果表明，与人、鼠的骨骼肌快肌肌钙蛋白C2基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为93．6％、90．5％，蛋白序列同源性均为97．5％。多种组织的半定量RT-PCR研究表明，该基因在骨骼肌中表达，并且在杜洛克猪背最长肌中的表达比兰塘猪高。

c-fos反义基因对缺血缺氧心肌细胞肌钙蛋白表达的影响

目的探讨cfos反义基因转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞肌钙蛋白表达的影响。方法烧伤血清采自30%TBSAⅢ度烫伤Wistar大鼠:采用含1%O2的混和气体作为缺氧模型;采用基因重组技术构建cfos反义基因重组体;由LipofectamineKit介导心肌细胞转染;于缺氧复合烧伤血清处理1,3,7h不同时相点采用Westernblot检测cfos蛋白,肌钙蛋白T(TnT)的表达变化。结果加入烧伤血清并造成缺氧的非转染心肌细胞(简称非转染组),cfos蛋白显著表达,3h达到最高峰,与正常对照组比较,TnT表达显著下降,7h降至最低水平;转染cfos反义基因重组体(简称转染组)后,cfos蛋白表达显著下降,TnT表达却显著回升。结论缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞TnT表达较正常心肌细胞明显减少,当在缺氧复合烧伤血清处理前转染cfos反义基因后,心肌细胞TnT表达较单纯缺氧复合烧伤处理心肌细胞显著回升,表明cfos反义基因转染能抑制心肌细胞TnT的表达下降。

猪TNNC1基因和TNNC2基因在肌肉组织中的发育性表达研究

为了探明肌钙蛋白不同亚型在肌纤维增殖与类型转变上的作用和分子机理,本研究采用荧光定量PCR技术检测了TNNC 1基因和TNNC 2基因在25日龄、70日龄和150日龄三个生长阶段的大白猪和山西黑猪的背最长肌、腰肌和股肌中的表达变化。结果表明:这两种基因在大白猪和山西黑猪的三种肌肉组织中均有表达,但存在统计学意义上的极显著差异。TNNC 1基因在大白猪的背最长肌和腰肌中的表达存在相似的变化趋势。在大白猪上,TNNC 1基因在25日龄时的背最长肌和腰肌中表达量最高,在150日龄时的表达量降到最低水平;在山西黑猪上,TNNC 1基因在25日龄时的股肌组织中表达量较低,而在70日龄时的腰肌、70日龄时的股肌组织、150日龄时的股肌组织中表达量最高。在大白猪上,TNNC 2基因在25日龄时的背最长肌和150日龄时的股肌中表达量较高;在山西黑猪上,TNNC 2基因在70日龄时的腰肌和股肌中表达量较高。说明TNNC 1基因与TNNC 2基因在肌纤维发育与分化过程中具有重要的调节作用,可作为检测肌纤维类型的分子标记,为探索猪的肌肉发育和改善肉品质的研究提供理论参考。

心肌组织特异性表达质粒的构建及表达

应用ＰＣＲ方法从大鼠基因组ＤＮＡ中扩增出心肌组织特异性顺式作用元件──心肌肌钙蛋白Ｃ（ＣａｒｄｉａｃＴｒｏｐｏｎｉｎＣ，ｃＴｎＣ）增强子／启动子序列，构建成ｃＴｎＣ启动子驱动ＬａｃＺ基因的真核表达质粒ｐｃＴｎＣβ。ＩｎＶｉｔｒｏ和ＩｎＶｉｖｏ试验证明该调控元件能驱动外源性基因在心肌细胞中特异性表达。