肌钙蛋白I3基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2生物学特性的影响

目的探讨肌钙蛋白I3(Tnni3)基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2生物学特性的影响。方法培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,分为2组:转染阴性对照小干扰RNA(NC-siRNA)组和转染Tnni3小干扰RNA(Tnni3-siRNA)组。分别于转染后48 h、72 h收集细胞,实时定量PCR检测Tnni3 mRNA和Caspase-3 mRNA表达,Western blot检测Tnni3蛋白、Cyclin A1蛋白和Cyclin B1蛋白表达,Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果与转染NC-si-RNA组比较,转染Tnni3-siRNA 48 h,Tnni3基因mRNA(0.27±0.05比1.00±0.00)和蛋白(0.18±0.03比1.00±0.00)表达降低,差异均有统计学意义(t=25.26、47.40,均P<0.01)。转染NC-siRNA组和转染Tnni3-siRNA组H9C2细胞均出现细胞凋亡。与转染NC-siRNA组比较,转染Tnni3-siRNA 72 h,H9C2细胞凋亡率明显增高[(11.30±1.85)%比(0.33±0.15)%],Caspase-3基因mRNA表达升高(1.39±0.13比1.00±0.00),差异均有统计学意义(t=10.24、5.19,均P<0.01)。与转染NC-siRNA组比较,转染Tnni3-siRNA组表现为显著的时间依赖性细胞增殖能力降低(48 h:0.32±0.06比0.46±0.03;72 h:0.31±0.01比0.63±0.04;96 h:0.36±0.01比0.75±0.04),差异均有统计学意义(t=3.62、13.45、16.39,均P<0.05)。转染Tnni3-siRNA 72 h,G1期、S期和G2期细胞比例分别为(71.25±3.82)%、(18.28±2.78)%和(9.94±1.09)%。与转染NC-siRNA组比较,转染Tnni3-siRNA组G2期细胞比例明显增加[(9.94±1.09)%比(4.54±0.99)%],Cyclin A1蛋白表达升高(1.89±0.09比1.00±0.00),Cyclin B1蛋白表达降低(0.47±0.06比1.00±0.00),差异均有统计学意义(t=6.35、17.12、15.32,均P<0.01)。结论Tnni3基因表达下调能够诱导大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡,抑制细胞增殖,导致细胞周期阻滞于G2期。