IGF-Ⅰ对外斜视猫模型内直肌Myf5和MyoD表达影响

目的观察外源性胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对外斜视猫模型内直肌生肌因子5(Myf5)、成肌分化因子(MyoD)表达的影响,探讨外源性IGF-Ⅰ治疗斜视的可行性。方法选择视觉发育期内的幼猫,行外科手术制备外斜视模型。实验组术后即刻及术后每2周右眼内直肌注射50μL(5μg)IGF-Ⅰ,标准对照组注射50μL生理盐水,空白对照组不做注射治疗。分别于治疗4、8、12周时处死幼猫取眼外肌组织,提取RNA进行荧光定量PCR,观察各组幼猫内直肌MyoD和Myf5表达差异及其与治疗时间的关系。结果治疗4周时,3组Myf5、MyoD mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05);治疗8、12周时,实验组Myf5、MyoD mRNA表达量均较空白对照组、标准对照组升高,差异具有统计学意义(F=14.388~342.990,P<0.01)。实验组Myf5、MyoD mRNA的表达量随治疗时间延长逐渐升高,与治疗时间呈正相关关系(r=0.949、0.949,P<0.01);标准对照组、空白对照组Myf5和MyoD mRNA表达量与治疗时间无相关性(P>0.05)。结论 IGF-Ⅰ局部注射能够促进眼外肌中Myf5和MyoD mRNA的表达,随着作用时间的延长其作用更加明显。

心肌损伤修复实验指标:MyoD基因重组腺病毒载体的构建及鉴定(英文)

背景:MyoD基因是肌肉转录因子家族成员之一,转染MyoD基因可以启动肌分化过程,使非肌细胞转变为肌细胞。MyoD基因仅在骨骼肌表达,基于心肌细胞和骨骼肌细胞有相同的收缩装置,可以设想将外源MyoD基因诱导坏死心肌局部的成纤维细胞向具收缩功能的骨骼肌细胞转化,可能会成为临床治疗心衰的又一种方法。目的:构建和鉴定MyoD基因重组腺病毒载体,为研究MyoD对心肌损伤的修复作用提供试验基础。设计:单一样本实验。单位:南京医科大学第一附属医院心脏科。材料:实验于2004-09/2005-09在南京医科大学微生物学与免疫学实验室完成。以MyoD基因和非复制型腺病毒表达载体为研究对象。方法:从pEMSV-MyoD质粒上用聚合酶链反应法扩增出MyoDcDNA片段,再通过聚合酶链反应使MyoD基因加上CACC序列接头,经过定向拓扑克隆使目的基因连接到转移载体上,再通过LR酶促反应,将目的基因转移到腺病毒表达载体DNA上,获得MyoD基因重组的腺病毒DNA,用脂质体转染法转染HEK293A细胞,包装扩增出MyoD基因重组的腺病毒。主要观察指标:聚合酶链反应鉴定和DNA测序来证实MyoDcDNA片段大小和序列的正确性,并测定病毒滴度。结果:经聚合酶链反应鉴定和DNA测序证实MyoD基因重组腺病毒含大小正确的目的片段,其DNA序列正确。病毒滴度为1.3×1011pfu/mL。结论:成功构建了MyoD基因重组腺病毒载体。

MyoD家族蛋白在大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩中的作用

目的 探讨MyoD家族蛋白在去神经肌萎缩发生机制中的作用。方法 应用臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩的大鼠模型 ,采用Western 印迹法检测MyoD ,肌细胞生成素蛋白表达的变化 ,通过逆转录聚合酶链式反应技术 (RT PCR)和Northern 印迹法研究MyoD和肌细胞生成素基因表达改变。结果 骨骼肌萎缩时 ,肌细胞生成素蛋白质的表达在去神经支配后 2 4h内先迅速上调 ,然后逐渐下降 ;而MyoD蛋白表达则在去神经支配后即开始逐渐下调。肌细胞生成素和MyoD基因在去神经支配后表达也明显下降。而氨哮素等药物可以分别上调肌细胞生成素和 /或MyoD的蛋白表达。结论 臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩时肌细胞中MyoD家族蛋白质和肌细胞生成素表达的下调抑制了成肌细胞的分化融合修复作用 ,加剧了骨骼肌的萎缩。氨哮素等药物通过分别上调肌细胞生成素和

梭形细胞/硬化性横纹肌肉瘤20例临床病理学观察

目的:探讨梭形细胞/硬化性横纹肌肉瘤(spindle cell/sclerosing rhabdomyosarcoma,SRMS)的临床病理学特征、免疫表型,及MyoD1表达与基因突变的关系。方法:收集2009至2019年20例空军军医大学(第四军医大学)西京医院SRMS病例资料和切片。对肿瘤切除标本进行组织学形态和免疫组织化学EnVision染色,对12例进行MYOD1基因Sanger法测序分析。结果:20例包括儿童12例和成人8例,其中男性11例,女性9例,年龄8个月至85岁,平均22岁。患者临床主要表现为逐渐增大的无痛性肿块。发生于头颈部7例,腹盆腔7例(腹腔4例、盆腔2例、左侧胸腹腔1例),上肢5例(左肩部2例、右腋下1例、右肱骨1例、左前臂1例),背部1例。肿瘤直径2.5~20.0 cm,平均6.2 cm。病理组织学观察,肿瘤主要由梭形细胞组成,呈束状排列,其中7例至少部分区域呈鱼骨样或人字形的束状排列,似成人型纤维肉瘤;4例可见不同程度明显的间质硬化,2例局部可见血管外皮细胞瘤样结构,4例出现疏松黏液样区域,9例可见不同程度的坏死灶。有3例在梭形细胞之间有少量的梭形或多角形的横纹肌母细胞。在该组病例中,16例为纯梭形细胞,2例为纯硬化性,2例为梭形细胞/硬化性混合性横纹肌肉瘤。免疫组织化学显示,梭形细胞均为结蛋白阳性,以及Myogenin和/或MyoD1不同程度阳性;而其他标志物,如广谱细胞角蛋白、间变性淋巴瘤激酶1、CD34、上皮细胞膜抗原、HMB45、H-cald、平滑肌肌动蛋白和S-100蛋白均阴性。12例测序病例中,有4例(4/12)检测到MYOD1基因p.L122R位点突变。有效随访12例,时间1~51个月,3例因多发转移死亡,3例复发,2例带瘤生存。结论:SRMS是少见类型的横纹肌肉瘤,好发于头颈部,多见于儿童,成人较少见。有MYOD1基因突变的SRMS通常有弥漫的MyoD1核阳性,与更具有侵袭性的生物学行为有关。