肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因ALPL抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖的研究

目的研究肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因(alkaline phosphatase,liver/bone/kidney,ALPL)在卵巢癌细胞株中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响。方法通过qRT-PCR检测ALPL在不同卵巢癌细胞株(HEY、SKOV3、8910、ES-2、OVCAR3、3AO、A2780)mRNA中的表达,并与正常卵巢组织进行比较。在低表达ALPL的卵巢癌细胞株SKOV3中外源性过表达ALPL,通过MTT法、平板克隆实验检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期。通过建立裸鼠皮下种植瘤模型,观察过表达ALPL的SKOV3细胞在体内的成瘤能力。结果 ALPL在卵巢癌细胞中的mRNA表达低于正常卵巢组织(P<0.01),外源性过表达ALPL可抑制SKOV3细胞的增殖和克隆形成率(P<0.01),阻滞细胞G1期向S的转化,并抑制肿瘤细胞的成瘤能力(P<0.05)。结论 ALPL表达的恢复可以明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖及成瘤能力。

过表达肝/骨/肾型碱性磷酸酶对小鼠急性心肌梗死后心室重塑的影响

目的探讨肝/骨/肾型碱性磷酸酶(ALPL)过表达对小鼠急性心肌梗死(MI)后心室重塑的影响。方法36只8周龄雄性C57BL/6 J小鼠随机分为对照组(sham组),心肌梗死组(MI+Adv-EGFP组)和ALPL过表达组(MI+Adv-ALPL组),每组12只。术后2周,使用心脏彩色超声测定小鼠心脏功能,HE染色观察小鼠心脏组织病理变化,Real-time PCR检测小鼠心脏ALPL mRNA表达水平,Western blotting检测ALPL、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)表达情况,苦味酸天狼猩红染色偏振光法测定各组标本胶原容积分数(CVF)和Ⅰ型/Ⅲ型胶原比值。结果与MI组相比,过表达ALPL组小鼠心脏左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS)明显下降(P<0.05),过表达ALPL组HE染色可见心肌纤维断裂,排列紊乱,梗死区域纤维化明显,心脏组织α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达及CVF均显著增大(P<0.05),同时ColⅠ/ColⅢ比值显著增加(P<0.05)。结论ALPL过表达加重小鼠急性心肌梗死后心室病理性重塑。

补肾活血汤水提物调控Cbfal/RUNX2基因沉默骨髓间充质干细胞SP7/Osterix及碱性磷酸酶的表达

背景:补肾活血汤可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化,探究分子机制利于推向临床。目的:探讨补肾活血汤水提物对Cbfal/RUNX2基因沉默的骨髓间充质干细胞Osterix、碱性磷酸酶表达的影响。方法:骨髓贴壁筛选法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,Cbfal/RUNX2基因沉默慢病毒转染骨髓间充质干细胞。取第3代骨髓间充质干细胞(空白对照组)、慢病毒沉默骨髓间充质干细胞(沉默组)和阴性病毒载体预处理骨髓间充质干细胞(阴性对照组),以及上述3组骨髓间充质干细胞加入100 mg/L补肾活血汤水提物干预3 d后,检测RUNX2、Osterix蛋白和mRNA表达以及碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)Cbfal/RUNX2基因沉默慢病毒转染效率达约90%;(2)与空白对照组和阴性对照组比较,沉默组骨髓间充质干细胞RUNX2和Osterix的蛋白及mRNA表达均下降,碱性磷酸酶活性也明显下降,差异有显著性意义(P<0.01);(3)补肾活血汤水提物干预后,沉默组骨髓间充质干细胞RUNX2、Osterix的表达和碱性磷酸酶活性明显增加,差异有显著性意义(P<0.01);(4)结果表明,补肾活血汤水提物可以促进骨髓间充质干细胞的RUNX2、Osterix表达,亦增加了碱性磷酸酶活性,从而促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

琼脂糖电泳法、酶联免疫法和热失活法测定骨型碱性磷酸酶同工酶的比较

普通琼脂糖电泳不能分离碱性磷酸酶(ALP)肝型和胆汁型同工酶，也不能定量分析肝型和骨型同工酶。我们在实验中，将Triton X-100加入琼脂糖中，发现区带压缩得更好，若再辅以热失活实验，即能对肝型、骨型、小肠型和胆汁型同工酶进行定量分析。笔者采用琼脂糖电泳法、酶联免疫法(ELISA)和热失活法对骨型ALP进行测定，结果表明前两种方法具有显著相关性。通过与热失活法对比研究及大量的临床实践，获得了一些经验与实验数据，现报道如下。

碱性磷酸酶同工酶在老年女性骨质疏松诊断中的应用

目的探讨碱性磷酸酶(ALP)同工酶在老年女性骨质疏松诊断中的应用。方法采用神经氨酸苷酶,用琼脂糖电泳法对体检正常者50例(对照组)和老年女性骨质疏松患者55例(骨质疏松组)血清中的ALP同工酶进行分离分析。结果经神经氨酸苷酶处理后,琼脂糖电泳法可以分离肝和骨ALP;两组肝型ALP比较,差异无显著性意义(P>0.05);骨型ALP比较,差异有显著性意义(P<0.05);热失活法和电泳法检测骨ALP具有显著的相关关系(r=0.92,P<0.05)。结论骨型ALP可为临床诊断老年女性骨质疏松提供可靠的依据。

益元壮骨膏方治疗肝肾阴虚型原发性骨质疏松症临床效果及对骨密度的影响

目的观察益元壮骨膏方治疗肝肾阴虚型原发性骨质疏松症(OP)患者临床效果及对骨密度(BMD)的影响。方法回顾性分析2017年10月—2021年6月收治的肝肾阴虚型原发性OP 106例的临床资料。按照治疗方法分为观察组和对照组各53例。对照组给予碳酸钙D_(3)片和骨化三醇胶丸治疗,观察组在对照组基础上给予益元壮骨膏方治疗。观察2组临床效果,比较治疗前、治疗6个月后2组中医证候积分、疼痛程度、不同部位BMD、骨代谢指标水平。结果观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后6个月,2组各中医证候积分、视觉模拟评分法评分、血清骨碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b、Ⅰ型原胶原N-端前肽水平均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。2组L_(2~4)、股骨颈、股骨大转子BMD及血清骨钙素水平均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。结论益元壮骨膏方治疗肝肾阴虚型原发性OP效果显著,能有效改善患者中医证候,减轻疼痛,增加BMD,提升骨代谢水平。

中西医结合治疗肾阳虚型绝经后骨质疏松症的疗效及对ALP、E_2及IL-6的影响

目的观察中西医结合治疗肾阳虚型绝经后骨质疏松症的临床疗效及对血清碱性磷酸酶(ALP)、雌二醇(E2)及白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法将80例肾阳虚型绝经后骨质疏松症女性患者随机分为治疗组与对照组各40例,对照组给予骨肽片口服,治疗组加用自拟益肾壮骨汤治疗,疗程均为28 d。比较2组中医证候疗效,治疗前后骨密度(BMD)及ALP、E2、IL-6水平变化。结果治疗组治疗后神疲倦怠、畏寒肢冷、夜尿频多等中医证候积分均较治疗前、同期对照组明显降低(P均<0.05);治疗后2组BMD均较治疗前明显升高(P均<0.05),且组间比较差异无统计学意义(P>0.05);但治疗组治疗后ALP、E2、IL-6水平较治疗前、同期对照组差异均有统计学意义(P均<0.05);2组治疗前、治疗1周时VAS评分比较差异均无统计学意义(P均>0.05),治疗2,4周时治疗组较对照组VAS评分明显降低(P均<0.05)。结论中西医结合治疗肾阳虚型绝经后骨质疏松症疗效理想,可显著改善伴随症状,其可能与改善ALP、E2、IL-6水平有关。

补肾通督胶囊对肾虚寒凝型RA患者OPG/RANKL/RANK系统及骨代谢的影响

目的观察补肾通督胶囊对肾虚寒凝型类风湿性关节炎患者OPG/RANKL/RANK系统及骨代谢的影响。方法入选类风湿性关节炎患者随机双盲分为治疗组(36例)和对照组(35例),治疗组口服补肾通督胶囊,对照组口服雷公藤多甙片,均服药12周,于治疗前后采用DTX-200型骨密度仪检测受试者非优势侧前臂桡尺骨远端三分之一处BMD及采用酶联免疫吸附法(ELISA)观察血清OPG、RANKL、M-CSF、PINP、BGP、BAP。结果补肾通督胶囊可以使RA患者血清OPG、BGP显著升高(P<0.01),RANKL、M-CSF、PINP、BAP显著降低(P<0.01);与对照组相比,治疗组OPG、RANKL变化水平更为明显(P<0.05)及PINP、BAP、BGP变化水平更加显著(P<0.01)。在BMD方面治疗组与治疗前比较无明显差异(P>0.05),对照组与治疗前相比显著降低(P<0.01),但两组间比较无明显差异(P>0.05)。结论补肾通督胶囊对肾虚寒凝型RA患者OPG/RANKL/RANK系统的调节及骨代谢具有良好的调节作用。

补益肝肾法对类风湿关节炎患者骨密度及骨代谢指标的影响

目的观察补益肝肾法对类风湿肝肾不足患者骨密度及骨源性碱性磷酸酶(BAP)影响。方法选取类风湿肝肾不足患者40例,随机分为治疗组和对照组各20例,治疗组用补益肝肾协定方配合钙尔奇D片口服,对照组给予钙尔奇D口服,疗程2个月,观察两组治疗前后骨密度血Ca及BAP水平的变化。结果治疗后,两组患者骨密度与治疗前比较存在显著性差异(P<0.05),而治疗后两组血Ca水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗组的BAP水平治疗前后比较存在显著性差异(P<0.05)。组间比较,治疗后,治疗组患者骨密度改善优于对照组,治疗前两组的BAP差异无统计学意义,而治疗后,治疗组的BAP水平较对照组显著降低(P<0.05)。结论补益肝肾法可提高类风湿关节炎患者骨密度,降低其BAP水平。

补肾法中药对去卵巢大鼠骨质疏松骨代谢指标的影响

目的探讨补肾法中药对去卵巢大鼠骨质疏松(OP)骨密度(BMD)、骨生物力学、血清碱性磷酸酶(ALP)、血清Ⅰ型前胶原羧端肽原(PICP)的影响。方法将36只SD雌性大鼠随机分为治疗组、假手术组和模型组。切除双侧卵巢造模,治疗组给予补肾法中药治疗,模型组予等量生理盐水,灌胃3个月后取材。Medical viva CT40测量获得BMD;三点弯曲实验获得最大应变和弹性模量;酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测血清ALP、PICP的含量。结果与假手术组比较,模型组BMD水平明显降低(P<0.05),最大应变和弹性模量均明显下降,血清ALP水平明显升高,血清PICP水平明显降低(均P<0.05)。与模型组比较,治疗组BMD无明显差异,但均有增长的趋势,最大应变和弹性模量均明显升高,血清ALP水平明显降低,PICP水平明显升高(均P<0.05)。结论补肾法中药可能通过降低OP模型大鼠血清ALP含量,升高PICP含量,提高骨生物力学性能和BMD,达到治疗OP的作用。

芪脂补肾壮骨方对老年股骨粗隆间骨折术后骨代谢的影响

目的探讨芪脂补肾壮骨方对老年股骨粗隆间骨折术后骨代谢的影响。方法将74例老年股骨粗隆间骨折患者随机分成研究组和对照组。对照组采用现代医学常规治疗;研究组在对照组基础上联合芪脂补肾壮骨方治疗;对比两组的临床总有效率;对比两组患者双侧大腿和小腿的周径差值;运用Harris髋关节功能评分标准评估患者的关节功能;测定两组患者治疗前后血清Ⅰ型前胶原氨基端前肽(procollagen typeⅠN-terminal propeptide,PINP)、Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(βcross-linked C-telopeptide of typeⅠcollagen,β-CTX)、骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)的水平。结果研究组患者的总有效率为94.59%(35/37),对照组为78.38%(29/37),组间有明显差异(P<0.05)。治疗前,两组的双侧大腿、小腿的周径差值无明显差异(P>0.05);两组治疗后的大腿、小腿的周径差值明显降低(P<0.05);治疗后,研究组的双侧大腿、小腿的周径差值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组的疼痛、肢体畸形、日常生活功能、关节活动度无明显差异(P>0.05);两组治疗后的疼痛、肢体畸形、日常生活功能、关节活动度均明显升高(P<0.05);治疗后,研究组的疼痛、肢体畸形、日常生活功能、关节活动度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组的PINP、β-CTX、BALP无明显差异(P>0.05);两组治疗后的PINP、BALP明显升高,β-CTX明显降低(P<0.05);治疗后,研究组的PINP、BALP高于对照组,β-CTX低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论芪脂补肾壮骨方可提高老年股骨粗隆间骨折的疗效,有助于改善术后关节功能,调节骨代谢的分泌。

大鼠松质骨中降钙素基因相关肽在脊髓损伤后的变化

背景:细胞因子异常及神经功能的异常、激素水平的改变均参与了脊髓损伤后骨质疏松的发生,以往对细胞因子及激素改变的研究较多,而对神经异常对骨调节的研究相对较少。目的:课题创新性地应用血生化与免疫组织化学相结合的方法,观察脊髓损伤后大鼠松质骨中神经多肽降钙素基因相关肽的变化,分析其在脊髓损伤后骨质疏松中的意义。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-09/12在解放军第四军医大学骨科研究所实验室完成。材料:3月龄SD大鼠48只,体质量为(210±16)g,随机均分为脊髓损伤组与对照组,每组24只。方法:脊髓损伤组于T10处完全横断脊髓;对照组仅行椎板切除术。主要观察指标:术后1,3,6周分批每组随机取8只动物处死。测定血骨特异性碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原氨基末端肽;对股骨髁松质骨行降钙素基因相关肽免疫组织化学染色,结合计算机图像分析系统对降钙素基因相关肽免疫阳性神经的染色强度进行定量分析。结果:脊髓损伤组各时间段血清Ⅰ型胶原氨基末端肽浓度显著高于对照组(P<0.05或0.01),各时间段血清骨特异性碱性磷酸酶活性低于对照组,但差异无显著性意义(P>0.05)。对照组各时间段分布于小梁骨内的降钙素基因相关肽免疫阳性神经呈强阳性,脊髓损伤组降钙素基因相关肽较对照组减弱(P<0.05或0.01)。结论:脊髓损伤后松质骨内降钙素基因相关肽的减弱可能与脊髓损伤后骨质疏松的发生有关。

骨形成蛋白2基因转染对犬牙髓细胞生物学特性的影响

目的构建骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic proteins 2,BMP2)绿色荧融合蛋白pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒,然后再用其在体外转染犬牙髓细胞(DDPCs)形成BMP2-DDPCs细胞,观察BMP2基因转染对牙髓细胞生物学特性的影响。方法构建pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒,采用阳离子脂质体转染法将BMP2基因转染体外培养的DDPCs,检测BMP2-DDPCs碱性磷酸酶(ALP)活性,骨钙素(OC)产量和Ⅰ型胶原合成量等指标的测定,研究BMP2基因转染对牙髓细胞生物学特性的影响。结果成功构建pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒,对构建的BMP2真核重组质粒用XhoI、HindIII进行双酶切,其产物进行琼脂糖凝胶电泳后,在1.2、4.7kb可见两条特异条带;并进行全基因序列测序,报告100%符合,证明pEGFP-N1-BMP2重组质粒构建成功。BMP2-DDPC中ALP活性,OC产量和Ⅰ型胶原合成量增加,与对照组DDPCs、N1-DDPCs相比差异有统计学意义(P<0.05),通过增强ALP、OC和Ⅰ型胶原等成骨标志物的表达,促进牙髓细胞向成牙本质细胞分化。结论 pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒转染后的牙髓细胞,具有成牙本质细胞的特征。

三种补肾方含药血清对衰老骨髓间充质干细胞中COLⅠ和ALP的影响

目的研究健骨二仙丸、金匮肾气丸和六味地黄丸含药血清对衰老骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化过程中Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,COLⅠ)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达的影响,探讨3种补肾方治疗骨质疏松症的机制。方法将40只SD大鼠分为健骨二仙丸组、金匮肾气丸组、六味地黄丸组、空白对照组,每组10只。分别灌胃75.9 g/kg健骨二仙丸、89.1 g/kg金匮肾气丸、85.8 g/kg六味地黄丸和等体积生理盐水,每天定时灌胃2次,连续7 d,制备含药血清。用H_(2)O_(2)将P3代BMSCs处理成衰老细胞,采用β-半乳糖苷酶染色进行观察。衰老BMSCs分为6组:模型组、诱导组、健骨二仙丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组、六味地黄丸含药血清组、空白血清组,于诱导第4、8、12、16天采用Real-time PCR法和Western blot法检测COLⅠmRNA及蛋白表达水平,并在第4、8天时收集细胞上清液检测ALP活性。结果衰老BMSCs被β-半乳糖苷酶染色成深蓝色,而正常细胞颜色无明显改变。在第4、8、12、16天,与模型组比较,诱导组、空白血清组COLⅠ表达水平均升高(P<0.05);与诱导组、空白血清组比较,健骨二仙丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组COLⅠ表达水平均升高(P<0.05)。在第4、12天,与诱导组相比较,六味地黄丸含药血清组COLⅠ表达水平升高(P<0.05)。在第4、8天,与模型组比较,诱导组、空白血清组ALP活性表达均明显升高(P<0.05)。与诱导组、空白血清组比较,健骨二仙丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组、六味地黄丸含药血清组ALP活性表达明显升高(P<0.05)。结论健骨二仙丸、金匮肾气丸和六味地黄丸均能增加衰老BMSCs成骨分化过程中COLⅠ的表达和ALP活性。

滋肾阴颗粒联合碳酸钙D3治疗原发性骨质疏松症的临床观察

目的:观察滋肾阴颗粒联合碳酸钙D3治疗原发性骨质疏松症的临床疗效。方法:选取原发性骨质疏松症患者68例,随机分为对照组和观察组,每组34例。对照组给予碳酸钙D3片治疗,观察组在对照组治疗基础上口服滋肾阴颗粒治疗。比较两组临床疗效及骨代谢指标的变化。结果:观察组总有效率为91.18%(31/34),高于对照组的73.53%(25/34),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)和Ⅰ型前胶原氨基末端(N端)前肽(PINP)水平均较治疗前降低,且观察组均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:滋肾阴颗粒联合碳酸钙D3治疗原发性骨质疏松症患者临床疗效显著,能够有效改善骨代谢指标。

ALPL基因突变导致成年型低磷酸酶症一家系研究

本研究分析由肝/骨/肾型碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, liver /bone /kidney, ALPL）基因突变引起的低磷酸酶症一家系患者及其家庭成员的临床特征,旨在提高对本病的认识.该家系先证者及其姐姐血清碱性磷酸酶（ALP）水平均处于正常范围下限,四肢反复发生骨折,牙齿过早脱落.先证者及其姐姐ALPL基因均为复合杂合突变,2个突变位点分别为5号外显子的错义突变c.407G〉A（p.Arg136His）和12号外显子的杂合缺失c.1318_1320delAAC（p.Asn440del）.其他家庭成员均为杂合突变,4例成员的突变位点为p.Arg136His,2例成员的突变位点为p.Asn440del,其中突变位点p.Asn440del与患者的口腔疾病相关.在该家系中,2例严重症状者均为复合杂合子,其他杂合子症状较轻,低磷酸酶症需与原发性骨质疏松症或其他骨骼矿化障碍疾病鉴别.

金刚健骨片治疗原发性骨质疏松症临床研究

目的观察金刚健骨片治疗原发性骨质疏松症(肾精亏虚证)的疗效和安全性。方法将原发性骨质疏松症患者120例随机分为金刚健骨片组(观察组)60例与骨松宝组(对照组)60例进行比较研究。观察患者治疗前后临床症状的改善、骨密度、骨代谢指标及安全性指标的变化。结果 (1)观察组临床疗效优于对照组(P<0.05);(2)两组治疗后骨密度(BMD)均有升高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);骨钙素(BGP)、I型前胶原氨基端前肽(PINP)两组均较治疗前提高(P<0.05),且观察组改善优于对照组(P<0.05);血清骨源性碱性磷酸酶(BALP)两组均较治疗前降低(P<0.05),且观察组改善优于对照组(P<0.05);(3)治疗后两组腰背疼痛、腰膝酸软、下肢疼痛、步履艰难等症均较前改善(P<0.05),且观察组改善优于对照组(P<0.01);(4)在治疗过程中,观察组无严重不良反应发生。结论金刚健骨片治疗骨质疏松症安全、有效。

接骨续筋丸影响骨折愈合过程的临床研究

目的：观察接骨续筋丸治疗骨折后骨痂质量及血清碱性磷酸酶（ALP）、血清生长激素（GH）的变化,探讨接骨续筋丸对骨痂改造塑形期的影响。方法：将68例入选病例（男41例,女27例;年龄28~64岁）按随机数字表分为治疗组35例和对照组33例。对治疗组采用接骨续筋丸治疗,对照组采用依普黄酮和钙片治疗,比较两组治疗前后骨痂X线评分、骨痂BMD、血清ALP及GH的改变及两组临床疗效的差异。结果：治疗后治疗组与对照组比较,骨痂BMD、血清ALP差异有显著性意义（P〈0.01）,骨痂X线评分、血清GH、两组总有效率比较有统计学差异（P〈0.05）。结论：接骨续筋丸对骨折后骨痂改造塑形期愈合有促进作用。