黄曲霉毒素B1转化体外原代培养的大鼠肝上皮细胞

利用基因转染技术，研究黄曲霉毒素B1在人c-myc基因和p450IA2基因转染的基础上，转化体外原代大鼠脉上皮细胞的可能性及其部分分子机理。首先构建Xm-6／c-myc真核表达载体，并将其转染Alexander细胞，免疫组化实验证明重组的c-mvc基因可在肝细胞中表达。随后分别将c-myc和人p450IA2表达载体转染无血清原代培养的新生Wistar大鼠肝细胞，结果发现p450IA2基因可代谢活化5ng／ml的AFB1，并且在外源c-myc基因辅助下，诱导大鼠肝上皮细胞获得生长优势。其中随机挑选的1例在渡过长达4个月的“危机”期后，获得永生化生长能力。从CK-18和大鼠白蛋白的表达情况和细胞超微结构特征，明确了转化细胞来源于肝上皮细胞。核型分析、免疫组化和Northern杂交分析提示，大鼠肝上皮细胞转化与其基因组稳定性改变和TGFα高表达相关。

灵芪合剂影响肝细胞生长因子/上皮间质转化因子通路抑制结直肠癌

目的:探索灵芪合剂对结直肠癌发展的作用机制,并且明确灵芪合剂是否可通过肝细胞生长因子(HGF)/上皮间质转化因子(c-Met)信号通路抑制结直肠癌发展。方法:将直肠癌大鼠分为灵芪合剂高中低剂量组,同时进行中西药对比的治疗效果,通过蛋白质印迹法(Western Blotting)检测、免疫荧光检测和凋亡的检测等技术手段的检测与分析,观察肿瘤的生长、细胞凋亡情况和HGF/c-Met通路蛋白的表达情况。结果:Western Blotting检测肿瘤组织中HGF蛋白表达增强,c-Met蛋白表达减少;在灵芪合剂治疗后,HGF的表达减少,c-Met的表达增强,这与免疫荧光表现结果一致,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:灵芪合剂通过抑制HGF的表达,上调c-Met的表达,抑制HGF/c-Met信号通路从而抑制结直肠癌细胞的侵袭和转移,实现对结直肠癌的预防和治疗。

肝动脉栓塞联合依维莫司治疗复发性肝血管周上皮样细胞肿瘤1例并文献复习

血管周上皮样细胞肿瘤(perivascular epithelioid cell tumor,PEComa)是一类间叶源性肿瘤,肿瘤细胞常在血管壁周围呈放射状排列,好发于肾脏,少数发生于肝脏。PEComa为交界性肿瘤,少数PEComa组织学表现为良性但生物学行为具有恶性潜能,恶性PEComa则更为罕见。现介绍复发性恶性肝脏PEComa病例报道1例。本研究符合伦理委员会所制定的伦理学标准,受试对象及其监护人均已知情同意。

肝上皮样血管内皮细胞瘤的影像学及病理特征(附16例)

目的:探讨肝上皮样血管内皮细胞瘤(hepatic epithelioid hemangioendothelioma, HEHE)的影像学和病理特征,以提高对HEHE诊断及鉴别能力。方法:回顾性分析经病理证实的16例HEHE患者的影像学和病理特征。结果:5例单发病灶,11例多发病灶。CT平扫病灶呈圆形及类圆形低密度,多发病灶常分布于肝右叶被膜下等特点。MR平扫病灶T2WI呈不均匀高信号影,T1WI呈不均匀低信号。CT、MR增强后均呈环形强化和渐进性向心强化特点。免疫组化表现为CD31阳性16例,CD34阳性15例,ERG阳性12例。结论:影像学对HEHE有一定的检查价值,影像表现具有一定特征性,可助于术前诊断,但术前鉴别诊断有一定困难,需要病理检查。

ADC定量对鉴别肝血管周上皮样肿瘤与肝细胞癌的价值

目的探讨通过ADC值区分肝血管周上皮样细胞肿瘤(PEComa)与肝细胞癌(HCC)的可能性。方法收集2015年1月~2022年12月经手术病理证实的17例肝PEComa临床及MRI资料,其中男6例,女11例,年龄29~69岁(中位年龄39岁)。另外匹配同期经手术病理证实的HCC病例45例,分为2组,HCC-A组19例(无乙肝病史、肝硬化、转移和/或癌栓,血清甲胎蛋白阴性),HCC-B组26例(有乙肝病史,轻度肝硬化,无转移和/或癌栓,血清甲胎蛋白阴性)。所有患者均有完整3.0 T磁共振平扫加普美显(钆塞酸二钠)增强及DWI资料,DWI扫描采用4个b值(0、50、400、800 s/mm^(2)),ADC图自动产生。回顾性分析三组病例的临床资料、磁共振平扫及增强特点、肝胆特异期对比剂的摄取及肿瘤定量ADC值。结果肝PEComa组增强模式表现为“快进快出”的比例为94.1%(16/17),与HCC-A组(84.2%,16/19)、HCC-B组(92.3%,24/26)相比差异无统计学意义(P>0.05);肝胆特异期无对比剂摄取的比率三组依次为82.4%(14/17)、73.7%(14/19)、46.2%(12/26),两两相较差异无统计学意义(P>0.05)。DWI上肿瘤最受限区域ADC定量分析,三组ADC值依次为(791.9±298.8)×10^(-3) mm^(2)/s、(576.39±154.61)×10^(-3) mm^(2)/s、(560.71±166.01)×10^(-3) mm^(2)/s,肝PEComa组与任一HCC组均存在显著性统计学差异(P<0.05),ADC值鉴别诊断肝PEComa和HCC的诊断界值为785.75×10^(-3) mm^(2)/s[(608~968)×10^(-3) mm^(2)/s],诊断敏感度76.5%和特异度为95.0%。结论磁共振成像ADC定量可单独用于鉴别肝PEComa与HCC,具有较高的诊断效能,有助于简化检查方案。

正常肝上皮样细胞的体外培养与组织块贴壁率

采用组织块培养法培养的人胚胎肝上皮细胞,于培养后第3～9天即在贴壁组织块周围长出,并可在体外较长期进行培养;传至第8代时仍能分泌甲胎蛋白(AFP),含量为15～40ng/ml。组织块培养法不失为一种较为简单、实用、经济和有效的方法,为探索胚胎细胞体外培养方法提供了可供参考、借鉴的途径、本文还认为肝上皮样新生细胞长出与组织块贴壁率密切相关,并对影响组织块贴壁率的有关因素进行了讨论。

肝上皮样血管内皮细胞瘤1例报告

1病例资料患者女性,50岁,因＂间断上腹部不适8年,加重伴肝区疼痛1周＂于2013年12月24日入本院。患者8年前无明显诱因出现上腹部不适,于本院二部行胃镜检查,诊断为＂浅表性胃炎＂,间断口服多种中药治疗,上述症状有所好转,但病情间断反复,1周前患者上腹部不适症状加重,并伴肝区疼痛,且近期体质量明显下降,就诊于本院二部,肝脏彩超及CT三期增强均提示肝内多发占位性病变,为求进一步明确诊断入本科。既往史：

肝脏上皮样血管内皮细胞瘤1例

肝脏上皮样血管内皮细胞瘤(epithelioid haemangioendothelioma,EHE)是一种罕见的生物学行为恶性的血管源性肿瘤,易漏诊或者误诊,主要依靠组织形态学和免疫组织化学确诊.以手术切除为主要治疗方法.我们报道1例肝EHE并结合相关文献进行分析.

低氧/低氧诱导因子-1α通过TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞上皮间质转化

目的:探讨低氧/低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人肝内胆管上皮细胞(HIBEC)上皮-间质转化(EMT)的诱导作用及其分子机制。方法:HIBEC在1%氧浓度的低氧环境中培养,分析细胞迁移、侵袭能力的变化,以及EMT相关标志E-钙黏蛋白和S100A4的表达水平。以HIF-1α的siRNA和转化生长因子-β1(TGF-β1)抑制剂LY364947分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1,再重复上述实验。结果:与常氧培养相比较,低氧条件下,HIBEC的细胞迁移和侵袭能力明显增强,上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达明显下降,间质细胞标志物S100A4表达明显升高(P<0.05)。以HIF-1α的siRNA和TGF-β1分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1后,上述低氧引起的HIBEC生物学变化均受到明显抑制(P<0.05)。结论:低氧可以通过活化HIF-1α诱导HIBEC发生EMT,这种诱导作用主要是通过TGF-β1完成的。

小柴胡汤预处理对肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝内胆管上皮细胞凋亡的影响

目的:观察小柴胡汤对肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝内胆管上皮细胞凋亡以及胆汁中Glu、GGT、AKP水平改变的影响。方法:将大鼠36只随机分为缺血再灌注(IR)组、假手术(SO)组,小柴胡汤预处理(XP)组,肝脏缺血时间为30min,于再灌注120min末引流胆汁,取肝脏标本,观察各组大鼠胆汁中Glu、GGT、AKP水平变化,并通过原位末端标记法检测肝内胆管上皮细胞凋亡情况。结果:IR组胆汁中Glu、GGT、AKP含量均明显高于SO组(P<0.01);XP组则显著低于IR组(P<0.01)。IR组胆管上皮细胞凋亡指数(AI)明显高于SO组,差异具有高度显著性(P<0.01),凋亡细胞主要见于肝内大胆管,SO组凋亡的胆管上皮细胞罕见;XP组胆管上皮细胞凋亡指数(AI)明显低于IR组,差异具有显著性(P<0.01)。结论:肝脏缺血再灌注损伤能促进肝内胆管上皮细胞凋亡的发生,小柴胡汤预处理可减轻肝内胆管上皮细胞损伤。

淤胆大鼠肝内胆管上皮细胞原纤毛形态观察

目的:探讨在大鼠肝外淤胆模型中大胆管和小胆管原纤毛形态的变化。方法:将15只Wistar大鼠随机平分为未处理组(ratsctr)、胆管结扎7d组(ratsL7)和胆管结扎10d组(ratsL10)。用胆总管结扎法制备大鼠肝外淤胆模型。利用扫描电镜技术,比较肝内大、小胆管上皮细胞原纤毛在长度和数量上的异同。结果:ratsctr组大胆管上皮细胞原纤毛平均长度为(7.76±1.14)μm,数量为每视野(10000×)(12±3)根。胆汁淤积后,大胆管上皮细胞原纤毛长度变短:ratsL7为(2.92±1.39)μm,P<0.05;ratsL10缩短为(2.34±0.37)μm,P<0.05,数量增多:ratsL7为(87±12)根,P<0.05;ratsL10为(197±46)根,P<0.05。正常大鼠小胆管上皮细胞原纤毛的平均长度为(5.15±0.89)μm,数量为每视野(4±1)根。胆汁淤积后,小胆管上皮细胞原纤毛长度变短:ratsL7为(2.52±0.96)μm,P<0.05;ratsL10为(2.31±0.53)μm,P<0.05,数量增多:ratsL7为(16±2)根,P<0.05;ratsL10为(15±3)根,P<0.05。结论:结扎胆总管导致肝脏淤胆时,胆管上皮细胞原纤毛数量增多,长度变短。

肝上皮样血管内皮细胞瘤超声造影表现

病例1,患者女性,75岁,因反复腹痛及腹胀十余年并加重10 d于2016年5月23日收治本院。患者腹痛以中上腹明显,伴恶心,无呕吐,无畏寒发热。查体,中上腹压痛,无反跳痛。实验室检查示,血常规、尿粪常规、肝功能和肿瘤标志物无殊。2016年5月12日全腹增强CT检查示(图1),肝Ⅳ段见一低密度结节影,边界清,增强可见强化,直径约20 mm,肝Ⅳ段结节,恶性肿瘤?

小鼠肝内胆管上皮细胞的分离与鉴定

为建立一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞(MIBECs)分离培养方法,用Ⅳ型胶原酶进行门静脉灌注,取出肝内胆管,用DNaseⅠ、pronase E和Ⅳ型胶原酶分类消化,小鼠肝内胆管组织细小、均匀的细胞团培养于含100mL/L胎牛血清(FBS)和10ng/mL表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素转铁蛋白硒(ITS)的DMEM/F12培养基中。细胞贴壁后,利用细胞角蛋白19免疫荧光法鉴定目的细胞。在培养的过程中,用CCK8测定细胞的生长曲线。结果显示,成功分离出MIBECs,细胞纯度约95%。细胞培养3d^7d内呈对数生长状态。以上结果表明本分离培养方法是一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞分离纯化培养技术。

脂多糖对正常人肝内胆管上皮细胞TLR4-NF-кB通路的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对正常人肝内胆管上皮细胞(Hi BECs)中TLR4-NF-кB通路的影响。方法 Hi BECs常规细胞培养后,加入不同浓度的LPS(0.1、1、4、8、10μg/m L),刺激不同时间(3、6、9、12、24 h),用Realtime RT-PCR分析细胞内TLR4和NF-κB mRNA表达水平。结果 LPS刺激Hi BECs后TLR4和NF-κB mRNA表达水平均增加,Hi BECs在受到LPS(4μg/m L)刺激后TLR4和NF-κB mRNA表达水平随时间延长而增加,于6小时达高峰,之后下降。以相同时间(6 h)刺激Hi BECs后,TLR4和NF-κB mRNA表达水平随LPS浓度增高而增加,LPS浓度为4μg/m L时达高峰,之后下降。结论 LPS可以激活Hi BECs中的TLR4-NF-кB通路,并且有时效和量效依赖关系。

上皮-间充质转化对肝纤维化作用的研究进展

上皮-间充质转化在许多生理和病理过程中都具有重要作用,近年研究证明,肝纤维化过程中同样存在上皮-间充质转化现象。本文综合国内外研究成果,阐述发生上皮-间充质转化的肝源细胞(肝细胞、胆管上皮细胞、肝祖细胞、肝星状细胞)以及肝纤维化发生发展过程中上皮-间充质转化涉及的信号通路及调节机制,并探讨了以上皮-间充质转化为靶标的抗肝纤维治疗策略的可行性及研究进展。

肝脏上皮样血管内皮细胞瘤三例影像学特征

目的探讨肝脏上皮样血管内皮细胞瘤(hepatic epithelioid hemangioendothelioma,HEHE)影像学特征。方法回顾性分析聊城市妇幼保健院3例HEHE的影像特征,并结合文献,分析其影像特征的病理学基础。结果弥漫型2例,结节型1例。HEHE多分布于肝包膜下,DWI序列8个病灶中央信号降低呈“黑色靶征”,2个病灶表现为“包膜回缩”。MRI动态增强扫描A型23个病灶,6个直径≤0.2 cm,门静脉和静脉期均强化;C型5个病灶,3个病灶直径≥2.5 cm,周边延迟强化,中央纤维硬化基质对比剂浓聚,1例患者3个病灶肝/门静脉截断于瘤体周边见“棒棒糖征”。结论HEHE以包膜下分布为主,具有“黑色靶征”“包膜回缩”及“棒棒糖征”等特征性影像表现,MRI动态增强扫描分型后,病灶的不同对比剂强化方式对进一步诊断及鉴别诊断具有较高价值,小病灶以A型多见,大病灶以C型为主。

淋巴上皮样肝细胞肝癌一例报告附文献复习

病例:患者为男性,62岁,发现"乙型肝炎(乙肝)表面抗原、乙肝e抗体、乙肝核心抗体3项阳性"35年,未予治疗。约5年前,患者因肝区不适至外院就诊,被诊断为乙肝后肝硬化,后持续服用抗病毒药物治疗。患者于外院检查发现血甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)升高达8922 ng/L,遂至我院行上腹部MRI检查,结果提示,(1)肝左叶占位(4.0 cm×2.4 cm),考虑肝癌可能性大;(2)肝硬化、脾肿大、门脉高压伴侧支形成。

单克隆来源的小鼠胎肝HPP-CFC肝上皮分化潜能的研究

为研究胎肝中造血和肝上皮发育的关系,建立了小鼠胎肝高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)培养体系,并进行了单克隆培养以及诱导分化实验.在造血和肝诱导因子的共同作用下,对单克隆来源的HPP集落细胞向造血和肝上皮细胞进行诱导分化,采用透射电镜(TEM)、巢式RT-PCR、细胞免疫荧光检测,从细胞形态、超微结构、上皮细胞分化标志等方面对分化后的细胞进行检测.检测结果显示,诱导后的部分细胞具有肝细胞特异性的超微结构,并不同程度地表达白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白(CK8,CK18)等肝上皮分化标志,同时还表达间质标志α-SMA和血管内皮细胞标志Flk-1.免疫磁珠分选表明:胎肝来源的HPP-CFC主要来自于CD45+细胞,CD45-细胞不具有形成造血细胞克隆的能力.在肝上皮细胞分化潜能上,流式分选获得的CD49f+/Sca-1+细胞与未分选细胞无明显差异.该模型的克隆源性通过细胞混合实验进行证明.研究结果表明,改进的胎肝来源的HPP-CFC可能代表了一个新的造血细胞向肝上皮细胞分化的单克隆模型,为研究胎肝中造血和非造血细胞的发育关系提供了一个新的切入点.

柴胡皂苷d对人肝细胞损伤的保护作用研究及抗肝纤维化机制探讨

目的观察柴胡皂苷d(SSd)对人肝细胞损伤的保护作用及抗肝纤维化机制,探讨L02细胞氧化应激损伤与细胞焦亡、上皮-间质转化(EMT)的关系,为SSd在治疗肝纤维化疾病的应用提供临床依据。方法体外培养人正常肝细胞L02,采用H_(2)O_(2)诱导L02细胞损伤模型,干预组加入中药单体SSd(低、中、高剂量组)孵育24 h后再经过H_(2)O_(2)处理细胞,CCK8法观察SSd干预的损伤L02细胞后的活力、丙二醛(MDA)水平、上清液谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测,Western Blot法、RT-PCR法检测细胞焦亡相关指标半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)及上皮间质转化(EMT)相关指标转化生长因子(TGF-β1)、钙黏附蛋白(Ecadherin)、波形蛋白(Vimentin)、肌劲蛋白(α-SMA)的表达。结果SSd能抑制L02细胞损伤引起的细胞活力下降,在有效剂量内无明显肝毒性(ALT、AST未见明显升高);与对照组比较,氧化应激损伤的L02细胞焦亡相关指标Caspase-1、IL-1β、IL-18表达明显升高(P<0.05,P<0.01),EMT相关指标TGF-β1、Vimentin、α-SMA的表达升高,Ecadherin表达下调(P<0.05,P<0.01);SSd干预后,Caspase-1、IL-1β、IL-18、TGF-β1、Vimentin、α-SMA的表达明显下调,Ecadherin表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论氧化应激损伤的L02细胞活力下降可能与细胞焦亡相关,SSd有抑制损伤的L02细胞焦亡、控制EMT过程,发挥抗肝纤维化的作用。