移植供肝保存技术的研究进展

器官保存的目的旨在减少组织损伤，并维持器官的正常功能，使器官再灌注后尽快恢复正常的生理功能。目前随着供肝的需求的不断增加，为了提高供肝的利用率和移植成功率，以及延长供肝的保存时间，研制新的供肝保存液和开发新的供肝保存技术变得越来越迫切。

缺血亚热碘肝保存中单次和双次灌注的对比研究

在机器保存期间除门静脉灌注之外的动脉灌注是否改善了肝移植物质量,仍然存在争议,目前缺乏使用这两种技术的比较研究。本文研究了在循环死亡大鼠肝脏后使用单次或双次机器灌注对肝移植物质量的影响。此外,我们分析了脉动与连续动脉血流的影响。方法:循环死亡大鼠的肝脏(n=18)冷藏保存6 h,然后进行1 h的常温机器灌注〔20℃,40/5 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)〕和2 h的体外温热再灌注(37℃,80/11 mmHg,9%全血)。机器保存可通过门静脉灌注(single portal vein perfusion,SP)、双脉冲(dual pulsatile,DPP)或门静脉和肝动脉的双连续灌注(dual continuous perfusion,DCP)进行。在2 h的温热再灌注期间评估流体动力学、肝功能测试、组织病理学和内皮特异性基因的表达。

肝移植供肝保存新途径:机械灌注

肝移植是治疗终末期肝病最有效的方法,但由于供肝短缺形势严峻,进一步发展并完善新的离体肝脏保存技术成为必然。机械灌注(MP)是一种新型的供肝保存方法,与传统的静态冷保存相比,能更好地保存离体肝脏,甚至可以挽救非标准供肝,从而进一步扩大供肝池。根据温度不同,MP可以分为低温、亚低温以及常温3种类型。目前针对肝移植的MP尚处于临床试验阶段,其主要技术参数仍需要进一步探索验证。总之,MP为解决供肝短缺提供了新思路,为了获得临床应用仍需要进一步研究,使其简化并合理优化灌注参数。

复方丹参对人离体肝组织低温保存的保护作用

目的探讨复方丹参对人离体肝组织低温保存下的保护作用。方法采集2001～2005年20例行肝叶切除或肝段切除手术病人的正常肝组织,采用同体对照,分别放入复方丹参液(实验组)及平衡盐液(对照组)中,保存1,3,6h,分别进行常规病理检查,比较相同保存时间实验组和对照组标本的病理改变程度,同时将实验组和对照组各自不同保存时间段标本的病理改变程度进行组内比较。结果实验组不同时间段比较,其中保存1h组与保存3h组标本的病理改变无显著差异,保存6h组与保存3h组及保存1h组标本比较,病理改变有显著性;对照组不同时间段比较,随时间延长,病理改变有显著性;对照组与实验组同时间段比较,病理改变有显著性,且在相同保存时间段内,实验组的病理改变较对照组轻。结论复方丹参对低温保存下的人离体肝组织有保护作用,能延长人离体肝组织保存时间。

供肝切取与保存技术中几个关键环节的探讨

目的 探讨提高和完善供肝切取与保存技术，提高器官利用率，减少肝移植术后近、远期并发症的发生。方法 1995年5月至2005年6月我院实施了122例原位肝移植，采用腹腔器官联合快速切取技术进行了165例供肝和供肾联合切取，先行经肠系膜上静脉至门静脉插管，随即行腹主动脉插管，UW液原位灌洗。灌洗开始后优先处理胆道，用UW液经胆总管冲洗胆道。整块切取肝脏、双侧肾脏。回手术室进一步修剪，对变异的肝动脉（25例，20．5％）整形使之变为单支。结果 165例供肝热缺血时间120～310s，冷缺血时间260～840min。移植肝通血20～30min后均有金黄色胆汁分泌。术后均未发生原发性无功能和器官功能延迟。结论 对于脑死亡的供者器官切取采取原位灌洗，整块切取及体外修整，可最大限度地缩短热缺血时间，有效避免变异血管损伤，进而提高供者器官的利用率。确切的胆道冲洗对避免肝内外胆管自溶和术后胆道狭窄非常重要。良好的供肝切取与保存是移植成功的保证，可有效地减少手术并发症，进而取得良好的疗效。

抑制枯否细胞可以减轻鼠肝在冷保存中的脂质过氧化损伤

目的:研究抑制枯否细胞对冷保存的鼠肝枯否细胞和肝细胞线粒体的影响。方法:实验组连续2 d静注氯化钆,7 mg/kg,对照组静注等量生理盐水。3 d后手术取肝,保存时间分别为1,2,3和4 h。观察各组枯否细胞和肝细胞线粒体的形态变化,测定肝组织和肝细胞线粒体脂质过氧化物(LPO)的含量。结果:对照组枯否细胞表现为细胞膜突起增多,细胞内颗粒物质增多等。肝细胞线粒体普遍肿胀,内膜嵴断裂,空泡形成以及破坏等。实验组肝组织和肝细胞线粒体脂质过氧化程度在冷保存1 h和2 h显著低于对照组(P<0.05)。结论:抑制枯否细胞对鼠肝的冷保存损伤有一定的保护作用。

“陆止于此，海始于斯”：机械灌注将成为供肝保存修复新常态

2018年5月,国际肝移植协会年会在葡萄牙首都里斯本举行,来自世界各地的专家汇聚一堂,分享了肝移植领域的经验及进展。机械灌注相关内容格外受人瞩目,连续3年入选"Rising Star"部分,且相关主题大会论文投稿数量逐年增加。本文汇总此次年会机械灌注内容,从机械灌注保存修复边缘供肝、供肝质量评估、体外干预治疗及基础研究四个方面详细介绍其进展及应用。

汉防己甲素对低温灌洗保存大鼠供肝的肝功能影响的实验研究

目的:观察汉防己甲素(TET)在低温灌洗保存供肝时对肝细胞的钙超载及肝功能的影响。方法:低温灌洗保存大鼠肝脏4 h,按保存液的不同分为4组:A组(对照组):乳酸林格液灌洗保存;B组(TET注射组):腹腔内注射TET,乳酸林格液灌洗保存;C组(TET灌洗组):腹腔内注射TET,乳酸林格液中加入TET灌洗保存;D组(Collins组):Collins液灌洗保存,测定供肝低温灌洗保存后肝细胞内钙浓度和肝功能,并在光镜和电镜下观察肝脏的结构。结果:细胞内钙浓度和肝功能测定,各实验组与对照组、C组与B组比较,差异有统计学意义(P<0.05);组织学观察支持以上结果。结论:TET能显著减轻低温灌洗保存下肝细胞的钙超载并起到保护肝功能作用;TET溶液直接灌洗保存供肝比TET腹腔注射效果好;用TET溶液灌洗并保存供肝4 h与Collins液灌洗保存组效果相近;TET对供肝的灌洗保存有积极的作用,因此推断该药有望用于临床供肝的保存。

携氧技术在肝移植供肝保存中的应用

供肝短缺问题是制约肝移植发展的主要因素,供肝保存技术是保证并进一步扩展供肝来源的关键。供肝保存过程中携氧技术的应用有望进一步提高心脏死亡器官捐献(DCD)和扩大标准器官捐献(ECD)供肝质量。本文综述了携氧载体、携氧方式及相关应用机制等方面最新进展。医用携氧载体主要包括血红蛋白类物质及全氟化碳类物质(PFC)。携氧方式包括吹入法、鼓泡式氧合及膜式氧合3种。携氧技术提高供肝质量的机制主要是抑制过多氧自由基产生、减少缺血再灌注损伤。随着DCD及ECD供肝越来越多进入临床,携氧技术必将得到越来越广泛的应用,且PFC为缓解血制品供不应求提供了新的解决途径。

胎肝移植的供肝采集、修剪和保存

通过5例胎龄为7月的胚胎所进行的实验,用电镜和酶组织化学观察,结果证明我们设计的一套胎肝灌注、切取、修剪、保存方法是可行的。用4℃平衡液加改良SacksⅡ液经脐静脉和髂总动脉插管进行原位冷灌注多脏器联合切取后,在0～4℃条件下修剪保存胎肝的方法可保存胎肝活力9小时。

用于生物型人工肝的肝细胞来源及保存

生物型人工肝支持系统(bioartificial liver support system,BALSS)是近20年来细胞生物学和生物医学工程进展的体现,它为肝衰竭的治疗开辟了新途径.其基本原理是将外源性肝细胞培养于生物反应器中,使肝衰竭患者的血液(血浆)循环流经生物反应器,通过半透膜与培养的肝细胞进行物质交换,从而达到暂时的肝功能支持作用.肝细胞可发挥较完全的肝脏功能:参与糖、蛋白质、脂肪三大物质代谢;清除毒素和中间代谢产物;具有生物合成、转化功能;分泌具有促肝细胞生长的活性物质等.目前其研究点主要集中在:①研制新型生物反应器;②获得大量的高质量、生物安全的肝细胞;③建立大量肝细胞的保存方法.国内外在肝细胞的来源和保存方面已进行了不少研究,并取得了较大进展.

大鼠肝细胞的玻璃化保存

玻璃化方法保存生物材料是近年来低温生物医学领域较为热门的话题,应用这种方法可以使生物材料在保存过程中免于冰晶效应和溶液效应的损伤,提高存活率。目前认为用玻璃化方法保存生物材料是最理想的深低温保存方法。本实验选用大鼠肝细胞作为样品,进行玻璃化保存的尝试,旨在验证玻璃化保存肝细胞的可行性,并提供一种肝细胞的保存方法。

肝脏常温机械灌注修复及评估系统的研制

介绍了一种肝脏常温机械灌注修复及评估系统。系统由肝脏常温氧合机械灌注装置、荧光成像系统及组织测氧仪组成。常温氧合机械灌注装置可对供肝进行持续灌注并实时监测调控灌注参数,荧光成像系统通过识别肝脏代谢的吲哚菁绿来评估供肝微循环情况及肝细胞代谢功能,组织测氧仪可实时监测肝组织氧分压变化评估细胞耗氧状态。

2020年ATC肝移植研究前沿盘点

美国移植年会(ATC)是器官移植领域极具影响力的学术盛会。本文概述了2020年ATC肝移植领域的热点内容,包括供肝获取和质量评估、供肝保存和缺血-再灌注损伤(IRI)、肝细胞癌及其他肝脏恶性肿瘤肝移植、肝移植术后并发症、肝移植免疫学、围手术期管理和供者来源性感染、儿童肝移植、细胞治疗等多个方向的最新研究进展。

低温双通道氧合机械灌注在离体劈离式肝移植中的应用

随着劈离式肝移植的飞速开展,其技术日趋成熟。离体劈离时,由于细胞内能量来源[如三磷酸腺苷(ATP)]的耗竭以及其他代谢紊乱,导致细胞损伤和功能障碍,这种损伤会因肝移植再灌注损伤而加重,临床上表现为移植术后并发症和移植失败。为了进一步改善离体劈离式肝移植的供肝质量,国内外研究团队使用机械灌注来改善供肝质量。本文结合了国际上离体劈离式肝移植供肝机械灌注的研究进展,阐述了低温双通道氧合机械灌注(D-HOPE)在离体劈离式肝移植中的应用和未来发展方向,旨在为增加离体劈离式肝移植的供肝来源,进一步改善供肝短缺的现状提供参考。