Melatonin对大鼠肝再灌注损伤的保护作用

目的:探讨褪黑素对大鼠肝再灌注损伤的影响作用及其机制方法:150只健康♂Wistar大鼠(质量190-210 g,6-7周龄),随机分为褪黑素处理组(Mel)、酒精溶媒对照组(Alc)和生理盐水对照组(NS).建立肝缺血再灌注损伤模型,缺血均为60 min,之后每组分别按再灌注后30 min、1、6、12、24 h采集标本.M组(20 mg/kg)于缺血前30 min腹腔注射melatonin;A组采取与Mel组相同浓度的酒精液,N 组则注射同比例的生理盐水.测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),肝组织中超氧化物岐化酶(SOD)及肝组织过氧化的终产物-丙二醛(MDA),对肝组织进行HE染色及ICAM- 1免疫组化染色. 结果:Mel组在再灌注后各时点的ALT均显著低于Alc及NS 对照组(aP<0.05),且Alc组与NS组相比无显著性差异. Mel组在再灌注后6、12、24 h时点的MDA显著低于Alc 及NS对照组(aP<0.05),且各时点内Alc组与NS组相比无显著性差异.Mel组在再灌注后12、24 h时点的SOD显著高于Alc及NS对照组(cP<0.05),且各时点内Alc组与NS组相比无显著性差异.Mel组在再灌注后各时点ICAM- 1染色的阳性细胞率均显著低于Alc组和NS组(aP<0.05), 且每时点内的Alc组与NS组相比无显著性差异. 结论:外源性Mel可以抑制再灌注后血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),增加肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、的活性,减少肝组织MDA的浓度,抑制肝组织ICAM-1蛋白的表达, 对缺血再灌注肝损伤有明确的保护作用.

内源性Leptin对大鼠肝再灌注损伤的保护作用

目的探讨缺血预处理（IP）对大鼠肝再灌注后血清Leptin及肝细胞Leptin受体（Leptin-R）变化的影响,从而阐明IP保护作用可能存在的机制。方法 120只健康雄性Wistar大鼠（质量190~210 g,6~7周龄）,随机分为缺血预处理组（IP）、再灌注组（IR）和假手术组（SO）。前两组分别建立左半肝缺血再灌注损伤模型,缺血时间均为60 min,IP组于半肝阻断前缺血5 min,再灌注5 min;SO组只进行麻醉下的开腹、关腹,不阻断肝门,余处理同前两组;3组腹腔暴露时间相同。之后每组分别按肝缺血再灌注后0.5、1、3、6 h采集标本。酶联免疫吸附实验竞争法集中测定血清Leptin的浓度;酶联免疫吸附法（Elisa）测定血清中TNF-α的水平;比色法测定肝细胞线粒体中丙二醛（MDA）的浓度;并通过免疫组织化学的方法对肝细胞Leptin-R进行染色及浓度测定。结果 IP组在再灌注后的各时点Leptin的浓度均显著高于IR组及SO组（P〈0.05）;IR组与SO组相比再灌注后0.5 h呈显著性的降低（P〈0.05）;之后的各时点Leptin的浓度均呈显著性的升高（P〈0.05）。IP及IR组再灌注后的各时点血清中TNF-α浓度缓慢增加,IP组在再灌注后各时点的血清TNF-α及线粒体MDA浓度显著低于IR组（P〈0.05）,同时显著的高于SO组（P〈0.05）。IP组及IR组在再灌注后各时点的Leptin-R阳性细胞率显著高于SO组（P〈0.05）;同时IP组与IR组相比再灌注后3、6 h的时点Leptin-R阳性细胞率均显著性增高（P〈0.05）。结论 IR可以增加血清中Leptin的浓度及Leptin-R在肝细胞内的蛋白表达,IP可以使这种作用加大及提前,此种变化可能是IP保护作用的机制之一。

Hepatology International|肠道菌群通过干扰小鼠海马脂质代谢调节肝缺血再灌注损伤相关认知功能障碍的昼夜节律性差异

肝缺血再灌注损伤(HIRI)是肝脏手术的常见并发症,可导致认知功能障碍等肝外代谢紊乱。既往研究表明肝脏活动(如消化和吸收、合成和摄取、同化和解毒等)表现出显著的昼夜节律振荡,而HIRI也存在昼夜节律性差异。最近研究表明,肠道菌群代谢产物在肝损伤发生发展中发挥了关键作用;同时,肠道菌群在认知功能障碍及昼夜节律领域中所发挥的作用也越来越受重视。基于此,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室项红兵教授课题组深入探索了肠道菌群及昼夜节律在HIRI模型小鼠认知功能改变中所发挥的作用。

罗格列酮通过诱导HO-1减轻大鼠肝缺血再灌注损伤的作用机制

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR-γ)激动剂罗格列酮是否通过调控血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)活性来减轻大鼠肝缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)。方法建立大鼠70%肝脏热缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)模型和缺氧缺糖/复氧复糖(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)诱导的大鼠肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)损伤模型,随机分为假手术组、模型组、罗格列酮预处理组和锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZnPP)组(n=6)。全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT、AST水平;HE染色评估肝组织病理学损伤;Western blot检测PPAR-γ和HO-1蛋白表达水平;CCK8法测定LSECs的细胞活力,流式细胞仪测定LSECs中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量。结果与I/R组相比,罗格列酮预处理能显著降低肝IRI大鼠ALT、AST水平(P<0.01),减少肝细胞凋亡并减轻肝组织IRI(P<0.01)。Western blot结果显示,罗格列酮能上调PPAR-γ和HO-1蛋白的表达(P<0.01)。此外,罗格列酮预处理(10,30μmol/L)能改善OGD/R诱导的LSECs存活率,显著降低细胞ROS含量,并呈剂量反应相关性(P<0.01)。使用ZnPP阻断HO-1活性后,罗格列酮对大鼠肝IRI的保护作用均消失。结论罗格列酮通过上调HO-1活性介导抗氧化和抗炎作用,减轻大鼠肝IRI。

清胰汤对肝缺血再灌注损伤小鼠的肝脏保护作用及铁死亡机制研究

目的 观察清胰汤对肝缺血再灌注损伤小鼠肝脏的保护作用并探讨其机制。方法 30只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分为5组:假手术组、模型组及清胰汤低、中、高剂量组,每组6只。各清胰汤组小鼠于造模前7 d连续灌胃相应剂量药物,假手术组及模型组小鼠灌胃生理盐水。以夹闭小鼠肝左叶及肝中叶动静脉血流的方法构建70%肝脏缺血再灌注损伤模型,缺血60 min,再灌注12 h。以ELISA法检测血清肝酶指标;HE染色观察肝组织缺血情况;DHE荧光探针观察肝细胞活性氧(ROS)水平;酶标仪检测肝组织亚铁离子含量及脂质过氧化水平(MDA);Western blotting法及免疫组化染色检测肝组织GPX4表达情况。结果 清胰汤中、高剂量均可以明显改善小鼠肝缺血再灌注损伤,有效降低小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平(P<0.05),减少肝组织缺血坏死情况,降低肝细胞ROS水平,并且能够有效降低肝组织亚铁离子含量及脂质过氧化水平(P<0.05),恢复GPX4活性(P<0.05)。结论 清胰汤中、高剂量均可减轻模型小鼠的肝脏氧化应激,减少肝缺血坏死,改善肝功能,对于肝缺血再灌注损伤的肝脏具有保护作用,其潜在机制可能与干预肝铁死亡的发生有关,且其作用呈剂量依赖性。

人骨髓间充质干细胞及其外泌体在肝移植术后肝缺血再灌注损伤中潜在治疗作用的研究进展

肝缺血再灌注损伤(HIRI)是传统肝移植术中不可避免的病理生理过程,其严重程度受到来自供体和受体的多方面因素影响,最严重者可导致术后早期移植肝无功能。人骨髓间充质干细胞(BMSCs)及其外泌体已在临床试验中被证实具有促进组织修复与免疫调节的能力,这一治疗作用在HIRI的防治中具有较好的应用前景。该文旨在综述BMSCs及其外泌体在移植肝HIRI防治中潜在作用机制的研究进展及未来研究方向。

围术期肝缺血再灌注损伤发生机制及保护措施的研究进展

肝缺血再灌注损伤(HIRI)是肝外科手术中常见的间接损伤,可造成进行性肝内血栓形成/肝淤血、肝细胞凋亡、坏死等,是导致患者术后肝功能障碍和肝衰竭的重要因素,严重影响患者围术期的转归和预后。多年来,HIRI的发生发展机制及防治策略研究一直受到广大学者的关注。围术期麻醉药物处理、缺血预处理及低温充氧灌注技术等措施对减轻HIRI具有重要作用。本文结合近年来国内外相关文献,就围术期HIRI相关的发生机制及其相关保护措施的研究进展作一综述,以期为临床提供参考。

依达拉奉对肝缺血再灌注损伤作用影响的Meta分析

系统评价依达拉奉在肝缺血再灌注损伤中保护肝的效果。 方法 计算机检索PubMed、Cochrane Library、中国知网数据库(CNKI)、维普全文期刊数据库和万方数据库,研究类型关于依达拉奉在肝缺血再灌注损伤的随机对照试验或队列研究。检索时间为建库至2023年8月20日。文献质量评价:由2名研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,采用RevMan 5.4.1软件进行Meta分析。结果 共纳入7项随机对照实验研究,共 164只大鼠,Meta 分析结果显示,经依达拉奉治疗的肝缺血再灌注损伤大鼠与未经治疗的肝缺血再灌注损伤大鼠相比,手术后谷丙转氨酶(ALT)的水平更低 ( X2 = 505.45, P = 0.00001,I2 = 99% ),肿瘤坏死因子(TNF-α)水平也较低 ( X2 = 77.66, P = 0.003,I2 = 94% ),超氧化物歧化酶(SOD)的水平更高( X2 = 1187.57, P = 0.003,I2 = 100% ),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 依达拉奉对肝缺血再灌注导致的肝损伤程度有一定的减缓作用,具体表现在依达拉奉能明显的减缓肝缺血再灌注损伤中ALT、TNF-α损伤标志物的水平降低和升高抗氧化酶SOD的水平。

干细胞外泌体减轻肝缺血再灌注损伤的研究进展

肝缺血再灌注损伤(HIRI)是肝脏在血流供应减少或者血流被阻断一定时间后恢复血供时引起的损伤,也是肝移植术和肝脏肿瘤切除术后常见的并发症,该过程会显著增加移植免疫排斥与感染导致的肝功能损伤的风险,因此,如何缓解HIRI亟待解决。外泌体(exosomes,Exo)是许多细胞都可以分泌的一种微小囊泡,具有诸多特性,可以作为细胞间进行沟通的一种媒介。间充质、骨髓干细胞来源的外泌体因具有抗炎和抗凋亡等作用,使得器官缺血再灌注损伤的缓解和修复成为了可能,因此具有一定潜在的临床应用价值。

脂肪间充质干细胞对小型猪肝缺血再灌注合并肝切除组织细胞焦亡的影响

本研究旨在探究脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)对小型猪肝缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)合并肝切除组织细胞焦亡的影响。将18头巴马小型猪随机平分成3组,每组6头,分别为假手术组(sham组)、模型组(IRI组)、异体移植ADSCs干预组(ADSCs组,剂量为1×10^(6)cells·kg^(-1)),通过腹腔镜微创技术建立肝IRI合并肝切除损伤模型,于术后即刻分别向IRI组和ADSCs组小型猪肝实质注射生理盐水和ADSCs。于术后1、3和7 d采集血液和肝组织样本。应用ELISA法对血清中促炎因子白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量进行测定,应用RT-qPCR技术和Western blot技术对细胞焦亡相关基因与蛋白进行检测。结果显示,术后1、3 d时,相比于sham组,IRI组血清中促炎因子IL-18、IL-1β含量显著增加(P<0.01),肝组织中IL-18、IL-1β基因与蛋白表达量同样显著升高(P<0.01);肝组织中细胞焦亡相关因子NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、Caspase-1、GSDMD和核因子κBp65(nuclear factor kappa-Bp65,NF-κBp65)基因与蛋白水平均显著升高(P<0.05)。经ADSCs干预后,血清和肝组织中IL-18、IL-1β表达量显著降低(P<0.05),肝组织中细胞焦亡相关因子NLRP3、ASC、GSDMD和NF-κBp65基因与蛋白水平均显著降低(P<0.05)。综上,本研究证明,小型猪腹腔镜肝IRI合并肝切除损伤会诱导细胞焦亡的发生,而ADSCs能够降低及改善这种肝损伤引起的组织细胞焦亡损伤。

低温诱导的RBM3对各器官缺血再灌注损伤研究进展

缺血再灌注损伤(IRI)是一种复杂的血流动力学紊乱状态,致死率极高,且目前的治疗方法相对有限。亚低温治疗是临床上公认的一种缓解缺血、缺氧损伤的治疗方式,尤其在脑保护中的研究较多。多项研究表明,RNA结合基序蛋白3(RBM3)作为一种冷应激蛋白,主要在低温诱导下产生,可促进翻译,减轻氧化应激、降低细胞凋亡率。因此,诱导RBM3可能代表一种治疗IRI的新策略,代替亚低温治疗,减轻低温对机体的不良影响。基于这一观点,文章对RBM3蛋白功能的最新发现进行综述,重点关注RBM3对各器官IRI相关疾病的保护作用以及未来前景,为相关研究提供新思路。

山奈黄酮醇抑制HK2/LDHA依赖的糖酵解通路减轻大鼠肝缺血-再灌注损伤

目的 探讨山奈黄酮醇(KM)对大鼠肝缺血-再灌注损伤(HIRI)的影响和与己糖激酶2(HK2)依赖的糖代谢重编程的关系。方法 采用随机数表法将60只SPF级雄性SD大鼠分为五组:假手术组(Sham组)、肝缺血-再灌注损伤组(HIRI组)、HIRI+山奈黄酮醇预处理组(KM组)、HIRI+山奈黄酮醇+己糖激酶激活剂Hexokinase预处理组(KM+Hex组)和HIRI+Hexokinase预处理组(Hex组)。通过选择性肝门阻断法制备大鼠HIRI模型,KM组、KM+Hex和Hex组于HIRI建模前3 d每日分别腹腔注射KM 50 mg/kg、Hexokinase 20 mg/kg。HIRI模型建立6 h后麻醉处死大鼠,并采集肝脏和下腔静脉血液样本,ELISA法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、白细胞介素-6(IL-6)和肝组织核因子p65亚基(p65)活性,化学比色法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和丙酮酸含量,蛋白质凝胶电泳实验检测HK2、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α(p-AMPKα)蛋白表达量,HE染色观察肝脏组织病理改变,免疫组织化学染色后评估肝脏凋亡蛋白裂解的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)表达水平。结果 与Sham组比较,HIRI组血清ALT、AST、TBil、IL-6含量和肝组织MDA含量、乳酸/丙酮酸比值、活性升高[ALT(μg/L):46.3±7.2 vs.106.4±18.3;AST(μg/L):61.8±9.7 vs.190.8±26.1;TBil(μg/L):4.62±0.68 vs.21.23±2.85;IL-6(ng/L):39.8±6.9 vs.209.3±30.1;MDA(U/gprot):10.61±2.12 vs.28.40±4.21;乳酸/丙酮酸比值:11.5±3.1 vs.61.7±8.9;p65(%):0.97±0.11 vs.3.85±0.54],肝组织SOD含量、p-AMPKα表达降低[SOD(U/g prot):68.9±19.7 vs.161.8±20.4;p-AMPKα:0.56±0.09 vs.1.14±0.15],肝组织HK2、LDHA和cleaved caspase-3表达明显升高(HK2:0.61±0.09 vs.0.16±0.03;LDHA:0.85±0.11 vs.0.38±0.05;cleaved caspase-3:4.74±0.63 vs.1.09±0.13)(P<0.05),肝细胞损伤明显减轻;与HIRI组比较,KM组血清ALT、AST、TBil、IL-6含量和肝组织MDA含量、乳酸/丙酮酸比值、p65活性降低[ALT(μg/L):106.4±18.3 vs.71.6±10.4;AST(μg/L):190.8±26.1 vs.111.7±17.9;TBil(μg/L):21.23±2.85 vs.12.34±1.91;IL-6(ng/L):209.3±30.1 vs.96.5±14.8;MDA(U/gprot):28.40±4.21 vs.18.26±2.70;乳酸/丙酮酸比值:61.7±8.9 vs.27.8±5.3;p65(%):3.85±0.54 vs.2.20±0.31],肝组织SOD含量、p-AMPKα表达升高[SOD(U/g prot):68.9±19.7 vs.115.4±16.8;p-AMPKα:0.56±0.09 vs.0.83±0.12],肝组织HK2、LDHA和cleaved caspase-3表达明显降低(HK2:0.61±0.09 vs.0.40±0.07;LDHA:0.85±0.11 vs.0.51±0.09;cleaved caspase-3:4.74±0.63 vs.2.66±0.39)(P<0.05),肝细胞损伤明显减轻;与HIRI组比较,KM+Hex组和Hex组血清ALT、AST、TBil、IL-6含量和肝组织MDA含量、乳酸/丙酮酸比值、p65活性升高,肝组织SOD含量、p-AMPKα表达降低,HK2、LDHA和cleaved caspase-3表达升高(P<0.05),肝细胞损伤变性进一步加重。结论 山奈黄酮醇预处理可抑制HK2/LDHA通路减轻HIRI诱导的糖酵解增强,抑制NF-κB介导的炎性反应和氧化应激,改善肝细胞损伤、凋亡。

表观遗传调控在肝缺血再灌注损伤中的研究进展

肝缺血再灌注损伤(HIRI)是肝脏外科经常遇到的问题,目前尚无有效治疗方法。近年来,表观遗传学被广泛研究,表观遗传调控与HIRI的发病机制密切相关,肝脏细胞在氧化应激后的DNA甲基化促进了肝损伤和纤维化的发生,活性氧诱导的组蛋白修饰影响染色质的浓缩、解链以及肝损伤后DNA修复,非编码RNA在转录后加工、翻译水平调控基因的表达,参与严重的HIRI。因此,深入研究表观遗传调控的作用机制将有助于探索针对HIRI的预防、诊断和干预措施。

骨桥蛋白在大鼠肝缺血/再灌注损伤中的作用

目的研究大鼠肝缺血/再灌注损伤(HI/RI)过程中骨桥蛋白(OPN)的作用。方法将大鼠分为假手术组(sham)和缺血/再灌注(I/R)6、12和24 h组,每组6只。苏木精-伊红染色(HE染色)观察肝组织的形态学变化;比色法检测大鼠血浆中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;RT-qPCR测定肝组织OPN mRNA表达;ELISA测定肝组织OPN含量。结果与sham组相比,HE染色提示I/R后肝细胞有明显的变性和坏死,以I/R 24 h组最为明显;血浆中AST和ALT水平增高,I/R 12 h时最显著(P<0.01);肝组织中MDA含量升高、SOD活力降低,I/R 24 h最显著(P<0.01);肝组织OPN mRNA表达量在I/R各组均有显著升高(P<0.01),OPN含量在I/R 24 h组显著增加(P<0.05)。结论OPN参与了大鼠HI/RI的发生,它可能是评价肝脏损伤的重要指标。

李校堃院士团队发现FGF18为肝缺血再灌注损伤的潜在治疗新靶点

近日,温州医科大学李校堃院士团队在Nature Communications期刊在线发表题为“FGF18 alleviates hepatic ischemia-reperfusion injury via the USP16-mediated KEAP1/Nrf2 signaling pathway in male mice”的论文。该研究证实FGF18在肝缺血再灌注过程中扮演关键作用,其可显著改善肝缺血再灌注过程中的损伤,主要体现在通过降低氧化应激以及炎症水平,最终减少肝细胞的凋亡。

异丙酚复合瑞芬太尼麻醉对肝部分切除术患者肝缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨异丙酚复合瑞芬太尼麻醉对肝部分切除术患者肝缺血再灌注损伤的影响。方法:研究开展于2021年5月至2022年11月,将这一时间段在浠水县人民医院行肝部分切除术的患者100例纳入研究,并随机分为对照组和观察组,各50例。对照组术中使用异氟烷复合芬太尼进行麻醉维持,观察组术中使用异丙酚复合瑞芬太尼进行麻醉维持。观察并比较两组的血流动力学指标﹝心率(HR)、平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)﹞和血清肝功能指标﹝谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)﹞在手术各个时间点的变化。结果:肝门阻断前(T_(1))、肝门开放后(T_(2))、肝门开放后0.5 h(T_(3))及肝门开放后1 h(T_(4)),两组的HR、MAP、CVP对比,P>0.05。T_(2)、T_(3)及术后1 d(T_(5)),观察组的血清ALT水平均低于对照组,P<0.05。T_(4)及T_(5),观察组的血清AST水平均低于对照组,P<0.05。T_(2)、T_(3)及T_(4),观察组的血清γ-GGT水平均低于对照组,P<0.05。T_(3),观察组的血清LDH水平低于对照组,P<0.05。T_(3)及T_(4),观察组的血清SOD水平均低于对照组,P<0.05。T_(2)、T_(3)、T_(4)及T_(5),观察组的血清MDA水平均低于对照组,P<0.05。结论:肝部分切除术中采用异丙酚复合瑞芬太尼麻醉能减轻肝缺血再灌注损伤,且不会对患者的血流动力学造成不良影响。

基于网络药理学分析反式肉桂醛治疗肝缺血再灌注损伤的机制

反式肉桂醛对肝缺血再灌注损伤有很好的抗炎、抗氧化、抗菌等作用。通过网络药理学方法探究反式肉桂醛治疗肝缺血再灌注损伤的潜在效应机制。方法 通过TCMSP、HERB、TTD、pubchem等数据库搜索反式肉桂醛对应的靶点基因及取并集,肝缺血再灌注损伤的关键词并收集相关基因。将药物靶点和疾病靶点取交集,利用R软件进行基于GO和KEGG的富集分析,寻找表达基因集合内大量基因共同的功能及相关通路。结果 对多数据库获得的靶点基因和药物靶点分别取并集,得到31个药物靶点和1155个疾病靶点。反式肉桂醛治疗肝缺血再灌注损伤的交集靶点22个,相互作用的核心基因集中到脂质和动脉粥样硬化信号通路,TNF信号通路、IL-17信号通路等。结论 该研究表明反式肉桂醛治疗肝缺血再灌注损伤的效应机制与炎症反应相关。

甲基莲心碱对肝缺血再灌注损伤模型小鼠氧化应激和炎症反应的影响

目的:考察甲基莲心碱对小鼠肝缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及机制。方法:将40只小鼠随机分为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和甲基莲心碱低、中、高剂量组(10、30、60 mg/kg),每组8只。每天灌胃给药1次,连续给药7 d。给药结束后,除假手术组外,其余各组小鼠均采用夹闭肝蒂60 min后再灌注6 h复制肝I/R损伤模型。造模结束后,检测各组小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平,苏木精-伊红染色后观察肝组织病理学变化并进行炎症评分,检测肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、TNF-αm RNA、IL-6 m RNA及核转录因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组小鼠血清中ALT、AST、TNF-α、IL-6以及肝组织中MDA、SOD、TNF-αm RNA、IL-6 m RNA和NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);肝组织间质有大量炎症细胞浸润、肝细胞坏死,炎症评分显著升高(P<0.05)。与模型组比较,除甲基莲心碱低剂量组小鼠血清中ALT、TNF-α和肝组织中TNF-αm RNA、MDA、NF-κB p65蛋白表达水平以及肝组织炎症评分降低不显著外,其余各组小鼠上述指标水平均显著降低(P<0.05);甲基莲心碱中、高剂量组小鼠肝小叶结构完整,肝细胞形态基本正常,病理损伤得到显著改善。结论:甲基莲心碱对肝I/R损伤模型小鼠具有保护作用,且呈剂量相关性;其作用机制可能与减轻氧化应激、抑制炎症反应和降低肝组织中NF-κB p65蛋白的表达有关。

大鼠肝缺血再灌注损伤诱导型一氧化氮合酶表达与肝细胞凋亡的关系

目的观察肝缺血再灌注(I/R)损伤时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肝组织中的表达及与肝细胞凋亡的关系,探讨其可能的机制。方法选健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为假手术组、缺血30min组(I组)、缺血30min即刻再灌注组(I/R组)、缺血30min再灌注后1h组(I/R1h)、缺血30min再灌注后2h组(I/R2h)、缺血30min再灌注后4h组(I/R4h),每组8只。分别测定各组谷丙转氨酶(GTP)、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶含量及观察肝脏组织HE染色,应用免疫组化法分别测定各组大鼠iNOS在肝组织的表达,应用原位细胞凋亡法测定肝细胞凋亡。结果肝脏I/R过程导致了肝脏明显的损伤,表现为肝血清酶升高(P<0.01),肝细胞水肿,炎性细胞浸润,甚至有细胞坏死。病理组织学变化与GTP变化一致。肝组织iNOS在I/R组即有表达增高(P<0.01),I/R组与I组、I/R1h组与I/R组相比有统计学差异(P<0.05)。细胞凋亡指数I/R组与假手术组比较明显增加(P<0.01),I/R组与I组,I/R2h组与I/R1h组、I/R4h组与I/R2h组相比均有统计学差异(P<0.01)。iNOS与肝细胞凋亡指数间存在显著正相关(r=0.952),P<0.01)。结论肝脏I/R损伤可引起肝组织损伤及肝细胞凋亡,肝细胞的凋亡与iNOS的高表达有关。

乌司他丁联合粉防己碱预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的观察乌司他丁(Ulinastatin,UTI)联合粉防己碱(Tetrandrine,TET)预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)的保护作用,并分析其作用机理。方法将40只雌性SD大鼠随均分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(HIRI组)、乌司他丁预处理组(UTI组)、粉防己碱预处理组(TET组)及乌司他丁联合粉防己碱预处理组(UTI+TET组),每组8只。五组分别于缺血前30 min腹腔注射生理盐水(5 m L/kg)、生理盐水(5 m L/kg)、UTI(5 m L/kg)、TET(5 m L/kg)以及UTI(5 m L/kg)+TET(5 m L/kg)。于肝缺血再灌注6 h后收集大鼠血清及肝组织标本。检测大鼠血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、碱性磷酸酶(alkaline hosphatase,ALP)活性。检测大鼠肝组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性及大鼠肝组织中核转录因子kappa B(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)p65的表达水平。结果 (1)HIRI组、UTI组、TET组及UTI+TET组血清LDH活性均较Sham组显著升高(P<0.01),HIRI组及TET组血清ALP活性均较Sham组升高(P<0.05,P<0.01),但UTI组、TET组及UTI+TET组血清LDH及ALP活性均明显低于HIRI组(P<0.01);UTI+TET组血清LDH及ALP活性明显低于TET组及UTI组(P<0.01)。(2)HIRI组、UTI组、TET组及UTI+TET组肝组织中MPO活性均较Sham组显著升高(P<0.01)、GSH-Px活性均较Sham组显著降低(P<0.01);但UTI组、TET组及UTI+TET组肝组织中MPO活性均显著低于HIRI组(P<0.01)、GSH-Px活性均显著高于HIRI组(P<0.01);UTI+TET组肝组织中MPO活性均显著低于TET组及UTI组(P<0.01)、GSHPx活性均显著高于TET组及UTI组(P<0.01)。(3)HIRI组、UTI组、TET组及UTI+TET组肝组织中NF-κB p65相对表达量明显高于Sham组(P<0.01);UTI组、TET组及UTI+TET组肝组织中NF-κB p65相对表达量明显低于HIRI组(P<0.01);UTI+TET组肝组织中NF-κB p65相对表达量明显低于UTI组及TET组(P<0.01)。结论 UTI联合TET对HIRI具有保护作用,其机制可能与其抑制肝细胞脂质过氧化作用、增强体内抗氧化能力及下调肝组织中NF-κB p65表达有关。