增殖细胞核抗原在急性肝功能衰竭大鼠肝组织中的动态变化

目的 :观察增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)在急性肝功能衰竭大鼠肝组织中的动态变化及促肝细胞生长素 (hepatocytegrowth promotingfactors ,HGF)对PCNA表达的影响。方法 :SD大鼠随机分为三组 ,即 :正常对照组、D 氨基半乳糖 (D Galactosamine ,D GalN)组和D GalN +HGF组 ,以D GalN1.2g/kg腹腔注射制备大鼠急性肝功能衰竭模型 ,2h后D -GalN +HGF组大鼠每 2 4h腹腔注射HGF 2mg/kg,分别于第 1天、第 3天、第 5天、第 7天、第 9天、第 11天、第 13天、第 15天用S P免疫组织化学技术检测肝组织中PCNA的表达。结果 :D GalN组大鼠肝组织PCNA标记指数 (PCNAlabelingindex ,PCNA LI)在模型建立成功后第 5天达峰值 ,以后急剧下降 ,在第 15天时达到正常对照组水平 (P >0 .0 5 )。D GalN +HGF组大鼠PC NA LI峰值于第 3天出现 ,比D GalN组早 ,持续时间长 ,且各时间点的PCNA LI均明显高于D GalN组 (P <0 .0 1)。结论 :急性肝功能衰竭时 ,残存肝细胞仍有再生能力 ,但其再生过程受到抑制。HGF可以提高PCNA的表达 ,从而促进肝细胞的再生。

促肝细胞生长素对急性肝功能衰竭大鼠肝组织Ki-67表达的影响

目的:观察促肝细胞生长素(hepatocyte growth—promoting factors,pHGF)对急性肝功能衰竭大鼠肝组织Ki-67表达的影响,探讨肝细胞再生的规律. 方法:SD大鼠随机分为正常对照组、D-氨基半乳糖(D- Galactosamine,D-GalN)组和D-GalN+pHGF组,以D- GalN 1.2 g/kg腹腔注射制备大鼠急性肝功能衰竭模型,2 h 后D-GalN+pHGF组大鼠每24 h腹腔注射pHGF:2 mg/kg, 并分别于第1、3、5、7、9、11、13、15 d处死各组大鼠6 只.如果该时间点前每组有濒死大鼠则提前处死,使每组各时间点处死大鼠总数为6只.采用S-P免疫组织化学法检测肝组织中Ki-67的表达. 结果:D—GalN组大鼠肝组织Ki-67标记指数(Ki-67 label- ing index,Ki-67-LI)在模型建立成功后第5 d达峰值,以后急剧下降,在第15 d时达到正常对照组水平,但D- GalN+pHGF组大鼠Ki-67-LI峰值于第3 d出现,比D-GalN 组早,持续时间长,且各时间点的Ki-67-LI均明显高于D- GalN组,在第15 d时仍未降至正常对照组水平,与之相比, 明显升高(P<0.01).D-GalN组及D—GalN+pHGF组肝细胞数量逐渐增多,但除第1 d外,D—GalN+pHGF组各时间点肝细胞数量明显高于D-GalN组(P<0.01). 结论:急性肝功能衰竭时,残存的肝细胞仍有再生能力, 但其再生过程受到抑制.pHGF可以提高急性肝功能衰竭大鼠肝组织Ki-67的表达,从而促进肝细胞的再生,但其再生程度同样受到一定程度的抑制.

微囊化猪肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝功能支持的实验研究

目的:探讨微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的效果。方法:采用原位胶原酶循环肝灌注法分离中国实验用小型猪肝细胞,海藻酸钠-氯化钡法微囊化。应用D-氨基半乳糖(D-gal)1.2g/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠急性肝衰竭模型。急性肝衰竭大鼠随机分为3组。注药24h后分别将PRMI1640培养液2ml腹腔注射为对照组(1组)、2ml游离猪肝细胞(2×107个/ml)腹腔内移植组(2组)、2ml微囊化猪肝细胞(2×107个/ml)腹腔内移植组(3组)。观察移植后大鼠14天存活率、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)的改变。结果:肝细胞移植后大鼠14天存活率:1组为20.0%(5/25),2组为66.7%(16/24),3组为76.0%(19/25),3组间差异有显著性(P<0.05)。移植后第1天1组ALT、TB和移植前相比差异无显著性,2、3组ALT、TB下降。第4天3组ALT、TB均继续下降,2、3组低于1组(P<0.05),2、3两组间差异无显著性(P>0.05)。移植后第7天,ALT进一步下降,3组间差异有显著性(P<0.05);TB3组显著低于2组和1组(P<0.05),2组低于1组但差异无显著性(P>0.05)。移植后第14天,肝功能均明显恢复,ALT、TB2、3组均低于1组(P<0.05),2、3两组间差异无显著性(P>0.05)。结论:微囊化猪肝细胞腹腔内移植可以提高药物诱导急性肝衰竭大鼠的存活率,改善ALF大鼠的肝功能。

一氧化氮合酶在急性肝功能衰竭大鼠主要器官中表达的变化

目的 :从分子和蛋白水平揭示在急性肝功能衰竭 (AL F)时不同一氧化氮合酶 (NOS)诱导产生的一氧化氮 (NO)在肝、肺、肾脏和肠组织中表达的变化。方法 :雄性 Wistar大鼠 6 0只 ,随机分为 6组 :假手术 (SO)组、AL F 6 h组、AL F 12 h组、L - Arg组、L - NAME组、L - Arg+L - NAME组 ,每组 10只 ,L - Arg用量 30 0 m g/kg,L - NAME用量 30 mg/kg;用原位杂交和免疫组化方法检测肝、肺、肾组织 e NOS m RNA、i NOS m RNA表达和小肠、大肠 e NOS和 i NOS表达。结果 :AL F 6 h组肺 e NOSm RNA表达明显增加 ,肝、肺、肾 i NOS m RNA表达亦显著增加 ,而 AL F 12 h组则明显降低 (P<0 .0 5 )。应用 L - Arg在 AL F 6h组肝、肾 i NOS m RNA表达明显降低 ,而应用 L - NAME和 (或 )应用 L - Arg在 AL F 6 h组肺 e NOS m RNA及肝、肺、肾 i NOSm RNA表达均显著降低 (P<0 .0 5 ) ;AL F 6 h组小肠、大肠黏膜 i NOS表达显著增加 ,而 e NOS表达在 6 h、12 h组明显降低 ,尤其在 12 h组降低更明显 (P<0 .0 5 ) ;应用 L - Arg和 (或 )应用 L - NAME时 ,小肠、大肠黏膜 e NOS、i NOS表达均明显降低(P<0 .0 5 ) ;应用 L- NAME大肠黏膜 e NOS、i NOS表达均明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :AL F早期肺、肾组织 i NOS m

实验性肝功能衰竭枯否细胞变化免疫组化研究

实验性肝功能衰竭枯否细胞变化免疫组化研究山西医学院病理生理教研室（０３０００１）尹镭，赵元昌，马学惠山西医学院生殖免疫研究室张义世山西医学院第一附属医院病理科程素珍肝脏枯否细胞是单核巨噬细胞系统的重要组成成份，在肝内除起清道夫作用外，尚具有多种功能，...

慢性肝功能衰竭患者肝组织HIF-1α和SDF-1α表达的相关性分析

目的观察缺氧诱导因子-lα(HIF-lα)和基质细胞衍生因子-lα(SDF-1α)在慢性肝功能衰竭患者肝组织中的表达状况。方法采用免疫组织化学法检测21例慢性肝功能衰竭患者及10名正常人肝组织HIF-1α和SDF-1α的表达。结果 21例患者肝组织HIF-lα和SDF-1α呈高表达,阳性率分别为57.1%和71.4%,明显高于正常肝组织(P<0.05);在患者肝组织中两者表达呈正相关(r=0.482,P<0.05)。结论慢性肝功能衰竭患者肝组织HIF-1α和SDF-1α表达增强,可能是HIF-1α上调了SDF-1α的表达,进而促进受损肝组织的自我修复。

95%肝切除与药物诱导大鼠急性肝衰竭模型的比较

目的 探讨一种理想的大鼠急性肝衰竭 (AHF)模型建立方法。方法 SD大鼠 3 6只随机分为 3组 :(1)改良手术诱导组 ,切除约 95 %肝脏组织 ,术中经中叶肝静脉注入 5 %葡萄糖氯化钠溶液 10ml/kg体重 ;(2 )传统手术诱导组 ,术中不行中叶肝静脉穿刺注射 5 %葡萄糖氯化钠溶液 ,其余手术方法同改良手术组 ;(3 )药物诱导组 ,给予D -氨基半乳糖 (D gal) 1.2g/kg腹腔注射。观察手术死亡率、建模后 2 4h大鼠存活率、血谷丙转氨酶 (ALT)、血氨 (NH3)、总胆红素 (TB)和血糖 (BG )。结果 传统手术诱导组手术死亡率高于改良手术组死亡率 (3 3 .3 %∶0 % ) ,改良手术诱导组、传统手术诱导组、药物诱导组大鼠建模成功后 2 4h存活率分别为 0 % ,0 % ,2 5 % ,改良手术诱导组ALT和NH3水平显著高于药物诱导组 (P <0 .0 5 ) ,TB和BG水平低于药物诱导组 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 通过改进的 95 %肝切除术可建立较理想的大鼠AHF模型 ,术中经中叶肝静脉注入 5 %葡萄糖氯化钠溶液可减少手术死亡率。

济生肾气丸加味防治慢性肾功能衰竭的实验研究

目的:通过动物实验,观察济生肾气丸加味防治慢性肾功能衰竭(CRF)的疗效,为临床用药和进一步筛选有效方药提供实验依据。方法:将健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、尿毒清组和济生肾气丸加味组4组,常规饲料喂养。大鼠每日上午造模,模型对照组、尿毒清组、济生肾气丸加味组每日上午用3%的腺嘌呤灌胃造模,正常组用生理盐水灌胃;下午给以药物防治,模型对照组、正常对照组生理盐水灌胃,尿毒清组及济生肾气丸加味组以相应药物灌胃,10 mL/(kg.d)的比例,共给药28 d。第29天腹主动脉采血检测电解质、肾功能、SOD、TNF-α等各项指标;处死动物,摘取肾脏,观察其病理改变。结果:①尿毒清组和济生肾气丸加味组可明显改善大鼠慢性肾功能衰竭的体征和组织病理变化,且后者较优;②尿毒清组和济生肾气丸加味组在升高SOD,纠正电解质紊乱,降低24小时尿蛋白量、Scr、BUN、NO、TNF-α等方面,与模型对照组比较差别均有统计学意义(P<0.01或P<0.05),且济生肾气丸加味组疗效优于尿毒清组。结论:尿毒清组和济生肾气丸加味组都能改善慢性肾功能衰竭大鼠的体征和组织病理变化,纠正电解质紊乱,减少24小时尿量,改善肾功能,清除自由基,纠正酸碱平衡失调,且济生肾气丸加味组优于尿毒清组。

抗利福平药物性抗体致急性肾功能衰竭1例实验诊断分析

目的:探索抗利福平药物抗体检测方法,为临床诊断提供参考。方法:采用免疫血清学方法。样品血清与利福平,新鲜补体共孵育,再进行间接抗人球蛋白试验,观察凝集强度。结果:检测结果为存在利福平药物抗体。结论:结合患者间竭性服药史,利福平药物抗体的存在是致急性肾功能衰竭的原发因素。

肝癌肝段栓塞与常规栓塞化疗致急性肝功能损害的酶学变化

目的 :探讨肝段化疗栓塞与常规化疗栓塞治疗肝癌对肝功能的影响程度。方法 :通过两组各2 0例肝癌病人分别采用上述两种不同的栓塞后 3d ,对复查肝功能的主要指标进行比较。结果 :两组不同的介入化疗栓塞方法治疗后肝功能指标变化 ,常规组ALT、AST、ALP、TBIL的改变 (P <0 .0 0 1)较节段组变化大 (P >0 .0 5 ) ,GGT两者差异无显著性 ,P均 >0 .0 5。结论 :肝段化疗栓塞与常规化疗栓塞对肝功能的影响 ,后者较之前者变化明显。肝癌的介入化疗栓塞 ,应尽可能行肝段栓塞 ,以减轻肝功能的损害。

Caspase-12在D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠急性肝功能衰竭中的表达及作用

目的探讨Caspase-12在D-氨基半乳糖(D-Gal)/脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肝功能衰竭发生发展过程中表达水平的变化及Caspase-12介导的内质网应激肝细胞凋亡途径在急性肝功能衰竭中的作用。方法以D-Gal/LPS联合腹腔注射诱导小鼠急性肝功能衰竭建立实验模型,在不同时间点动态检测血清氨基转移酶水平和观察肝组织病理变化,评估肝细胞凋亡和肝坏死演变过程;应用琼脂糖凝胶电泳检测肝细胞DNA凋亡条带;用半定量逆转录聚合酶链反应检测肝组织中Caspase-12 mRNA表达水平;west- ern blot检测Caspase-12、Bip/GRP78蛋白表达。结果药物诱导5h时肝组织中典型凋亡细胞增多,血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)开始升高,Caspase-12 mRNA表达明显增加, Caspase-12蛋白量表达反而减少;7h镜下出现大量肝细胞凋亡和坏死,ALT、AST水平达高峰,分别为(2564±1384)U/L和(1198±497)U/L,正常对照组为(59±17)U/L和(135±12)U/L,Caspase- 12 mRNA表达仍增加,Caspase-12蛋白表达量继续降低;9h 肝细胞坏死明显,伴散在凋亡细胞,ALT、AST水平明显下降,Caspase-12 mRNA表达较7 h下降。Bip/GRP78蛋自表达从5 h开始,至7 h逐渐增加。结论D-Gal/LPS诱导小鼠急性肝功能衰竭早期Caspase-12 mRNA表达水平逐渐升高,后期(7-9 h)降低,与肝细胞凋亡发生的时相一致;Caspase-12蛋白酶因内质网应激而被大量活化,提示Caspase-12介导的内质网应激肝细胞凋亡参与炎症性急性肝功能衰竭的发生发展,是急性肝功能衰竭中肝细胞损伤的重要机制之一,提示早期干预Caspase-12表达及活化对急性肝功能衰竭可能具有保护作用。

清温并用法对慢加急性肝衰竭大鼠调节性T淋巴细胞/辅助性T淋巴细胞17表达的影响

目的观察清温并用法对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠调节性T淋巴细胞(Treg)/辅助性T淋巴细胞(Th) 17表达的影响,探索其抗肝衰竭的作用机制。方法 SD大鼠140只随机分为正常组、模型组、清法组、温法组及清温并用法组。采用牛血清白蛋白致敏建立免疫性肝纤维化大鼠模型,然后以D-氨基半乳糖+脂多糖攻击建立ACLF模型。观察24 h内各组大鼠血清肝功能(ALT、TBil)、肝组织病理学改变及外周血Treg、Th17细胞数,并计算Treg/Th17比值。计量资料多组间比较釆用One-Way ANOVA比较,进一步两两比较选用LSD-t法检验。结果与正常组比较,模型组大鼠ALT、TBil在各时间点明显升高(P值均<0. 01),肝小叶结构被破坏,肝细胞见桥接及片状坏死,汇管区可见炎细胞浸润,外周血Treg、Th17细胞比例明显升高(P <0. 01),且Th17高于Treg,Treg/Th17比值明显降低(P <0. 01)。与模型组比较,清法组、温法组、清温并用法组ALT、TBil明显降低(P <0. 05),肝小叶结构较完整,肝细胞可见小片状、点状坏死,门区少量纤维组织增生,外周血Treg、Th17比例明显降低(P <0. 05),且Th17降低趋势高于Treg,其中以清温并用法组降低最明显(分别与清法组、温法组比较,P <0. 05)。结论清温并用法具有调节ACLF大鼠Treg/Th17失衡的作用,是其抗肝衰竭的作用机制之一。