孤儿核受体肝受体同系物-1以及与雌激素相互调节作用

肝受体同系物-1(LRH-1;NR5A2)是核受体的Ftz-F1亚家族成员,表达于肝、肠、胰腺外分泌部和卵巢,尤其在卵巢高表达,LRH-1在胚胎发育、胆固醇代谢、胆汁酸的动态平衡和类固醇激素生成等方面都起重要作用。本文对LRH-1的结构、调节及在雌激素生成过程中的作用作一综述。

湖羊Lrh-1基因cDNA序列及组织表达谱分析

本研究以湖羊肝脏为材料对肝受体类似物-1(Liver receptor homolog-1,Lrh-1;NR5A2)基因序列进行RT-PCR和RACE测定,并用DNAman、Tmpred、Signal P 3.0、Expasy等生物信息学分析软件和在线工具,对Lrh-1cDNA序列及其蛋白的理化特性、跨膜结构、信号肽和二级结构进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR方法检测湖羊Lrh-1基因的组织表达谱。结果表明,湖羊Lrh-1基因cDNA序列全长1 488bp,与牛的核酸序列相似度最高,为98%,编码区共编码495个氨基酸,氨基酸序列与牛、人、马、猴、犬、小鼠、褐鼠的氨基酸同源性分别为98%、97%、96%、97%、97%、86%和86%;Lrh-1mRNA在湖羊脑、消化及生殖系统组织中均有表达且具有组织特异性,其中在下丘脑组织中的表达量相对最高。

小鼠Lrh-1基因CDS区序列克隆及分析

肝受体类似物-1(liver receptor homolog-1,Lrh-1;NR5A2)是核受体的Ftz-F1亚家族成员,在胚胎发育、分化、胆固醇代谢、胆汁酸的动态平衡以及类固醇激素生成等都具有重要的作用。通过对健康的经产小鼠不同个体间Lrh-1基因CDS(Coding Sequence)特征域区测序及比对分析,结果发现,在LBD(Ligand binding domain)配体结合域区存在较大序列差异,有2种类型,1种与NM_001159769相似,而另1种则与NG_012313.1相似,两者序列差异较大,当翻译为多肽链后发现,第2种类型的序列中提前出现终止子,氨基酸数量相对减少83个,但这种缺失未导致该基因功能的丧失,表明该区段与Lrh-1蛋白质功能的不紧密性。

黄颡鱼LRH-1基因的分离和表达

肝受体类似物(Liver receptor homolog-1,LRH-1)是核受体家族Ftz-F1中一个亚家族成员,由于其在哺乳类卵巢中的高表达而被认为在卵巢类固醇合成的调控中起着一定的作用。本研究使用RT-PCR、RACE法分离到了黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)肝受体类似物基因(LRH-1)以及一个无活性的LRH-1′cDNA。LRH-1cDNA全长1945bp,包括5′非翻译区207bp,3′非翻译区238bp,开放阅读框1500bp,编码500个氨基酸,推算的蛋白分子量为57.19kD。LRH-1′全长1663bp,5′非翻译区283bp,3′非翻译区330bp,开放阅读框1050bp,编码350个氨基酸,推算的蛋白分子量为39.7kD。与LRH-1相比,LRH-1′缺少存在于基因5′端的锌指结构和3′端起转录激活作用的AF-2基序。不同动物LRH-1氨基酸序列比对结果表明,黄颡鱼LRH-1和其他动物的LRH-1相似性为79%-85%,和其他动物的类固醇生成因子(SF-1)相似性为59%-66%。系统发育树显示,Ftz-F1分为两大支,一支包括鱼类SF-1;另一支又有2个分支,分别包含其他动物的SF-1和所有动物的LRH-1,在LRH-1分支中鱼类LRH-1单独为一小支。以β-actin为内标的荧光实时定量RT-PCR结果显示,LRH-1在雌、雄黄颡鱼脑、肝、肾、性腺均有表达,以肝脏的表达量为最高,雌鱼各组织的表达量均比雄鱼高,其中肝脏和性腺差异明显(P<0.05);在卵巢的不同发育阶段,该基因的表达量也不尽相同,Ⅲ期卵巢表达量最高,明显高于Ⅴ期(P<0.05),Ⅴ期又明显高于Ⅱ、Ⅳ和Ⅵ期(P<0.05);注射催产素促黄体释放激素类似物(LRH-A)12h后,LRH-1在脑的表达量没明显变化,在肝脏和肾脏的表达量明显增加,而在卵巢的表达量明显下降。

小鼠Lrh-1基因与排卵数间相关性分析

目的探讨肝受体类似物-1(liver receptor homolog-1,Lrh-1;NR5A2)基因序列差异与小鼠排卵数性状间关系。方法根据GenBank中NM_001159769序列设计了5对引物扩增Lrh-1基因CDS区,用单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析小鼠Lrh-1基因序列差异,分析Lrh-1基因与小鼠排卵数间关系。结果①在5对引物中只有引物P2和P5扩增产物存在多态性,引物P2扩增产物存在两种基因型AA和AB型,其中AB型发生(C674A)突变,这种突变导致编码的140位氨基酸由谷氨酰胺变为赖氨酸。②引物P5扩增产物存在三种多态类型SSCP-1、SSCP-2和SSCP-3,SSCP-1和SSCP-3型核酸序列比SSCP-2型少25个碱基,SSCP-3型除缺失区段外,其他区域碱基序列与SSCP-2型有5处碱基突变,而与SSCP-1型核酸序列有34处碱基差异,经BLAST分析,SSCP-2型与NM_001159769序列相似,SSCP-1型与NM_001159769序列相差较多,而与NG_012313.1序列相似,通过氨基酸序列比对分析,SSCP-3型1652处的A→G的突变导致氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸,1678位G→C的突变使原密码子TAC(酪氨酸Y)变为TAG(终止子)。③引物P2 AA型(27.27±8.52)与AB型小鼠的平均排卵数(25.92±11.73)间差异无显著性(P>0.05);引物P5 SSCP-2型平均排卵数(35.00±14.58)显著高于SS-CP-3型平均排卵数(19.50±7.94)(P<0.05),SSCP-1型(26.2±8.18)与SSCP-2型、SSCP-3型平均排卵数间差异无显著性(P>0.05)。结论明确了Lrh-1基因序列差异与小鼠排卵数性状间关系,为深入研究Lrh-1基因对动物生殖调控机理提供依据。

湖羊HPG轴组织中LRH-1表达定位分析

为深入了解肝受体类似物-1(Liver Receptor Homolog-1,LRH-1)蛋白在湖羊下丘脑-垂体-卵巢轴组织中的表达分布,本研究应用免疫组织化学和酶联免疫吸附测定方法检测了湖羊母羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中LRH-1的表达。结果表明:LRH-1免疫阳性颗粒在下丘脑和垂体组织的分泌细胞、卵巢卵泡颗粒细胞、输卵管黏膜上皮分泌细胞和子宫腺细胞中均有分布;随湖羊发情周期的变化,下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中LRH-1蛋白表达量差异显著,除下丘脑组织在发情期与间情期间存在显著差异(P<0.05)外,其他组织在各阶段间均存在极显著差异(P<0.01);发情后期,下丘脑和卵巢组织中LRH-1蛋白表达量相对最高;间情期,输卵管组织中表达量相对最高;发情前期,垂体和子宫组织中表达量相对最高。结果显示,LRH-1蛋白的表达与湖羊HPG轴各组织功能存在相关性。

湖羊消化系统各组织中Lrh-1表达定位分析

肝受体类似物-1（Lrh-1）是动物胚胎发育、分化、胆固醇代谢、胆汁酸的动态平衡以及类固醇激素生成等方面重要的调节因子。本研究采用免疫组化方法对湖羊消化系统各组织进行Lrh-1蛋白表达定位检测。结果表明：Lrh-1免疫阳性细胞在湖羊皱胃、肝脏、小肠及大肠组织中均有分布,特别是在具有分泌功能的皱胃胃腺细胞、肝脏细胞、小肠和大肠肠腺细胞中有大量分布。说明Lrh-1是参与湖羊胃肠消化系统各组织分泌功能的重要因子。

LRH-1在女性生殖和乳腺癌中的研究进展

肝受体类似物-1(liver receptor homolog-1,LRH-1;NR5A2)是转录因子家族中的新成员,表达于肝、肠、胰腺和卵巢,尤其在卵巢高表达,参与胚胎发育的调节.近年来发现LRH-1还表达于人类乳腺中未分化脂肪组织的间质层,可能参与前脂细胞功能调节或脂肪细胞分化.因此对LRH-1的研究有助于揭示LRH-1与人类生殖及疾病的关系,为疾病的早期诊断和有效治疗提供了新靶点.

miRNA-381对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的观察mi RNA-381对胃癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T及BSG823和正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中mi RNA-381的表达;将AGS细胞系分成两组,阴性对照组和mi RNA-381模拟物组,采用Lipofectamine TM 2000分别转染mi RNA-381 scramble及mimics,采用CCK-8、Transwell实验测定两组细胞增殖和侵袭的影响,Western blot检测两组细胞肝受体类似物1(LRH-1)和扭曲相关蛋白1(Twist1)表达水平。结果胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T及BSG823中mi RNA-381相对表达量较正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1为低。mi RNA-381模拟物组在转染后72和96 h OD 450 nm值低于阴性对照组(P<0.05);阴性对照组侵袭细胞数为(79.6±7.2)个,mi RNA-381模拟物组侵袭细胞数为(31.70±4.2)个,mi RNA-381模拟物组侵袭细胞数少于阴性对照组(P<0.01);mi RNA-381模拟物组LRH-1蛋白相对表达量为(0.39±0.04),阴性对照组为1.0,mi RNA-381模拟物组LRH-1蛋白相对表达量低于阴性对照组(P<0.01);mi RNA-381模拟物组Twist1蛋白相对表达量为(0.51±0.05),阴性对照组为1.0,mi RNA-381模拟物组Twist 1蛋白相对表达量低于阴性对照组(P<0.01)。结论 mi RNA-381低表达于胃癌细胞系,mi RNA-381过表达可抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力,其机制可能与下调LRH-1和Twist1的表达有关。

下调LRH1对骨肉瘤细胞生长和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨下调肝受体类似物1(LRH1)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:采用RT-qPCR和Western blot分别检测人骨肉瘤细胞U2OS和成骨细胞hFOB1.19中LRH1 mRNA和蛋白表达差异;将体外培养的U2OS细胞分为对照组(Ctrl)、阴性对照(NC)-siRNA组和LRH1-siRNA组,RT-qPCR检测各组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达,MTT、流式细胞术、Transwell小室和划痕实验分别检测各组U2OS细胞增殖活力、细胞周期分布情况、穿膜细胞数和划痕愈合率,Western blot检测各组U2OS细胞中LRH1和Wnt/β连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期素D1(CyclinD1)、c-Myc、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。结果:与hFOB1.19细胞相比,U2OS细胞中LRH1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05);与NC-siRNA组相比,LRH1-siRNA组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达、细胞增殖活力、S期细胞占比、穿膜细胞数、划痕愈合率和LRH1、β-catenin、CyclinD1、c-Myc、MMP-9蛋白表达明显降低,而G0/G1期细胞占比明显升高(P<0.05);NC-siRNA组和Ctrl组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:骨肉瘤U2OS细胞中LRH1表达上调,下调其表达可通过诱导细胞周期阻滞抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖、减弱U2OS细胞侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

SF-1和LRH-1在子宫内膜异位症卵巢颗粒细胞中的表达

目的分析类固醇生成因子-1(SF-1)、肝受体类似物-1(LRH-1)在子宫内膜异位症卵巢颗粒细胞中的表达。方法选取该院2016年2月至2017年2月收治的65例子宫内膜异位症患者作为观察组,另选同期65例女性健康体检者为对照组,对两组卵巢颗粒细胞中SF-1mRNA和LRH-1mRNA进行检测和比较。结果观察组SF-1mRNA和LRH-1mRNA表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组内不同分期患者SF-1mRNA和LRH-1mRNA表达水平存在差异,Ⅰ期+Ⅱ期>Ⅲ期>Ⅳ期,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论子宫内膜异位症卵巢颗粒细胞中SF-1和LRH-1明显低于正常水平,分期越高,其水平越低,二者可能与子宫内膜异位症卵巢功能异常的病理机制相关。