氟喹诺酮类药物对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

目的比较4种氟喹诺酮类药物[左氧氟沙星(LVFX)、加替沙星(GTFX)、莫西沙星(MXFX)、帕珠沙星(PZFX)]对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系的影响。方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、LVFX组(LV组)、GTFX组(GT组)、MXFX组(MX组)、PZFX组(PZ组),每组6只,给药方案为120mg/(kg.d),尾静脉注射给药,连续7d。末次给药后24h处死动物,差速离心法制备肝微粒体混悬液,Lowry法测定肝微粒体蛋白浓度,分光光度法检测肝微粒体CYP450酶系的含量及活性,并采用单因素方差分析进行统计。结果与空白对照组比较,MX组和GT组大鼠肝重明显降低(P<0.01,P<0.05),LV组、GT组和MX组大鼠肝微粒体蛋白浓度明显增加(P<0.01),LV组和GT组CYP450含量增加(P<0.05,P<0.01),GT组细胞色素b5(Cytb5)含量增加(P<0.05)。肝微粒体NADPH-CytC还原酶活性测定结果显示,给药组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。氨基吡啉-N-脱甲基酶活性测定结果显示,LV组、GT组和MX组酶活性与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。红霉素-N-脱甲基酶活性测定结果显示,与空白对照组比较,GT组酶活性降低,MX组酶活性升高,差异有统计学意义(P<0.01)。大鼠肝微粒体CYP450酶系亚家族活性检测结果显示,与空白对照组比较,LV组、MX组和PZ组7-苄基香豆素脱烃酶(BROD)活性升高(P<0.01),GT组7-甲氧基香豆素脱烃酶(MROD)活性降低(P<0.05)、7-苯基香豆素脱烃酶(PROD)活性增加,PZ组PROD活性降低(P<0.01),4种药物均可使乙氧基香豆素脱烃酶(EROD)活性增加(P<0.01)。结论 4种氟喹诺酮类药物对CYP450酶系均有肯定作用,对不同的酶其作用效果不同,从影响范围来看,GTFX、MXFX、LVFX和PZFX的作用依次减小。

肝微粒体体外温孵法与基因重组P450酶系在药物体外肝代谢研究中的应用进展

目的 介绍肝微粒体体外温孵法与基因重组P450酶系在药物体外肝代谢中应用进展。方法 根据近几年的文献资料进行分析、综合、归纳，分别按肝微粒体体外温孵法与基因重组P450酶系进行介绍。结果与结论 两种方法在药物体外代谢研究上既有统一又可互补，二者相结合可更有效的应用于药物的高通量筛选、代谢物种选择及代谢物生成等研究领域。

联合诱导法对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

目的:观察苯巴比妥钠(PB)与β-萘黄酮(β-NF)联合应用对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系的影响。方法:16只SD雄性大鼠随机分为实验组和对照组,实验组腹腔注射PB和β-NF,对照组给予等量生理盐水,连续4d后取各组大鼠肝脏组织制备肝微粒体;测定肝脏脏器系数,采用Lowry法测定肝微粒体蛋白含量,分光光度法检测CYP450、细胞色素b5(Cytb5)含量和CYP3A活性,荧光分光光度法测定CYP1A2活性。结果:PB与β-NF联合应用后,大鼠肝脏脏器系数,肝微粒体蛋白含量、CYP450、Cytb5含量及CYP1A2、CYP3A活性较对照组均有增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PB和β-NF腹腔注射对大鼠肝微粒体CYP450酶系有较强的诱导效应。

消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射剂对人肝微粒体中CYP450酶7种亚型的体外抑制作用研究

目的:考察消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射剂对人肝微粒体CYP450酶7种亚型CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4/5的体外抑制作用。方法:消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射剂分别与7种CYP450酶亚型对应的混合探针药物在人肝微粒体中共同孵育,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定这7种探针药物的代谢产物:对乙酰氨基酚、羟基安非他酮、去甲阿莫地喹、4-羟基双氯芬酸、4-羟基美芬妥英、右啡烷和1-羟基咪达唑仑的浓度,分别代表CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4/5的活性,其对CYP450酶亚型的抑制程度以IC50值表示。结果:在体外人肝微粒体孵育体系中,消癌平注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4/5的IC50值分别为0.51%、1.34%、1.42%、0.93%、1.09%和0.75%,艾迪注射液对CYP2C8的IC50值为0.21%;消癌平注射液对CYP2D6的IC50值为2.58%,艾迪注射液对CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4/5的IC50值分别为13.24%、16.31%、4.27%和3.73%,华蟾素注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8和CYP2D6的IC50值分别为3.50%、28.01%、20.32%和32.59%,康艾注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2D6和CYP3A4/5的IC50值分别为2.55%、15.32%、1.44%、1.72%和3.99%,均高于各自的日用药量浓度;在测定浓度范围内,艾迪注射液对CYP1A2和CYP2D6,华蟾素注射液对CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4/5,康艾注射液对CYP2C9和CYP2C19的活性抑制率均小于50%。结论:在体外,正常剂量下,消癌平注射液对人CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4/5,艾迪注射液体对人CYP2C8均有明显抑制作用;消癌平注射液对CYP2D6,艾迪注射液对CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4/5,华蟾素注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8和CYP2D6,康艾注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2D6和CYP3A4/5,均无明显抑制作用;艾迪注射液对CYP1A2和CYP2D6,华蟾素注射液对CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4/5,康艾注射液对CYP2C9和CYP2C19,均无抑制作用。

肝细胞微粒体的制备和细胞色素P450氧化酶活性测定

目的：为测定人肝细胞微粒体细胞色素Ｐ４５０氧化酶的活性。方法：用差速离心法制备３例人肝细胞微粒体。结果：细胞色素Ｐ４５０的含量为０．５２３±０．００５ｎｍｏｌ·ｍｇ－１；细胞色素ｂ５为０．２８５±０．０２５ｎｍｏｌ·ｍｇ－１；氨基比林Ｎ－脱甲基酶的活力为０．５±０．６ｎｍｏｌ·ｍｇ－１；乙基吗啡Ｎ－脱甲基酶活力为０．９８±０．０８ｎｍｏｌ·ｍｇ－１。结论：Ｐ４５０酶活性影响因素较多，个体差异大。临床用药时应考虑患者的个体情况。

六味地黄丸对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响

目的:考察六味地黄丸对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响。方法:大鼠灌胃分别给予生理盐水、西咪替丁、苯巴比妥钠和六味地黄丸7d后,腹腔注射非那西丁,不同时间点采集血样,用HPLC法测定血浆中探针药物非那西丁的浓度,用DAS软件估算其药动学参数。结果:生理盐水组、西咪替丁组、苯巴比妥钠组和六味地黄丸组探针药物的t1/2分别为(93.5±9.2),(161.7±11.0),(85.4±9.0),(67.0±6.7)min。结论:六味地黄丸对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性有一定的诱导作用。

棉铃虫6龄幼虫中肠与脂肪体微粒体P450酶系的比较

报道了棉铃虫 6龄幼虫中肠和脂肪体微粒体P45 0酶系的组成与加单氧酶活性。与脂肪体微粒体相比 ,中肠微粒体具有更高的细胞色素P45 0、细胞色素b5和NADPH -细胞色素P45 0还原酶含量 ,表现出较高的艾氏剂环氧化酶和对 -硝基苯甲醚O -脱甲基酶活性。SDS PAGE电泳显示 ,中肠与脂肪体微粒体介于P45 0分子量范围内 (4 5～ 6 0kDa)的蛋白图谱有所不同 ,反映出中肠和脂肪体微粒体蛋白组成存在差异。通过对 -硝基苯甲醚O -脱甲基酶的动力学分析发现脂肪体微粒体的对 -硝基苯甲醚O -脱甲基酶对底物有更强的亲和性 ,表明不同组织来源的P45 0同功酶存在质的不同。

丹参注射液对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶体外抑制作用

目的评价丹参注射液在体外对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)亚型酶活性的影响。方法将丹参注射液分别与5种CYP450亚型酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4)的特异性探针底物非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬与大鼠肝微粒体进行孵育,采用UPLC-MS/MS法测定对应5种代谢产物对乙酰氨基酚、4-羟基甲苯磺丁脲、5-羟基奥美拉唑、右啡烷、N-去甲右啡烷的含有量并计算其IC50。结果丹参注射液对CYP1A2、CYP3A4的IC50值均大于100μg/m L,对CYP2C9、CYP2C19和CYP2D6的IC50值分别是3.32、16.44、0.30μg/m L。结论丹参注射液对CYP1A2、CYP3A4没有抑制作用,但对CYP2C19和CYP2C9分别有弱和中等抑制作用,对CYP2D6表现出强抑制作用。

刺五加注射液对大鼠肝微粒体四种CYP450亚型酶活性的影响

目的:研究刺五加注射液在大鼠体外肝微粒体中对CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4活性的影响,为临床合理联合用药提供参考。方法:在大鼠体外肝微粒体中分别加入四种亚型酶的探针药物甲苯磺丁脲(TB)、右美沙芬(DM)、氯唑沙宗(CLZ)、睾酮(TS)和低、中、高剂量的刺五加注射液,温孵后用HPLC法测定各空白对照组和不同剂量刺五加注射液给药组中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异,以评价刺五加注射液对各亚型酶活性的影响;中剂量组活性显著降低的亚型酶进一步考察抑制作用的强弱(即IC50和Ki值)。结果:与空白对照组比较,刺五加注射液低、中、高剂量给药组对CYP3A4活性的影响均有统计学意义(P<0.01),抑制率分别为10.22%、19.00%、30.29%,其IC50和Ki值分别为3.96%和2.74%(V/V);低、中、高剂量给药组对CYP2D6活性的影响均无统计学差异(P>0.05);低剂量给药组对CYP2C9、CYP2E1活性的影响无统计学差异(P>0.05),中、高剂量给药组对两个亚型的抑制作用有统计学差异(P<0.05),但中剂量给药组抑制率均小于8.50%,高剂量给药组抑制率均小于12.00%。结论:刺五加注射液对大鼠体外肝微粒体CYP3A4有抑制作用,且符合混合型抑制模型;对CYP2C9、CYP2E1抑制作用较弱;对CYP2D6活性无影响。

中国成人肝微粒体P450酶活性研究

目的观察中国成人肝微粒体细胞色素P450(CYP450)、细胞色素b5(CYb5)的含量及常见几种药物代谢酶活性水平及在性别、民族间的分布差异。方法肝组织匀浆10000×g离心去除沉淀,再以100000×g超速离心60min,取沉淀加PBS甘油缓冲液,充分溶解制成微粒体悬液,用Lowry法测定蛋白含量;用双光道紫外分光光度计测定CYP450和CYb5的含量及P450酶活性。结果48例成人肝微粒体CYP450和CYb5含量分别为(0.46±0.07)nmol/mg和(0.44±0.04)nmol/mg;男性组CYP450和CYb5含量分别为0.49±0.05)nmol/mg和(0.46±0.06)nmol/mg,均高于女性组的(0.41±0.08)nmol/mg、(0.42±0.05)nmol/mg,P<0.05;汉族、回族和壮族3个民族P450和CYb5含量作q检验进行两两比较,各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。药物代谢酶NADPH细胞色素C还原酶(NR)、乙基吗啡N-脱甲基酶(EDM)、氨基比林N-脱甲基酶(ADM)、苯并芘羟化酶(BPH)和戊巴比妥侧链羟化酶(PSCH)等酶活性水平分别为(0.71±0.13)nmol/(mg.min),(0.89±0.18)nmol/(mg.min),(0.99±0.17)nmol/(mg.min),(0.07±0.01)nmol/(mg.min),(4.15±0.65)μmol/(mg.min),其中EDM活性水平女性组高于男性组(P<0.05),PSCH活性水平男性组高于女性组(P<0.05),其他各种酶活性男女之间无显著性差异;上述5种酶活性水平经q检验,汉族、回族和壮族3个民族之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论测定了中国成人肝微粒体CYP450、CYb5含量及NR,EDM,ADM,BPH,PSCH等酶活性水平,男性组CYP450、CYb5含量及PSCH活性高于女性组,而EDM活性水平女性组高于男性组,上述7种指标在汉族、回族和壮族之间差异均无统计学意义。

甲基原薯蓣皂苷对人肝微粒体中7种CYP450酶活性的影响

目的研究甲基原薯蓣皂苷对CYP450酶的7种亚型酶活性的影响。方法将MPD和CYP450酶7种亚型的特异性探针底物咖啡因（CYP1A2）、右美沙芬（CYP2D6）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、s-美芬妥因（CYP2C19）、氯唑沙宗（CYP2E1）、香豆素（CYP2A6）及咪达唑仑（CYP3A4）与人肝微粒体进行孵化反应，采用HPLC和LeMS／MS法测定对应的7种代谢产物（1，7-二甲基黄嘌呤、去甲右美沙芬、4-羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、6-羟基氯唑沙宗、7-羟基香豆素和1-羟基咪达唑仑）的浓度，通过与对照组比较，确定MPD对以上7种酶活性的影响。结果MPD在1～10μmol·L^-1时对7种酶均无明显抑制作用，在100／μmol·L^-1时对CYP2D6有抑制趋势，但对其他6种酶无抑制作用，均无统计学意义（P〉0．05）。结论MPD在与以上6种酶（CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9和CYP2A6）代谢的药物联合用药时，发生药物相互作用的可能性较小。

氯胺酮多次给药对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶的诱导作用

目的考察氯胺酮对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶活性的影响。方法以10mg.kg-1.d-1氯胺酮灌胃给予大鼠,连续给药10d。在第11d处死大鼠,以钙离子沉淀法制备肝微粒体。采用Omura和Sato方法测定细胞色素P450含量,采用7-戊氧基试卤灵-O-去烷基反应测定细胞色素P450_2B酶的活性。结果给药组和对照组细胞色素P450的总含量分别是(0.679±0.216)nmol·mg-1和(0.398±0.109)nmol·mg-1,细胞色素P450_2B酶的活性分别是(13.40±3.15)pmol·min-1.mg-1和(7.04±2.09)pmol·min-1.mg-1。结论氯胺酮能够增加大鼠肝微粒中细胞色素P450含量,并能显著诱导细胞色素P450_2B酶的活性。

白屈菜碱在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学及CYP450酶特异性抑制剂对其代谢的影响

目的研究白屈菜碱在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学及CYP450酶特异性抑制剂对其代谢的影响。方法将系列浓度的白屈菜碱与大鼠肝微粒体进行体外共孵育,采用HPLC法测定孵育液中剩余白屈菜碱的浓度,利用Graph Pad Prism 6.0软件进行数据拟合并计算酶动力学参数;分别将5种CYP450酶的特异性抑制剂与白屈菜碱进行共孵育,考察抑制剂对白屈菜碱代谢的影响,探讨参与其代谢的酶亚型。结果在大鼠肝微粒体中,白屈菜碱的Vmax为(3.52±0.18)mmol·min-1·kg-1;Km为(12.02±2.92)μmol·L-1;CLint为292.4 L·min-1·kg-1;CYP450酶特异性抑制剂酮康唑、α-萘黄酮、氟康唑和奎尼丁可以显著地抑制白屈菜碱的代谢,而噻氯匹定对白屈菜碱的代谢没有明显影响。结论白屈菜碱在大鼠肝微粒体中广泛代谢,CYP3A4、CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9是参与其代谢的主要代谢酶。

鲫鱼肝脏微粒体CYP450同工酶对多溴联苯醚胁迫的应答

以鲫鱼(Carassius auratus Linn.)为试验鱼类,研究了其暴露于不同浓度的2,2',4,4'-四溴联苯醚(PBDE-47)和十溴联苯醚(PBDE-209)后鱼肝微粒体中CYP450同工酶活性的动态变化。结果表明,鲫鱼在0.10～5.00mg·L-1的PBDE-47和5.00～50.0mg·L-1的PBDE-209中暴露15d后,其肝脏微粒体中CYP450系的同工酶CYP1A1被诱导,呈显著的剂量-效应关系。CYP1A1的活性随着作用时间的延续而上升,到试验第15d时达到最高,但上升速率最快的阶段为试验后的0～5d。而CYP450系的同工酶CYP1A2则表现出不同的特点,即低浓度PBDEs试验组对CYP1A2无显著影响(P>0.05),但5.00mg·L-1PBDE-47、30.0和50.0mg·L-1PBDE-209浓度组的鱼肝微粒体CYP1A2活性受到了轻微的抑制,最大抑制率分别为6.48%、3.48%和7.23%。研究表明,鱼类肝脏微粒体中CYP450的同工酶可作为污染生物标志物来评价PBDEs的早期污染毒理效应。

羊耳菊提取物对大鼠和人肝微粒体CYP450酶的体外抑制作用

目的:考察羊耳菊(YEJ)提取物对大鼠和人肝微粒体CYP450酶的6种主要亚型酶的抑制作用。方法:采用钙盐沉淀法提取肝微粒体,在肝微粒体孵育体系中,用PBS溶液将YEJ提取物逐级稀释至5个不同浓度(0.01、0.05、0.25、0.5、1 g/L),分别与混合探针底物(非那西丁、氯唑沙宗、右美沙芬、奥美拉唑、甲苯磺丁脲、咪达唑仑和睾酮)共同孵育,采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定6种探针底物对应代谢物的生成量,以空白溶剂组的代谢物生成量为V 0,其余不同YEJ提取物浓度的代谢物生成量为Vx,求得剩余酶活性I=(1-Vx/V0)×100,通过GraphPad v 5.0软件拟合曲线,并计算IC 50值。结果:YEJ提取物对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C11、CYP2C19、CYP2D4、CYP2E1和CYP3A2的IC 50值范围为0.287~152.407 g/L,对人肝微粒体CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4的IC 50值范围为0.258~19.275 g/L。结论:YEJ提取物对大鼠和人肝微粒体中6种亚型酶活性存在较弱的抑制作用。

疣荔枝螺微粒体细胞色素P450酶系的光谱分析

从疣荔枝螺内脏团制备得到微粒体,用UVmini1240分光光度计对细胞色素P450酶系的三种主要成分:细胞色素P450、细胞色素b5,NADPH细胞色素P450还原酶进行了测定,并对微粒体酶液进行SDS-PAGE电泳测试,证明了疣荔枝螺体内含有细胞色素P450酶系的三种酶。

抗痫灵对大鼠肝微粒体P450酶系的影响

抗痫灵的系统药理作用,药代动力学和临床药效研究均有报道。本实验从肝微粒体水平进一步证明抗痫灵对肝药酶的影响。

藏药余甘子鞣质部位对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响

目的:考察藏药余甘子鞣质部位对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响。方法:采用"Cocktail"探针底物与大鼠肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时测定6种探针药物氨苯砜、氢溴酸右美沙芬、香豆素、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的代谢消除率,评价余甘子鞣质部位对P450酶中CYP3A4、CYP2D6、CYP2A6、CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9亚酶活性的影响。结果:余甘子鞣质部位对P450酶影响较小,CYP3A4,CYP1A2的IC50值超过200μg·m L-1,CYP2C9的IC50值超过500μg·m L-1。结论:藏药余甘子鞣质部位对肝P450酶活性影响较弱。

典型羟基化多溴联苯醚(OH-PBDEs)小鼠肝微粒体的体外代谢及关键代谢CYP450酶系的研究

羟基化多溴联苯醚(OH-PBDEs)是一类具有内分泌干扰效应的酚类化合物,本研究以小鼠肝脏微粒体作为研究对象,考察了4种典型OH-PBDEs(3-OH-BDE-47、5-OH-BDE-47、6-OH-BDE-47和2′-OH-BDE-68)的体外代谢.研究结果表明,4种OH-PBDEs在小鼠肝脏微粒体中均能被代谢;OH-PBDE结构上的醚键(O)、羟基(OH)和溴原子(Br)的相对位置会影响其代谢效率,OH位于苯环上醚键邻位更有利于其代谢,即6-OH-BDE-47表现出相对较高的代谢率;抑制剂实验发现CYP1A2和CYP3A4是4种典型OH-PBDEs主要的CYP450代谢亚型.

3-氨基苯二酰肼发光法在微粒体和重组细胞色素P450酶系中的毒理学应用(英文)

本文分别从微粒体和重组细胞色素P450酶系水平,研究了3-氨基苯二酰肼(luminol)化学发光在毒理学中的应用。研究结果表明luminol化学发光法不仅可用于P450酶系活力的测定,也可用来检测反应体系中由外来化合物代谢转化而产生的自由基。自由基清除剂SOD、过氧化氢酶和二甲亚砜对多种重组酶系的化学发光均有不同程度的淬灭作用,其中以SOD作用最强,其抑制率为93～100％。44种外来化合物的重组酶系化学发光的测定结果表明,已知在代谢转化过程中形成自由基的化合物,其化学发光强度明显增强,如四氯化碳、三氯甲烷、四氯乙烯等;经代谢转化后毒作用增强的化合物,其发光强度有的增强,如二硫化碳、苯、甲苯、甲基对硫磷等,有的不变或减弱,如对硫磷、苯胺、马拉硫磷等;毒作用与代谢转化关系不很密切的化合物,其发光强度与对照比较无变化或减弱,如氨基比林等,多环芳烃类和亚硝胺类致癌物的发光强度,除3-甲基胆蒽、二甲基亚硝胺外,均无明显变化。