沉默CTGF对肝星状细胞凋亡及胞外基质表达的影响

目的 观测沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)基因对肝星状细胞T6(hepatic stellate cell T6,HSC_T6)的生长与凋亡,以及增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、CTGF、整合素α5(integrin alpha 5,Itgα5)和Ⅰ型胶原(collagenⅠ, ColⅠ)表达的影响。方法 将CTGF-shRNA病毒感染HSC_T6(实验组)。空病毒感染的HSC_T6(空病毒组)或未感染的HSC_T6(正常组)作对照。在显微镜下观测被感染HSC_T6的生长与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的表达变化;采用CCK-8(cell count kit-8)比色检测被感染HSC_T6的增殖情况;流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测被感染HSC_T6的凋亡情况。定量PCR、Western blot及免疫荧光细胞化学分别检测PCNA、CTGF、Itgα5和ColⅠ的表达变化。结果 在显微镜下观察到被感染的HSC_T6高表达GFP。CCK-8结果表明,与对照相比,沉默CTGF基因的HSC_T6生长显著受抑,72 h开始其差异具统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示,沉默CTGF基因可诱导HSC_T6凋亡。定量PCR、Western blot及免疫荧光细胞化学结果证实,沉默CTGF基因可在mRNA及蛋白水平明显下调HSC_T6的PCNA、CTGF、Itgα5与ColⅠ的表达,与对照比较,差异均具统计学意义(P<0.05)。结论 沉默CTGF基因可下调HSC_T6的PCNA、CTGF、Itgα5及ColⅠ的表达,抑制HSC_T6的生长,诱导HSC_T6凋亡,其机制可能和HSC_T6的CTGF/Itgα5信号通路受阻紧密相关。

赤芍水提物对肝星状细胞株HSC-T6促凋亡作用的实验研究

目的应用流式细胞法,研究灌服赤芍水提物后的犬血清对乙醛造模后的肝星状细胞株HSC-T6细胞的促凋亡作用。方法采用乙醛造模后的肝星状细胞株HSC-T6作为体外研究模型,以赤芍水提物给彼格犬一次性灌胃,取给药前的血清、给药后1h、2h、3h、5h血清作为实验药物血清。以流式细胞法(flow cytometry)分别检测以上采血时间点上2%浓度的药物血清对乙醛造模后的肝星状细胞株HSC-T6作用72h后的促凋亡作用。结果2h、3h两个时间点的含药血清能明显促进HSC-T6细胞的凋亡,其中2h2%含药血清的促凋亡率5.71%,3h2%含药血清的促凋亡率5.73%。和同样条件下用空白血清培养的HSC-T6细胞相比其凋亡比例显著性增加(均为P<0.05)。在药物血清的作用下两个时点组的HSC-T6细胞在G0/G1期细胞比例明显上升(P<0.05);而S期细胞显著减少(P<0.05);但G2/M期并没有一致性的变化。结论两个时点的药物血清对HSC-T6细胞都有显著的促凋亡作用,且能显著增加HSC-T6细胞在G0/G1期的比例及显著降低S期的比例,这可能是其抑制HSC-T6细胞增殖及促凋亡的原因之一。

姜黄提取物对大鼠肝星状细胞增殖与活化的影响

目的研究姜黄提取物（姜黄素）对大鼠肝星状细胞增殖和活化的影响。方法培养大鼠T6肝星状细胞株，并使用姜黄素对细胞进行处理，采用四甲基偶氮唑蓝[3-（4，5-dimthy-2-2thiazoly）2，5-dipheny-2H-tetrazoliun bromide，MTT]比色分析法检测药物对细胞增殖的影响；收集细胞并抽提细胞总蛋白，10％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，采用Western blot检测药物处理对细胞表达α平滑肌肌动蛋白的影响。结果姜黄素剂量依赖性地抑制大鼠T6肝星状细胞株的增殖，并可以降低细胞表达α平滑肌肌动蛋白的水平。结论姜黄素能够抑制肝星状细胞的增殖和活化．

大黄素抗肝纤维化的细胞学研究

目的研究大黄素对大鼠肝星状细胞(HSC)T6增殖和细胞外基质合成的影响。方法应用肝星状细胞株HSC-T6,观察各组细胞在不同浓度大黄素干预后在增殖程度和细胞周期等的变化。通过测定培养液上清中透明质酸(HA)和层黏蛋白(LN)的含量,采用3H-脯氨酸掺入法研究大黄素对HSC胶原合成的影响。结果5～15mg/L浓度大黄素能够抑制HSC-T6细胞的增殖,显著降低HA的表达以及胶原合成,这种效应具有浓度依赖性。流式细胞仪检测发现,大黄素能够对细胞的细胞周期产生浓度依赖性阻滞作用,G0/G1期细胞比例则逐渐上升。结论大黄素在体外对于大鼠肝星状细胞HSC-T6的增殖和细胞外基质合成均具有明显的抑制作用,可能是其抗肝纤维化的机制之一。

鬼针草总黄酮部分化学成分研究

目的对鬼针草中的化学成分进行分离纯化,并筛选出具有抗肝纤维化活性的单体化合物。方法采用大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20、MCI小孔树脂、十八烷基硅烷键合硅胶柱等柱层析的方法进行分离纯化,并利用波谱技术进行化合物的鉴定。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法体外检测单体化合物对肝星状细胞T6(HSC-T6)的抑制作用。结果从鬼针草中分离鉴定的化合物为3-羟基乙酰基吲哚(1)、山奈酚(2)、6,7,3',4'-四羟基橙酮(3)、槲皮素(4)、奥卡宁(5)、松脂素(6)、1,2,13-三羟基-3,11(E)-十三二烯-5,7,9-三炔(7)、异奥卡宁(8)、邻苯二甲酸-双(2'-乙基庚基)酯(9)、山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(10)、(2S/2R)-异奥卡宁-7-O-β-D-(2″,4″,6″-三乙酰基)吡喃葡糖苷(11/12)、2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-1,13-二羟基-3,11(E)十三二烯-5,7,9-三炔(13)。结论化合物6,9为首次从鬼针草种属中分离得到。其中黄酮类化合物2,4具有较强的体外抑制HSC-T6细胞的增殖作用。