肝螺杆菌多重PCR检测方法的建立及应用

目的建立肝螺杆菌的多重PCR检测方法,对中国动物肝螺杆菌进行检测。方法以毒力基因flaB基因、ureA基因和cdtB基因和cdtC基因作为靶基因,建立检测肝螺杆菌的多重PCR方法。对肝螺杆菌、空肠弯曲菌、幽门螺杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌、大肠埃希氏菌和铜绿假单胞杆菌抽提的DNA进行多重PCR扩增。应用本研究建立的多重PCR检测方法对482只动物(其中:海南30只猴、江苏34只小鼠和北京32只猴、30头猪、66只犬、13只兔、29只豚鼠、69只大鼠、213只小鼠)进行检测,对扩增出的阳性结果进行测序。同时,对所有样本采用选择性培养基进行肝螺杆菌培养以作对照。结果肝螺杆菌能扩增出各自的特异性条带,而其他参考菌株均未扩增出条带,这表明该方法具有较强的特异性。482份样本中检出43份肝螺杆菌阳性样本,阳性率8.92%(43/482),其中:2只犬(3.03%,2/66)、1只兔(7.69%,1/13)、5只大鼠(7.25%,5/69)和35只小鼠(16.43%,35/247)均扩增出肝螺杆菌毒力基因片段。结果显示,肝螺杆菌flaB基因、ureA基因和cdtB基因和cdtC基因序列与GenBank中的肝螺杆菌ATCC51449的相应基因序列核苷酸同源性高达99%。用选择性培养基能培养出肝螺杆菌。结论中国动物中的犬、兔、大鼠和小鼠均能检出肝螺杆菌flaB基因、ureA基因、cdtB基因和cdtC基因。建立的多重PCR检测方法可作为肝螺杆菌大规模检测的新技术,这为在中国开展肝螺杆菌流行病学调查提供了有效科学工具。

首次从中国小鼠中分离到肝螺杆菌及其鉴定

目的对中国小鼠肝螺杆菌进行分离鉴定。方法采集中国某实验动物中心发病小鼠标本,采用细菌学分离培养、血清学试验、多重PCR检测、病理组织学检查等方法进行鉴定,并对细菌的分子生物学特征进行分析。结果分离到一株能产生多种毒素的细菌,经鉴定为肝螺杆菌(HHm0801)。用螺杆菌属16SrRNA基因特异引物和肝螺杆菌16SrRNA基因、flaA基因、flaB基因、ureA基因、cdtB基因、cdtC基因特异引物对HHm0801细菌的PCR扩增为阳性,经核苷酸序列测定分析证实上述序列与肝螺杆菌ATCC51449基因序列(GenBank登录号:NC004917)同源性高达99%。肝螺杆菌感染小鼠肝脏的肝细胞肿大,出现大小不等的空泡,部分胞核深染,局部坏死,肝小叶脂肪变性;直肠部分绒毛脱落,有少量炎性细胞,局部充血。脾脏淋巴细胞散在分布,小叶间隔不清晰,脾巨噬细胞增多。眼睛巩膜增厚,晶状体部可见深色物质沉着。结论首次从中国小鼠中分离到了肝螺杆菌,为进一步研究该菌及开展流行病学调查提供了科学依据。

肝螺杆菌甲基基团趋化信号转导蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备肝螺杆菌甲基基团趋化信号转导蛋白多克隆抗体。方法将我室保种的重组质粒pET22b+/MCP转化大肠杆菌感受态BL21(DE3),IPTG诱导表达His-rhMCP融合蛋白,将表达的融合蛋白纯化后,免疫家兔制备抗体,间接ELISA法测定抗体效价,以制备的菌体外膜蛋白(肝螺杆菌、胆型螺杆菌及幽门螺杆菌)采用Western blot鉴定抗体的特异性。结果大肠杆菌成功表达His-rhMCP融合蛋白,ELISA法检测抗体的效价达到1∶32000,Western blot检测结果显示抗体可与肝螺杆菌菌体外膜蛋白及His-rhMCP特异结合。结论制备了高效价、高特异性的rhMCP抗体,为进一步研究肝螺杆菌的流行病学奠定了基础。

慢性肝病患者肝螺杆菌血清抗体水平分析

目的分析不同病因慢性肝病患者血清肝螺杆菌抗体(抗H.hepaticus-IgG)相对抗体活性(RAA)以及螺杆菌抗原之间的交叉反应。方法随机选取不同病因的慢性肝病患者(CLD)76例(其中慢性乙型病毒性肝病27例、慢性丙型病毒性肝病25例、自身免疫性肝炎8例和慢性酒精性肝病16例)、健康献血者80名以及体检人群80名,应用ELISA方法检测吸收试验前后血清中抗H.hepaticus-IgG相对抗体活性。结果 CLD患者抗H.hepaticus-IgG抗体的RAA明显高于献血者和普通人群组(P<0.001);CLD患者和普通体检人群抗H.pylori-IgG抗体的RAA平均值明显高于献血者(P<0.001);CLD患者中除自身免疫性肝炎患者外,慢性乙型肝炎患者、慢性丙型肝炎及酒精性肝病患者抗H.hepaticus-IgG抗体的相对抗体活性反应均明显增高,慢性丙型肝炎患者抗H.hepaticus-IgG抗体的RAA值明显高于其他肝病患者(P<0.001),吸收试验前后抗H.hepaticus-IgG抗体的RAA值无显著性变化(P>0.05)。结论 H.hepaticus和H.pylori的细胞表面蛋白具有较高的交叉反应,慢性肝病患者抗H.hepaticus-IgG抗体反应在吸收试验后仍保持较高水平。

肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立及初步应用

根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86.9fg/L,是普通PCR所需模板量的1/10。本研究建立的LAMP快速检测方法具备操作简单、特异性好、灵敏度高的优点,结果易于观察,对仪器设备要求低,适宜推广应用。

肝螺杆菌鞭毛蛋白B基因的克隆和序列测定

目的对肝螺杆菌BJ 0801鞭毛蛋白B(flagellin B,fla B)基因进行扩增、克隆和序列测定,以探讨其功能。方法根据已公布的肝螺杆菌ATCC 51449序列,设计合成一对引物,以肝螺杆菌BJ 0801株DNA为模板,扩增fla B基因片段,与pGEM-T载体连接并转化感受态E.coliDH5α,提取的重组质粒经双酶切、PCR、电泳鉴定并进行序列测定。结果目的基因片段长度为1 545 bp,与已公布的肝螺杆菌ATCC 51449核苷酸同源性达99%。结论成功克隆出肝螺杆菌BJ 0801鞭毛蛋白B基因序列,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

肝螺杆菌感染与人类原发性肝细胞癌的相关性研究

目的本研究旨在了解肝肠源性螺杆菌是否存在于肝细胞癌患者的胆汁内,探讨此菌与肝癌的相关性。方法收集经病理确诊的47例原发性肝细胞癌患者及24例结肠直肠癌肝转移患者的胆汁标本。使用特定16SrRNA引物的聚合酶链式反应(PCR)及DNA测序检测胆汁标本中的螺杆菌属及肝螺杆菌特异性16SrRNA,并使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测胆汁标本中的肝螺杆菌抗体。结果 47例原发性肝细胞癌患者胆汁标本中有12例(25.5%)检测出肝螺杆菌特异性16SrRNA,15例(31.9%)检测出抗肝螺杆菌抗体;24例结肠直肠癌肝转移患者胆汁标本中只有1例(4.2%)检测出肝螺杆菌特异性16SrRNA基因,3例(12.5%)检测出抗肝螺杆菌抗体(P<0.05)。结论原发性肝细胞癌患者可检测出肝螺杆菌,这可能与肝细胞癌的发病机制有一定联系。

肝螺杆菌甲基基团接受趋化信号转导蛋白的克隆表达及纯化

目的克隆肝螺杆菌(H.hepaticus)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCP)基因,制备MCP重组蛋白,为以后检测我国人群肝螺杆菌感染率提供实验基础。方法利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pET22b(+),构建MCP的原核表达质粒pET22b+/MCP。将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析系统纯化重组蛋白。结果构建了原核表达质粒pET22b+/MCP,含有该质粒的大肠杆菌经1 mmol/L IPTG诱导4 h后表达一相对分子质量约14 kD的重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析系统纯化获得了MCP的纯化重组蛋白rhMCP。结论获得了肝螺杆菌MCP的纯化重组蛋白,为进一步利用血清学方法调查我国人群肝螺杆菌感染率提供可能。

肝螺杆菌感染与原发性肝癌相关性的研究进展

原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)全球发病率高,早期诊断率低,死亡率高,部分肝癌患者的病因仍不十分明确,随着A/Jr小鼠感染肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,Hh)后致雄性小鼠肝癌发生率明显升高现象的发现,人们开始思考是否存在肝螺杆菌感染人群致人类肝癌的发生率升高,为肝癌的病因提供一个新的视野,本文简述了Hh生物特性、检测方法、与肝癌的相关性、及致病机制,研究表明肝螺杆菌可能在部分原发性肝癌中充当着十分重要的角色.

糖尿病患者不同HbA_1c控制水平的肺炎克雷伯杆菌肝脓肿的临床和超声特征

目的:比较糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者不同血糖控制水平下肺炎克雷伯杆菌肝脓肿(Klebsiella pneumoniae liver abscesses,KPLA)的临床和超声特征。方法:146例糖尿病肺炎克雷伯杆菌肝脓肿(diabetes mellitus of Klebsiella pneumoniae liver abscesses,KPLA-DM)患者根据糖化血红蛋白(HbA_1c)浓度分为3组(控制好,HbA_1c≤7%;控制良好,7%<HbA_1c≤9%;控制差,HbA_1c>9%)。分别比较3组的一般情况、临床特点、超声特征及并发症情况。结果:与血糖控制好和良好的患者相比,血糖控制差的患者发病年龄低、住院时间更长(均P<0.05);更易合并高脂血症、慢性肾功能不全等基础疾病;并发症及需积极抢救的临床危象多见,转移性感染多发(均P<0.05)。KPLA-DM可呈特征性的"片状、团块状增强回声"超声图像,血糖控制差的病人胆道系统积气、肝静脉血栓形成发生率较其他两组明显增高(均P<0.001)。结论:KPLA-DM超声图像具有特征性的"脓腔积气征"。超声观察到的胆道系统积气及肝静脉血栓形成与KPLADM患者血糖控制差相关,提示可能存在转移性感染等并发症。

糖尿病患者不同HbA1C控制水平肺炎克雷伯杆菌肝脓肿的临床和影像学表现

目的比较糖尿病(DM)患者不同血糖控制水平下肺炎克雷伯杆菌肝脓肿(KPLA)的临床和影像学表现。方法 146例糖尿病肺炎克雷伯杆菌肝脓肿(KPLA-DM)患者根据糖化血红蛋白浓度(HbA1C)分为控制好组(HbA1C≤7%)、控制较好组(7%<HbA1C≤9%)和控制差组(HbA1C>9%)3组。分别比较3组的一般情况、临床特点、影像学表现及并发症情况。结果与血糖控制好和良好的患者相比,血糖控制差的患者发病年龄低,住院时间更长,更易合并高脂血症、慢性肾功能不全等基础疾病,且并发症及需积极抢救的临床危象多见,转移性感染多发。影像学表现中,血糖控制差的病人胆管系统积气、肝静脉血栓性静脉炎、肝脓肿产气发生率增高。结论 KPLA-DM患者血糖控制差与肝静脉血栓性静脉炎、气体形成和转移性肝脓肿并发症有关。

螺杆菌感染与慢性肝病研究现状与进展

有关螺杆菌感染与肝病相关的研究逐渐增加,主要是研究螺杆菌对肝病的影响,而肝病对螺杆菌的作用研究甚少。介绍了肝病时螺杆菌的细菌学、流行率,螺杆菌引起肝病的发病机制和诊断。至目前为止现已得到共识与人类肝病相关的螺杆菌有3种,即H.pylori、H.heilmanni和H.cinaedi,其中主要是H.pylori的研究,对于后两者研究不多,而肝螺杆菌属于H.pylori的1个新型。研究显示今后应主要在发病机制和预防上做更深入的研究。

肺炎克雷伯杆菌肝脓肿超声诊断及介入治疗价值分析

在引起细菌性肝脓肿的的病原体中，肺炎克雷伯杆菌的地位逐年上升，已引起广泛关注。我们总结肺炎克雷伯杆菌肝脓肿11例的声像学特点和治疗进展，以期为早期诊断和治疗提供依据。

肝螺杆菌与肠病进展

与人类感染有关的螺杆菌主要有6种,即幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)、毕氏螺杆菌(H.bizzozeronii)、同性恋螺杆菌(H.cinaedi)、犬螺杆菌(H.canis)、加拿大螺杆菌(H.Canadensis)、猫胃螺杆菌(H.felis).新近几年又不断有肝螺杆菌、胆汁螺杆菌的研究与临床报道,本文就肝螺杆菌细菌学、与肠病相关的发病机制和研究现状作一述评.

肝螺杆菌MCSTP的基因克隆及生物信息学分析

目的克隆肝螺杆菌(H.hepaticus)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCSTP)全基因,并应用生物信息学方法对其进行分析。方法以肝螺杆菌全基因组作为模板,设计肝螺杆菌MCSTPc1977特异性引物,利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pET22b(+),从而构建原核表达质粒pET22b+/MCSTP并测序鉴定。应用生物信息学方法分析MCSTP基因的序列同源性及其结构特征。结果克隆的MCSTP基因经测序可知与GenBank公布的肝螺杆菌标准株ATCC51449序列一致性达99%,仅第1160bp处由A变为T。利用生物信息学方法进行分析可发现此基因与空肠弯曲杆菌、幽门螺杆菌具有非常低的相似性,表明其在微生物界中具有一定的特异性。结论成功构建pET22b+/MCSTP重组质粒,并通过生物信息学技术进行序列及结构分析,为进一步研究其生物学功能及致病机制提供了线索和依据。

肝螺杆菌感染对BALB/c小鼠免疫应答干扰的初步研究

目的探讨肝螺杆菌（Helicobacter hepaticus,H.hepaticus）感染对小鼠骨髓源树突状细胞（DC）表面分子形态和机体免疫应答的干扰。方法以H.hepaticus（ATCC 51450）灌饲SPF级BALB/c雄性小鼠,于末次接种后5个月体外分离培养骨髓DC,经粒细胞-单核细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素-4（IL-4）,刺激DC增殖、分化,流式细胞仪分析DC细胞表面分子CD11c、CD40、CD80、MHCII的表达率。此基础上,用新城疫病毒（NDV）ZJ1株人工接种实验组和对照组小鼠,每周测定NDV血清抗体效价,比较抗体产生的差异。结果实验组MHC II和CD40分子的表达率高于对照组。NDV抗体水平第1周实验组略低于对照组;第2~5周内实验组小鼠的抗体水平均高于对照组,差异有显著性;第6周两组小鼠血清抗体均呈下降趋势,差异无显著性。结论 H.hepaticus感染对小鼠骨髓DC成熟有促进作用,能提高MHC II和CD40表达水平,可促进BALB/c小鼠产生抗NDV的抗体水平。

肝螺杆菌诱导不同品系小鼠慢性肝损伤与Th1/Th2细胞功能变化的分析

目的观察不同品系小鼠感染H.hepaticu后的肝脏病理损伤与Th1/Th2细胞功能的变化的关系。方法SPF级雄性BABL/c Cr、SCID/Cr、C57BL/6Cr小鼠接种H.hepaticus标准菌株ATCC51450菌液0.2 ml(1×108 CUF/ml),连续3次,每次间隔48h,对照组灌饲等量的PBS。于末次接种H.hepaticus后第16周处死小鼠,留取血清和肝脏,一份肝组织行病理组织学检查,另一份肝组织及血清应用ELISA方法检测细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-5含量。结果 H.hepaticus感染后16周时BALB/c Cr小鼠血清、肝脏组织中IFN-γ、TNF-α含量明显高于对照组(P<0.001);BALB/c Cr小鼠血清、肝脏组织中IFN-γ、TNF-α含量明显高于SCID/Cr、C57BL/6Cr小鼠(P<0.001);而SCID/Cr小鼠、C57BL/6Cr小鼠血清、肝脏组织中IFN-γ、TNF-α含量与对照组相比无显著性差异(P>0.05);H.hepaticus感染后的各品系小鼠血清、肝脏组织中IL-4及IL-5含量与对照组相比,无显著性差异(P>0.05);H.hepaticus感染后BALB/c Cr小鼠血清及肝脏组织中IFN-γ、TNF-α含量随着肝脏病理评分的增高而增加(P<0.05;P<0.01)。结论 H.hepaticus感染BALB/c Cr小鼠后诱导慢性肝损伤的程度与Th1细胞因子IFN-γ、TNF-α的水平呈正相关;具有免疫活性小鼠H.hepaticus感染后宿主免疫反应是以Th1细胞为主的免疫反应。

肝螺杆菌与幽门螺杆菌的功能基因组比较分析

肝螺杆菌(Hh)是迄今为止发现与肝脏疾病相关的5种螺杆菌之一。Hh株ATCC51449的全基因组测序已经完成。研究发现Hh有和幽门螺杆菌(Hp)一样的尿素酶、鞭毛蛋白和黏附素同源基因,而编码趋化蛋白及细胞致死性肿胀毒素(CDT)的特性则与空肠弯曲菌类似。Hh缺乏大多数与Hp同源的定植和毒力因子如cag致病岛。此外Hh还有一个与霍乱弧菌相似的致病岛HHGI1。上述基因特点导致该菌肠道定植的适应性与致病潜能。

肝螺杆菌感染与肝脏疾病

自1982年发现H.Pylori以来,迄今已发现至少20余种正式命名的螺杆菌,肝螺杆菌[1](helicobacter hepaticus,Hh)是被证实对某些动物肝脏有致病性的细菌,它可以引起某些品系的小鼠发生慢性活动性肝炎,并能导致敏感小鼠的肝癌.本文就Hh与肝脏疾病相关性的研究概况作一介绍.

新发现的螺杆菌——肝螺杆菌

肝螺杆菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｈｅｐａｔｉｃｕｓ，Ｈｈ）是近年来被发现的螺杆菌属中又一新菌种。已有的研究表明，Ｈｈ可能是继幽门螺杆菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）之后发现的又一重要的致病菌，Ｈｈ与肝脏和肠道炎症特别是肿瘤关系密切。...