神经甾体及神经递质与肝气逆证和肝气郁证经前期综合征发病的相关性

目的检测肝气逆证及肝气郁证经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)的神经-生殖激素,探讨PMS的病因病机和愤怒、郁怒与肝气逆证、肝气郁证PMS发病的相关性,为临床制定规范的PMS证类诊断标准提供理论依据。方法采用HPLC、HPLC-MC、ELISA、放射免疫等技术手段,检测肝气逆证(30例)及肝气郁证(30例)PMS患者卵泡期及黄体期的血清性激素(促卵泡激素、促黄体激素、雌二醇、孕酮、睾酮、催乳素)、血浆神经递质(γ-氨基丁酸、β-内啡肽、谷氨酸、多巴胺、5-羟色胺、肾上腺素、去甲肾上腺素)、神经甾体(别孕烯醇酮、孕烯醇酮、脱氢表雄酮)水平,并与健康对照组(30名)作比较。结果卵泡期所有检测指标各组比较差异无统计学意义。黄体期PMS肝气逆证组与健康对照组比较睾酮有增高趋势(P>0.05);肝气逆证组多巴胺、5-羟色胺高于健康对照组(P<0.05),γ-氨基丁酸低于健康对照组(P<0.05);肝气逆证组及肝气郁证组肾上腺素、去甲肾上腺素高于健康对照组(P<0.05)。肝气逆证组及肝气郁证组孕烯醇酮与别孕烯醇酮低于健康对照组,脱氢表雄酮高于健康对照组(P<0.05);肝气逆证组及肝气郁证组脱氢表雄酮/别孕烯醇酮和脱氢表雄酮/孕烯醇酮2个比值均高于健康对照组,且肝气逆证组高于肝气郁证组(P<0.05)。结论黄体期孕烯醇酮与别孕烯醇酮的降低、脱氢表雄酮的增高、脱氢表雄酮/别孕烯醇酮和脱氢表雄酮/孕烯醇酮比值升高可能是肝气逆证及肝气郁证PMS患者愤怒和郁怒的生物学因素之一。

肝气郁证模型大鼠下丘脑单胺类神经递质分析

目的探讨肝气郁证模型大鼠发病的微观机制。方法捆绑法造模制作肝气郁证模型大鼠,采用反相离子高效液相色谱(RP-IP-HPLC)测定大鼠造模后下丘脑中去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)及5-羟色胺(5-HT)4种神经递质含量变化。结果肝气郁证模型大鼠下丘脑中E、DA、5-HT水平显著升高(P<0.05或P<0.01),NE水平显著降低(P<0.01),且用药后均得到明显改善。结论肝气郁证与下丘脑中NE、E、DA、5-HT关系密切。

经前期综合征肝气郁证大鼠海马雌激素受体α和β研究

目的研究经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证大鼠海马雌激素受体(estrogenreceptor,ER)α和β分布模式、蛋白表达和功能活性的改变情况以及调肝方药经前舒颗粒的相应作用靶点,为深入探索PMS肝气郁证病机和经前舒颗粒的作用机制提供线索。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组和给药组,每组7只。模型组和给药组采用居住入侵法进行造模。给药组大鼠造模同时给予经前舒颗粒10 mL/kg灌胃;模型组和正常组大鼠给予同等体积灭菌水灌胃,均每天1次,连续5天。运用免疫组织化学法、Western blot和葡聚糖-活性炭单点测定法分别检测各组大鼠海马中ERα和ERβ定位、蛋白水平及与雌激素的结合活性。结果各组大鼠海马中ERα和ERβ分布无明显差异;海马整体及CA1、CA3区内ERα和ERβ蛋白水平以及与雌激素结合活性方面,模型组较正常组均明显升高(P<0.05),给药组较模型组则明显下降(P<0.05)。结论海马高雌激素水平及ERα、ERβ表达和活性增强可能是PMS肝气郁证的重要病机和经前舒颗粒的作用靶点。

白芍提取物对经前期综合征肝气郁证模型大鼠额叶5-HT_(3A/3B)R分布与蛋白表达的影响

目的:本研究就5-羟色胺3受体(5-HT3R)水平探讨白芍提取物(Radix Paeoniae Alba Extract,RPAE)干预经前期综合征(Premenstrual Syndrome,PMS)肝气郁证抑郁情绪的分子作用机制。方法:复制PMS肝气郁证大鼠模型,用白芍提取物进行药物干预,采用免疫荧光技术和蛋白印迹技术(western blot)分别检测5-HT3AR和5-HT_(3B)R在大鼠脑内的分布和蛋白表达情况。结果 :5-HT_(3A)R和5-HT_(3B)R在各组大鼠额叶均有阳性表达;与正常组大鼠相比,模型组大鼠额叶5-HT3AR、5-HT_(3B)R蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组大鼠相比,白芍提取物组大鼠额叶5-HT_(3A)R蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。结论:白芍提取物能够调控PMS抑郁症大鼠额叶5-HT_(3A) R和5-HT_(3B)R蛋白表达,这可能是其干预PMS肝气郁证抑郁情绪的作用机制之一。

舒郁胶囊及主要组份对PMS肝气郁证大鼠海马中CACNA1C蛋白表达和功能的影响

CACNA1C 基因编码L 型钙通道α1C 亚基,其基因多态性与多种情感障碍类疾病如精神分裂症和重度抑郁等发生有关。经前期综合征（premenstrual syndrome,PMS）发生的易感神经生物学因子与重度抑郁症相似,该基因与PMS 的关系如何？尚未见报道。因此,本研究从PMS 肝气郁证入手,以舒郁胶囊及主要组份进行药物干预,采用Western blot 和全细胞膜片钳技术,探索CACNA1C 与PMS 肝气郁证的关系和舒郁胶囊的干预机制。

白芍提取物对PMS肝气郁证大鼠下丘脑Cav1.2介导的CaM/CaMK Ⅱ/BDNF信号通路的影响

目的:本文主要探讨白芍提取物对PMS肝气郁证大鼠下丘脑Cav1.2钙通道关键蛋白CACNA1C及其下游信号通路中CaM、BDNF蛋白表达和对CaMKⅡ磷酸化的影响,从而明确白芍提取物治疗肝气郁结证的分子作用靶点。方法:利用慢性束缚应激法制备PMS肝气郁证大鼠模型,使用白芍提取物进行药物干预。模型制备成功后检测下丘脑CACNA1C蛋白表达,以及下游信号通路中CaM、BDNF蛋白表达和CaMKⅡ的磷酸化水平。离体培养海马原代神经元,通过KCl激活L型钙通道,检测白芍提取物中的有效成分单体芍药苷对细胞内钙超载的影响。结果:PMS肝气郁证大鼠下丘脑CACNA1C蛋白表达增加,CaMKⅡ磷酸化水平提高,BDNF表达减少,说明白芍提取物可显著改善上述蛋白表达异常的现象,抑制KCl激活的L型钙通道引起的细胞内钙离子浓度的增加。结论:白芍提取物可能是通过调控细胞内Cav1.2,抑制其下游CaM/CaMKⅡ信号通路的活化发挥治疗PMS肝气郁证的作用。

舒郁胶囊对PMS肝气郁证模型大鼠海马μ阿片受体分布表达的影响

目的:探讨经前期综合征(PMS)肝气郁证模型大鼠海马脑区μ阿片受体(MOR)分布形态、蛋白水平表达,初步揭示PMS肝气郁证的发生机理及舒郁胶囊对该病证的干预作用。方法:采用慢性束缚应激法复制PMS肝气郁证模型大鼠,分别予以调肝方药舒郁胶囊进行干预。采用免疫荧光标记(IF)和蛋白免疫印迹(WB)技术对各组大鼠海马CA1、CA3脑区MOR进行检测。结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠海马脑区MOR分布排列杂乱且蛋白含量增多(P<0.01),给予药物干预后,MOR蛋白含量基本恢复至正常水平。结论:PMS肝气郁证的发病机理可能与大鼠海马中CA1、CA3区MOR高表达有关;舒郁胶囊可以有效纠正其恢复近正常水平,这可能是舒郁胶囊治疗PMS肝气郁证的中枢机制之一。

慢性束缚应激及居住入侵法制备经前期综合征肝气郁证大鼠模型的行为学观测与分析

目的:通过与慢性束缚应激造模法比较,探讨居住入侵法制备经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠模型的可行性。方法:以慢性束缚应激造模法为对照,将国外应用较为成熟的居住入侵法用于制备PMS肝气郁证大鼠造模,并用旷场实验、悬尾实验等行为学方法系统评价造模效果,比较两种造模方法的优劣。结果:两种方法制备的PMS肝气郁证模型大鼠旷场实验水平得分、垂直得分及总分均无显著性差异(P>0.05)。结论:采用居住入侵法制备PMS肝气郁证大鼠模型能有效模拟人类由于情质异常引发的经前抑郁及经后抑郁症状消失状态,且克服了慢性束缚应激法躯体刺激明显的缺点,但其造模成功率低,模型稳定性方面也有待进一步考察。

应用BOLD-fMRI技术对经前期综合征肝气郁证患者激活脑区定位分析

目的:采用BOLD-功能磁共振成像技术对PMS肝气郁证患者激活脑区进行定位。方法:筛选纳入符合标准的患者作为病例组23例,对照组22例,采用BOLD-功能磁共振成像技术对受试者成像扫描。在功能磁共振扫描过程中,两组受试者均观看图片诱发抑郁情绪。结果:静息态:病例组与对照组相比,激活增强的脑区:Sub-lobar,Extra-Nuclear,额叶18个脑区,枕叶左侧距状裂周围皮层,岛叶2个脑区,边缘叶,叶下11个脑区和左内侧和旁扣带脑回等脑区。任务态:病例组比对照组激活增强的脑区:枕叶4个脑区,颞叶13个脑区,病例组比对照组激活减弱的脑区:顶叶2个脑区,额叶5个脑区,带回2个脑区。结论:(1)PMS肝气郁证患者静息态符合大脑默认模式网络及情绪加工。(2)PMS肝气郁证发病的中枢机制为:枕叶、颞叶激活增强与顶叶、额叶、扣带回脑区激活减弱。

应用fMRI技术探查静息态经前期综合征肝气郁证患者中枢脑区定位

目的:探寻与经前期综合征肝气郁证发病密切相关的脑区。方法:采用BOLD-功能磁共振成像技术,影像学数据基于matlab平台的SPM 8软件以及rest软件进行图片处理,每个簇块体积阈值(Cluster)大于389个连续体素,单体素阈值P<0.05(校正后)的脑区定义为差异有统计学意义的区域,病例组和对照组采用双样本t检验。结果:PMS肝气郁证患者与正常对照相比,额叶、枕叶、岛叶、边缘叶、基底核、扣带回等脑区激活增强。结论:PMS肝气郁证患者发病与额叶、枕叶、岛叶、边缘叶、基底核、扣带回等脑区有关。

经前期综合征肝气郁证猕猴模型血清性激素检测分析

目的检测经前期综合征(PMS)肝气郁证猕猴模型血清激素水平的变化,探讨PMS肝气郁证微观机制。方法拟定复制猕猴肝气郁证模型的造模方法进行实验,采用放射免疫法,检测正常对照组与模型组猕猴在其月经期、卵泡期、黄体期和经前期性激素(孕酮、泌乳素、雌二醇)水平的变化。结果肝气郁证组猕猴血清中孕酮含量在经前期明显下降;泌乳素含量水平在经前期和月经期明显升高,在黄体期有下降趋势;雌二醇含量在黄体期显著升高,月经期显著降低。结论肝气郁证猕猴模型性激素水平的变化在一定程度上说明孕酮、泌乳素和雌二醇水平变化可能是经前期综合征肝气郁证的微观发病机制之一。

抑郁症肝气郁证患者眼动研究探索

抑郁症已成为一个严重的社会和医疗问题,中医认为其与肝主疏泄调畅情志功能失常密切相关,但尚存在肝主疏泄调畅情志内涵不清和缺乏客观评测方法的难题。抑郁症眼动研究可以为上述问题的解决提供新思路和新途径。进行抑郁眼动识别研究以及进行识别出的抑郁眼动的内在机制研究,对抑郁症的客观评测和肝主疏泄调畅情志理论内涵的揭示都具有重要的科学意义。

经前烦躁症肝气郁证发病机制初探

通过对近几年经前烦躁症(PMDD)肝气郁证发病机制的初步探究发现,PMDD肝气郁证关键发病机制在于雌、孕激素分泌异常及其受体(ERα和ERβ)表达异常升高,单胺类神经递质5-HT、DA、E含量升高,NE含量降低,γ-氨基丁酸(GABA)及其受体水平调节紊乱。PMDD肝气郁证与心理和社会影响因素、微量元素缺陷以及其他方面因素关系密切。

经前期综合征肝气逆、肝气郁证动物模型改进及肝失疏泄微观机制研究

目的:改进经前期综合征肝气逆、肝气郁两证大鼠、猕猴模型造模及其评价方法,为揭示肝疏泄失常现代机制提供实验资料与现代科学解释。方法:应用昼夜颠倒配合旷场法筛选行为学得分相近大鼠进入实验,调整造模刺激强度及持续时间,采用昼夜颠倒配合旷场法对模型大鼠宏观表现予以量化评价;运用30 min成组随意观测及猕猴社会层级模式判别标准化方案规范猕猴实验方法并叠加社会应激因素,按照量表制作规范流程并运用视觉可视化标尺技术改进《雌性实验猕猴情绪评价量表》,进行猕猴模型宏观表现量化评价。结果:旷场实验中,与正常对照组大鼠比较,造模后逆模组水平得分、垂直得分及旷场实验总分均显著增加(P<0.05),而郁模组大鼠则显著减少(P<0.05),用药后这一情况得到明显纠正(P<0.05)。修订后量表主要考核指标较前大幅改善,相关系数均≥0.75。结论:分析动物模型整体表现与相应微观指标变化,两者密切相关,部分揭示了中医"肝疏泄失常"的微观机制:肝疏泄太过所致烦躁易怒等表现可能与下丘脑、边缘叶NE、DA、5-HT水平上升密切相关;肝气疏泄不及呈现抑郁萎靡等症状可能与下丘脑、边缘叶DA水平下降,5-HT水平上升有密切关系。据此推测,肝主疏泄可能通过调节机体该类活性物质含量而呈现作用;其功能定位为脑中枢,尤其是下丘脑。

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证模型大鼠海马单胺氧化酶A、B表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠海马单胺氧化酶A/B(MAOA/B)表达水平的影响。方法:雌性未孕SD大鼠48只,随机分为3组:正常对照组、模型组、经前舒治疗组,束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验对模型进行评价,治疗组采用经前舒颗粒治疗,RT-PCR和Western blot方法分别检测各组大鼠海马MAOA/B的mRNA及蛋白的表达。结果:模型大鼠海马MAOA mRNA及蛋白表达显著升高,经前舒颗粒治疗后,MAOA mRNA和蛋白表达均显著降低,而MAOB mRNA和蛋白表达各组间没有显著性变化。结论:PMS肝气郁证大鼠海马MAOA表达出现异常,经前舒颗粒的作用机制可能是通过调节海马MAOA的表达而发挥作用。

5-HTR1A基因在经前期综合征肝气郁证模型大鼠下丘脑区的表达

目的通过研究5-羟色胺受体1A（5．HTRlA）基因在经前期综合征（PMs）肝气郁证模型大鼠下丘脑区的表达，探讨该证的发病机制及药物作用靶点。方法束缚法制备PMS肝气郁证模型大鼠，经前舒颗粒干预，获得正常组、造模组、给药组；运用RT—PCR和WesternBlotting方法检测大鼠下丘脑区5-HTRlAmRNA及其蛋白表达；应用软件SPSS16．0，通过单因素方差分析及LSD法统计数据。结果PMS肝气郁证模型组大鼠与正常组相比，下丘脑5-HTRlAmRNA及蛋白表达均显著降低；经前舒颗粒给药后与造模组相比，表达均显著升高；给药组与正常组相比，表达均无显著差异。结论肝气郁证模型大鼠与正常大鼠相比，下丘脑5-HTRIA基因表达下降，通过经前舒颗粒干预后，恢复正常；说明5-HTRIA基因可能与PMS肝气郁证相关，并且可以作为经前舒颗粒治疗该证的作用靶点。

舒郁胶囊对经前期综合征肝气郁证模型大鼠不同脑区μ-阿片受体基因分布与表达的影响

目的分析大鼠额叶、海马、下丘脑和杏仁核脑区μ-阿片受体(MOR)基因的分布与表达变化,探讨舒郁胶囊的中枢作用机制。方法复制经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠模型并用舒郁胶囊和纳洛酮进行药物干预,利用原位杂交技术和实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术分别对大鼠不同脑区MOR基因进行定性和定量检测。结果与正常组大鼠比较,PMS肝气郁证模型组大鼠海马、额叶、下丘脑、杏仁核组织MOR基因过量表达,差异有统计学意义(P<0.05);与PMS肝气郁证模型组大鼠比较,纳洛酮组额叶组织MOR基因表达无改变,差异无统计学意义(P>0.05),舒郁胶囊及纳洛酮药物干预组其他各相应脑区MOR基因表达均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论海马、额叶、下丘脑和杏仁核MOR基因表达异常升高可能是PMS肝气郁证的中枢发病机制之一,舒郁胶囊可通过拮抗该受体基因表达而具有抗抑郁样作用。

柴胡提取物对PMS肝气郁证模型大鼠额叶5-HT_(3A/3B)R分布与蛋白表达的影响

经前期综合征肝气郁证（premenstru alsyndrome,PMS）症状表现类似于现代医学中的抑郁样情绪改变,前期研究证明PMS肝气郁证的发生与脑内5-HT系统及其受体密切相关[1],柴胡提取物通过不同分子机制干预PMS肝气郁证的抑郁情绪[2-3].但是柴胡提取物在5-HT3R水平对PMS肝气郁证经前抑郁情绪的干预机制尚未见报道,因此,本实验选取PMS肝气郁证为动物模型初步探讨柴胡提取物调控抑郁情绪的微观作用机制.

经前期综合征肝气郁证大鼠模型血清激素与行为变化

目的:复制经前期综合征肝气郁证大鼠模型并经过经前舒颗粒干预,探讨大鼠致郁机理及经前舒颗粒治疗该病证的作用机制。方法:采用束缚法造模并用经前舒颗粒干预,采用矿场法考察行为变化,用放射免疫法检测大鼠血清E2、FSH、LH、ACTH、COR、Ald的变化。结果:与空白组比较,造模组大鼠行为学打分显著降低,血清ACTH、COR含量显著上升,E2、Ald显著下降,造模给药组相关指标得到明显逆转和改善。结论:束缚法通过大鼠应激反应干扰大鼠激素调节形成一系列精神情志改变和内分泌紊乱,经前舒颗粒能够改善模型大鼠的症状,对内分泌激素有明显调节作用。

雌激素及其受体与经前期综合征肝气郁证相关性研究进展

经前期综合征（PMS）是影响女性健康的常见疾病，主要涉及女性的躯体、精神、行为3个方面，其临床表现主要有经期情绪低落、兴趣降低、烦躁不安，头痛、乳房胀痛，易疲劳等。因其严重影响妇女的正常工作、生活与学习（严重影响者约为5％），越来越受到人们的关注怛。。国内外大量研究表明，PMS临床症状和病因病机复杂。