法尼醇X受体影响胆道闭锁肝纤维化机制的研究进展

胆道闭锁是一种罕见的导致新生儿及婴儿胆汁淤积的先天性胆道系统疾病,以肝内外胆管进行性炎症以及肝纤维化为特征,导致胆汁在胆道内大量淤积,并最终引起肝硬化。如不及时治疗,胆道闭锁患儿往往于出生后2年内死于终末期肝病[1-2]。胆道闭锁早期诊断困难的特性与其高病死率一直是困扰小儿外科医师的难题。

激活类法尼醇X核内受体(FXR)可下调载脂蛋白M在HepG2细胞中的表达

类法尼醇X核内受体(farnesoid Xreceptor,FXR)和载脂蛋白M(ApoM)在动脉粥样硬化中发挥重要作用.为研究FXR激动剂鹅脱氧胆酸(chenodexycholic acid,CDCA)和拮抗剂Guggulsterones在人肝癌细胞株HepG2和人胎肝细胞株L02中对载脂蛋白M(apolipoprotein M,ApoM)表达的影响.本研究应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测CDCA和CDCA加Guggulsterones处理后HepG2和L02细胞中ApoM的mRNA水平和HepG2细胞中ApoM的蛋白水平.实验结果显示:FXR天然配体CDCA以剂量依赖的方式显著降低HepG2细胞中ApoM分子(mRNA和蛋白水平)的表达,L02细胞中ApoM分子mRNA水平的表达;FXR抑制剂Guggulsterones不仅能明显阻止CDCA对ApoM表达的下调,而且可引起ApoM表达显著增加.本研究提示,FXR抑制剂Guggulsterones在抗动脉粥样硬化过程中可能发挥重要作用.

胆酸对大鼠肝部分切除术后肝细胞脂质代谢及法尼醇X受体表达的影响

目的探讨胆酸对肝细胞脂质代谢、法尼醇X受体(FXR)及肝再生的影响。方法建立部分肝切除大鼠模型,随机分成3组:G1组(正常喂养),G2组(给予0.2%胆酸喂养),G3组(正常饮食中加入50%葡萄糖),每组10只,喂养后7 d切除大鼠70%肝组织,于术后72 h取出肝组织及血液标本,检测相关指标。RT-PCR和Western印迹检测SHP、CYP7A1、BSEP的表达;试剂盒检测肝细胞中甘油三酯、胆固醇的水平。结果与G1相比,G2组小异二聚体伴侣(SHP)、胆盐输出泵(BSEP)表达显著升高(P<0.05),胆固醇7α-羟化醇(CYP7A1)表达显著降低(P<0.05);G3组SHP、BSEP表达略增高(P<0.05),CYP7A1显著升高(P<0.05)。G2组甘油三酯(TG)水平显著降低,胆固醇(TC)含量显著升高,而G3组TG略升高,TC含量降低(均P<0.05)。结论胆酸可促进肝细胞再生,FXR在调控肝细胞代谢中发挥重要作用。

以法尼醇X受体为作用靶点的何首乌中肝毒性成分的筛选

目的 建立以法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)为作用靶点的何首乌中肝毒性成分快速筛选方法。方法首先运用计算机分子对接技术,使用Discovery Studio 2.5软件将目标化合物与FXR进行分子对接,以FXR抑制剂作为参考对象对目标化合物进行虚拟筛选;之后,采用细胞计数试剂盒法(cell counting kit-8,CCK-8)考察目标化合物处理24 h后对人源肝永生化肝细胞HepaRG的毒性强弱,并采用实时聚合酶链反应(PCR)技术测定目标化合物对HepaRG细胞的FXR基因相对表达量的影响。结果 分子对接结果显示,何首乌中芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷及大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷等9个成分为FXR潜在抑制剂;体外细胞毒性试验进一步证实芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷及大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷均具肝细胞毒性作用,同时可明显抑制FXR基因表达水平。结论 以FXR分子对接技术为切入点,有效预测何首乌中潜在肝毒性成分,实现了快速高效的高通量筛选,为中药安全性评价提供新思路。

法尼醇X受体(FXR)在药源性胆汁淤积型肝损伤中的作用

药源性胆汁淤积型肝损伤是药物引起体内胆汁酸紊乱所致,尽管对药源性胆汁淤积型肝损伤的研究越来越多,但机制仍不清楚。法尼醇X受体(Farnesoid X receptor,FXR)是胆汁酸稳态的主要调节剂,目前文献报道抑制FXR是药物诱导胆汁淤积型肝损伤的主要原因且激活FXR已成为其治疗的靶点。本文就FXR在药源性胆汁淤积肝损伤中的作用进行综述,为其机制的深入研究提供思路。

水蛭对肝内胆汁淤积大鼠模型法尼醇X受体通路的调节作用

目的研究水蛭对肝内胆汁淤积大鼠模型法尼醇X受体(FXR)通路的调节作用。方法选取40只8周龄SPF级雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组、水蛭高剂量组、水蛭低剂量组,每组8只。UDCA组按60 mg/kg的剂量灌胃UDCA溶液,水蛭高、低剂量组分别按50 mg/kg和20 mg/kg剂量灌胃水蛭颗粒剂,1次/d,连续7 d,正常组和模型组予以等量生理盐水。除正常组外,其他各组大鼠于灌胃第5天予以100 mg/kgα-异硫氰酸萘酯(ANIT)灌胃造模,灌胃3 d,1次/d,正常组予以等量生理盐水。末次给药24 h后腹主动脉取血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、总胆汁酸(TBA)水平;取肝脏组织进行HE染色镜检,观察大鼠肝脏组织病理情况;采用实时荧光定量PCR与Western blot检测FXR及下游小异源二聚体伴侣受体(SHP)、尿苷二磷酸葡萄糖苷酸转移2B4(UGT2B4)、胆盐输出泵(BSEP)mRNA及蛋白表达。结果水蛭高剂量组血清ALT、AST、TBil水平低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05);水蛭高剂量组与模型组TBA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);水蛭低剂量组血清AST、TBA、TBil水平低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05),水蛭低剂量组与模型组ALT水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);UDCA组血清AST的水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),UDCA组与模型组ALT、TBA、TBil水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,水蛭高、低剂量组大鼠肝脏组织损伤减轻。水蛭高、低剂量组及UDCA组FXR、BSEP、UGT2B4、SHP mRNA表达高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。水蛭高、低剂量组FXR、BSEP、UGT2B4、SHP蛋白表达高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05),UDCA组与模型组蛋白水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论水蛭可以缓解ANIT诱导的肝内胆汁淤积,减轻肝脏组织损伤。水蛭可通过对FXR基因表达上调,促进SHP、UGT2B4、BSEP基因表达上调,抑制胆汁淤积通路来保护肝细胞,为临床治疗肝内胆汁淤积提供有效药物。

法尼醇X受体及其激动剂与肝脏疾病

法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)又名胆汁酸受体,是一种配体激活转录因子。FXR激动剂作用于FXR后,激活一系列复杂的下游通路,其代谢产物参与调节胆汁酸、糖类、脂质的稳态,进而在肝脏组织炎症、纤维化、再生及癌变过程中起到重要的调节作用,影响肝脏代谢性疾病的发生发展。寻找治疗靶点更精确且高效低毒的FXR激动剂,治疗肝脏代谢性疾病是当前的研究热点。本文将主要围绕FXR对代谢的调节及其与肝脏疾病的关系及其激动剂的研究进展进行讨论。

沙棘熊果酸对酒精性肝损伤大鼠肝FXR信号通路的影响

目的:初步探讨沙棘熊果酸对酒精性肝损伤大鼠肝法尼醇X受体(Farnesoid X receptor,FXR)信号通路关键蛋白表达的影响。方法:6周龄SPF级SD大鼠随机分为4组,每组9只,分别为正常对照组、酒精模型组、熊果酸对照组和熊果酸+酒精组,干预时间为8周。采用苏木精-伊红(H&E)染色法观察大鼠肝组织病理学变化;测定大鼠血清中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartateaminotransferase,AST)活力和血清总胆汁酸(Total bile acid,TBA)、肝脏甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)含量;酶联免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清细胞因子肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素10(Interleukin 10,IL-10)含量;免疫印迹法(Western blotting)测定大鼠肝FXR信号通路相关蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,酒精模型组大鼠肝脏存在大小不一的脂肪空泡和大量炎性细胞浸润;血清ALT、AST活力,TNF-ɑ、IL-1β水平,TBA含量和肝脏TG、TC含量均显著升高(P<0.05)、IL-10水平显著下降(P<0.05)。经熊果酸干预后,肝脏脂肪变性得到明显改善,炎性细胞浸润减少;血清ALT、AST活力,TNF-α、IL-1β水平,TBA含量和肝脏TG含量均有不同程度的显著下降(P<0.05),IL-10水平显著提高(P<0.05)。Western blotting结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏FXR蛋白表达显著降低(P<0.05),CYP7A1和SREBP-1c蛋白表达均显著升高(P<0.05);而经熊果酸干预后,FXR蛋白表达明显提高,CYP7A1及SREBP-1c蛋白表达明显下调,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:沙棘熊果酸能够明显改善酒精诱导的肝脏损伤,其作用机制可能与上调肝FXR、抑制CYP7A1和SREBP-1c的蛋白表达,从而维胆汁酸稳态、调节脂质代谢有关。

核受体FXR在肝再生中的作用

肝再生实际上是肝脏在组织发生缺损后进行损伤修复的代偿性增生过程,其机制非常复杂,多种细胞因子、核受体和信号通路参与其中.法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)是需配体激活的转录因子,属于代谢性核受体,在肝脏胆汁酸、脂质、糖代谢过程中起着重要的调节作用.近来研究发现,核受体FXR对肝脏再生至关重要.FXR的激活通过促进部分肝切除后肝细胞的增殖,直接促进肝脏再生;通过调节胆汁酸的合成与转运,避免切除后胆汁酸过多引起的肝组织损伤;其代谢调节作用有益于肝再生进程.本文着重对FXR调控肝再生的机制及促肝再生药物靶向治疗做一综述.

新疆维吾尔族、汉族妊娠期肝内胆汁瘀积症患者FXR受体表达的相关研究

目的分析维吾尔族、汉族妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇及正常妊娠孕妇胎盘中FXR受体的表达,及母血与胎儿脐血胆汁酸水平对妊娠结局的影响,探讨FXR在ICP发病机制中的作用。方法选择2013年1月-2014年1月我院分娩的60例汉族单胎ICP患者及60例维吾尔族ICP孕妇作为研究组,同时选取同期我院分娩的60例单胎正常妊娠孕妇(30例汉族、30例维吾尔族)作为对照组,检测所有孕妇外周血及胎儿脐血胆汁酸水平,观察比较四组孕妇的围生期结局。结果汉族、维族ICP孕妇母血及胎儿脐血胆汁酸水平较对照组均升高(P<0.05),汉族与维族ICP孕妇、对照组之间母血及脐血胆汁酸水平无差异(P>0.05);汉族、维族ICP孕妇Manning评分、早产、分娩时发生羊水污染及新生儿窒息率明显高于对照组(P<0.05),汉族与维族ICP孕妇间、对照组见均无差异,四组孕妇发生围产儿死亡、测定胎儿脐血流S/D值无差异(P>0.05)。汉族、维族ICP孕妇胎盘FXR m RNA的表达量明显高于对照组(P<0.05),汉族与维族ICP孕妇间、对照组间无差异(P>0.05);汉族、维族ICP孕妇胎盘FXR mRNA相对表达量与母血、脐血胆汁酸水平均成正相关,而对照组无相关性。结论检测孕妇外周血及胎儿脐血胆汁酸有助于判断ICP的严重程度,评估妊娠结局;ICP时胎盘FXR的表达异常可能是发病机制之一。

肝细胞FXR对日本血吸虫感染小鼠肠道菌群的影响

目的分析肝细胞法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)特异性敲除对日本血吸虫感染小鼠肠道菌群的影响。方法6~8周龄野生型雄性C57BL/6J和肝细胞FXR特异性敲除小鼠(FXR-HKO)随机分为4组:野生型小鼠正常对照组(WT,n=5)、FXR-HKO小鼠正常对照组(FXR-HKO,n=6)、野生型小鼠日本血吸虫感染组(Sj-WT,n=6)、FXR-HKO小鼠日本血吸虫感染组(Sj-FXR-HKO,n=5)。其中,感染组每只小鼠感染(15±1)条日本血吸虫尾蚴,感染第5周处死小鼠,在无菌条件下收取小鼠结肠内容物,进行16S rDNA测序,比较各组之间的肠道菌群多样性和丰度差异。结果Beta多样性分析结果显示,Sj-WT组和Sj-FXR-HKO组小鼠的肠道菌群与正常小鼠肠道菌群有明显的分群。在门水平上,与正常对照组相比,Sj-WT组和Sj-FXR-HKO组小鼠肠道中拟杆菌门的丰度升高,厚壁菌门丰度降低,厚壁菌门与拟杆菌门丰度比值明显降低(均P<0.05)。在属水平上,与正常对照组相比,日本血吸虫感染后小鼠肠道中拟杆菌属的丰度明显升高(均P<0.05),Sj-FXR-HKO组拟杆菌属的丰度比Sj-WT组的升高更明显(P<0.05),其中Sj-WT组脱硫弧菌属、杜氏菌属、乳杆菌属的丰度显著降低(均P<0.05),Sj-FXR-HKO组瘤胃球菌科属、毛罗菌科、杜氏菌属、乳杆菌属的丰度明显降低(均P<0.05)。结论肝细胞FXR特异性敲除影响了日本血吸虫感染小鼠肠道菌群稳态,为后续进一步研究FXR-肠道菌群在血吸虫病中的作用及机制奠定了扎实的实验基础。

核受体FXR在肝星状细胞及肝纤维化中的作用

法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)是核受体超家族的重要成员,以作为胆汁酸受体被大家所熟知。除了调节胆汁酸的合成和转运,FXR在调控葡萄糖代谢、甘油三酯代谢、炎症、凝血等方面也发挥重要作用。肝纤维化是慢性肝脏疾病发展成肝硬化的共同途径,终末期肝纤维化将导致肝硬化、肝衰竭,甚至危及生命。肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化是导致肝纤维化的重要原因。越来越多的证据表明FXR的内生性功能在生理和病理条件下调控HSCs的功能并影响肝纤维化,因此FXR可能成为治疗肝纤维化的重要靶点。本篇主要介绍FXR在肝星状细胞及其在肝纤维化中的作用。

北京大学基础医学院姜长涛研究团队发现抑制肠法尼醇X受体——鞘磷脂磷酸二酯酶3轴减轻动脉粥样硬化的新机制

2021年5月3日,北京大学基础医学院姜长涛研究团队在The Journal of Clinical Investigation在线发表了题为“Suppressing the intestinal farnesoid X receptor-sphingomyelin phosphodiesterase 3 axis decreases atherosclerosis”的研究论文,系统地报道了肠法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)在动脉粥样硬化发生发展中的重要作用,该研究详细阐明了肠FXR通过调控肝胆固醇分解和肠神经酰胺合成加重动脉粥样硬化发生发展的机制,为动脉粥样硬化的临床治疗提供了潜在的分子靶点,为新药的研发提供了潜在的可能。

基于CRISPR/Cas9技术的法尼醇X受体缺失株的构建及其对HeLa细胞增殖的影响

试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建法尼醇X受体(FXR)基因稳定敲除细胞株,并考察其对HeLa细胞增殖的影响。根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计3对特异性识别FXR基因第1外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),以PX459质粒为载体,构建真核重组表达质粒。酶切和测序鉴定后将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,再用实时荧光定量PCR检测HeLa细胞FXR基因敲除稳定株中FXR的表达量,并用Western blotting方法鉴定HeLa细胞FXR基因敲除效果。最后用结晶紫染色试验检测FXR基因敲除对HeLa细胞增殖的影响。结果显示,经测序后,3对sgRNA位置与方向均正确插入到PX459质粒载体内,成功构建出重组表达质粒PX459-sgRNA;实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,转染后筛选出的细胞中FXR蛋白不表达,表明构建出稳定敲除FXR基因的HeLa细胞株;结晶紫试验结果发现,FXR基因敲除的HeLa细胞染色深度明显低于正常HeLa细胞,FXR基因敲除HeLa细胞孔D 595 nm值极显著低于野生型HeLa细胞孔(P<0.01),说明HeLa细胞FXR基因敲除株的增殖能力较正常HeLa细胞显著降低。本试验利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源FXR基因敲除细胞株,且FXR基因敲除对癌细胞增殖具有显著抑制作用,为研究FXR的功能和作用机制提供了细胞模型,并为研究FXR在相关癌症发生发展中的作用奠定了基础。

FXR及其在肝脏肿瘤及肝脏再生中的作用

在人体中,受到外界各种损伤后拥有再生能力的组织并不多见,而有完全再生或大部再生潜力的组织及器官更是凤毛麟角。肝脏作为人体内的重要器官,同时也是主要的解毒器官,行使着代谢体内各种毒素和有害物质的相关功能。由于这些被解毒的物质往往具有肝细胞毒性,因此提示肝组织应该具有一定的再生潜力来对抗不断进行的代谢过程。

法尼酯衍生物X受体在2型糖尿病中的研究进展

国际糖尿病联盟(IDF)最新数据表明目前中国糖尿病患者在剧增。糖尿病是以胰岛素分泌相对或和绝对不足导致的慢性高血糖为特征的代谢性疾病,法尼醇X受体(farnesoid X receptor, FXR,NR1H4)是能被胆汁酸激活的转录因子,可以通过多种途径调节血糖。回顾国内外有关法尼醇X受体介导β细胞胆汁酸代谢、影响GLP-1的分泌、抑制肝糖原异生、增加肝糖原储存、增加胰岛素的分泌和增强胰岛素的敏感性等机制发挥调节血糖平衡作用的研究,以及中医药干预FXR对糖脂代谢的相关研究,意在探索FXR与糖尿病的相关性,为糖尿病的发病机制提供新的理论依据。

非酒精性脂肪性肝病相关肝细胞癌的发病机制及FXR和OCA的研究进展

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)进展为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发病机制是相当复杂的,其中涉及多个方面,包括高胰岛素环境、细胞学机制、遗传多态性等。为预防NAFLD进展为HCC,干预和治疗NAFLD是必然的选择。法尼醇X受体(Farnesoid X receptor,FXR)的活化可以改善NAFLD的组织学特征。作为FXR激动剂奥贝胆酸(Obeticholic acid,OCA)又名6-乙基鹅去氧胆酸,是目前一种治疗NAFLD的新药物。本文就NAFLD相关HCC发病机制、FXR和OCA的研究进展作一概述。

在APAP、TAA诱导的肝细胞药物性损伤中C/EBPβ对FXR的调控机制

目的:通过生物信息学分析寻找对乙酰氨基酚(APAP)诱导药物性肝损伤(DILI)过程中的关键基因,并研究在APAP、硫代乙酰胺(TAA)介导的小鼠肝细胞药物性损伤中,CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)对法尼醇X受体(FXR)的调控机制。方法:采用生信分析筛选APAP诱导的DILI模型中的关键基因;通过RT-qPCR、Western blot法检测不同浓度的TAA(0、13、33 mmol/L)、APAP(0、2、5μmol/L)对小鼠肝细胞AML12中C/EBPβ及FXR的mRNA及蛋白水平表达的影响。针对C/EBPβ基因设计两条不同的shRNA,并分别克隆至pLKO载体,用于构建C/EBPβ稳定敲低的AML12细胞系;通过流式细胞术分析TAA、APAP对AML12细胞凋亡的影响。结果:(1)FXR是APAP所致DILI模型中的关键性基因;(2)TAA和APAP导致AML12小鼠肝细胞损伤中FXR的mRNA及蛋白表达水平均显著降低;(3)TAA和APAP导致AML12小鼠肝细胞损伤中C/EBPβ蛋白表达水平显著降低;(4)C/EBPβ稳定敲低的AML12细胞系中FXR的mRNA水平显著下调。(5)奥贝胆酸(OCA)可以抑制凋亡基因聚ADP-核糖聚合酶(PARP)的表达。结论:在TAA及APAP诱导的肝细胞损伤中,C/EBPβ可能是调控FXR的关键基因。

FXR在肝脏疾病中的作用及其激动剂的研究进展

法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR),核受体家族成员之一,是重要的配体激活转录因子,其主要分布于肝、肠、肾以及肾上腺等组织器官中,在胆汁酸代谢、糖脂代谢、胰岛素抵抗、肝脏保护等过程中发挥重要的调节作用。本文在调研文献基础上就FXR在肝脏疾病的不同发生阶段具有一定的调节作用进行归纳总结,进一步揭示FXR的功能,也为探寻肝脏疾病的发生机制提供了新的思考方向,并为治疗及预防此类疾病提供了新的靶点。

法尼醇X受体功能障碍在异烟肼所致肝损伤中的研究进展

异烟肼(isoniazid,INH)是一线抗结核药物,在结核治疗中有不可替代的作用,也可单独用于结核的预防,但其在临床用药时常因不良反应导致用药中断,贻误病情。肝损伤是INH最常见的不良反应,然而其发生机制仍存在争议。近年来,众多研究显示,INH所致肝损伤可能与法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)功能障碍有关,FXR可能是其导致肝损伤的潜在靶点。该文就FXR功能障碍在INH所致肝损伤中的最新研究进展进行综述。