建立大鼠原位肠-肝灌流模型评价绿原酸的代谢

目的:建立大鼠原位肠-肝灌流模型,运用该模型研究绿原酸在大鼠肠、肝中的代谢转化。方法:采用液相色谱质谱联用(HPLC-MS)法测定大鼠原位肠-肝灌流模型灌流液中绿原酸及其代谢产物咖啡酸、阿魏酸和马尿酸。结果:绿原酸十二指肠给药后,灌流液中主要活性代谢产物为阿魏酸,同时在灌流液中也检测到少量活性代谢产物咖啡酸和大量代谢终产物马尿酸。结论:大鼠原位肠-肝灌流模型适用于绿原酸生物转化和代谢动力学的研究;绿原酸在肠中存在广泛的代谢。

大鼠原位肝灌流及体外肝微粒体温孵研究对甲基苯磺酰胺代谢的影响因素

目的研究抗肿瘤新药对甲基苯磺酰胺(PTS)肝代谢过程中对大鼠CYP3A2,CYP2D1,CYP1A2的影响,P-糖蛋白抑制剂对PTS代谢的影响,PTS合并用药时的代谢变化。方法♂Wistar大鼠分组ip苯巴比妥,酮康唑和维拉帕米连续给药3 d后肝灌流PTS 25μmol.L-1,比较空白组与各处理组PTS代谢变化。♂Wistar大鼠分组ip PTS 33和99 mg.kg-1.d-1连续给药4 d后分别肝灌流CYP3A2,CYP2D1底物右美沙芬和CYP1A2底物非那西丁。比较空白组与PTS处理组对CYP3A2,CYP2D1,CYP1A2活性的影响。体外实验右美沙芬40μmol.L-1和非那西丁20μmol.L-1与不同浓度的PTS在空白微粒体中温孵。PTS与不同浓度依托泊苷(VP-16),氟尿嘧啶(5-FU)在空白微粒体中温孵。结果苯巴比妥诱导组PTS代谢加快,酮康唑组代谢减慢。右美沙芬和非那西丁代谢在温孵反应中与空白组无显著差别。依托泊苷体外实验中抑制PTS代谢达50.7%,氟尿嘧啶对PTS代谢没有影响。结论大鼠原位肝灌流是良好的整体器官药物代谢模型,是体外实验有力的补充。PTS大鼠肝代谢与CYP450相关。PTS代谢不影响CYP3A2,CYP2D1,CYP1A2活性。P-糖蛋白抑制剂不影响PTS在实验条件下的代谢。合并用药的依托泊苷对PTS肝代谢有显著抑制。

以离体肝灌流技术研究当归对黄药子肝毒性的保护作用

目的:通过测定离体肝灌流液中的黄嘌呤氧化酶(XOD)及病理组织学观察,评价黄药子、当归及其相配伍后的水提取物对肝脏毒性作用。方法:采用离体肝灌流方法,分别加入各组药物,定时收集各组灌流液,测定XOD,并对灌流肝脏进行HE染色光镜观察。结果:黄药子水提取物在灌流液低浓度(1.1mg/ml)、短时间(15min以后)即可导致肝细胞损伤,并与浓度和时间呈依赖关系。黄药子:当归1∶2合煎液中低浓度未见对肝细胞有损伤。结论:黄药子单煎液有明显肝毒性,配伍当归后有明显肝保护作用。

LC-MS法测定离体大鼠肝灌流模型中知母皂苷B2的含量及药动学研究

目的建立简单、快速的测定K—H缓冲液中知母皂苷B2含量的LC—MS方法，检验特定剂量知母皂苷B2在大鼠离体肝灌流模型中的肝脏提取率。方法将SD大鼠离体肝灌流给予知母皂苷B2，取出不同时间点肝灌流液，LC—MS法测定肝灌流液中知母皂苷B2的浓度。色谱条件：ACEC18色谱柱（100mm×2．1mm，1μm），流动相为乙腈-0．05％甲酸水溶液（V／V），采用梯度洗脱。结果知母皂苷B2在0．125—2μg／mL范围内线性良好（r2=0．999），日间和日内变异系数（RSD）〈10％，基质效应RSD〈15％，符合生物样品分析的方法学要求。结论该方法准确、灵敏、快速、高效，适用于知母皂苷B2在离体灌流液中的定量分析。获得了1．6μg／mL的知母皂苷B2样品大鼠离体肝灌流状态下的肝提取率和肝清除率曲线。

海藻甘草及其相配伍后的水提取物的肝毒性研究——对离体大鼠肝灌流液中黄嘌呤氧化酶的影响

目的 :通过测定肝灌流液中逸出的黄嘌呤氧化酶 (XOD) ,评价海藻、甘草及其相配伍后的水提取物对肝脏毒性的影响。方法 :采用离体肝灌流方法 ,分别加入各剂量组药物 ,定时收集各组灌流液 ,供测 XOD用。结果 :甘草水提取物在灌流液中低浓度时 (0 .5 g生药 /2 0 0 ml、1 .0 g生药 /2 0 0 ml)时均未观察到明显变化 ,高浓度 (2 .0 g生药 /2 0 0 ml)、长时间 (60 min以后 )出现毒性反应。海藻水提取物在灌流液中低浓度 (0 .5 g生药 /2 0 0 ml、1 .0 g生药 /2 0 0 ml)、短时间 (1 5 min以后 )都能导致肝细胞损伤 ,并与浓度和时间呈依赖关系。甘草∶海藻 =1∶ 1合煎液未见对肝细胞有损伤 ,余下各比例合煎及单煎后混合液对肝细胞均有损伤 ,且随海藻含量增加毒性增强 ,合煎液毒性强于单煎后混合液。结论 :海藻单煎液及除甘草∶海藻 =1∶ 1合煎液外各比例合煎及单煎后混合液均有一定肝毒性 ,而甘草单煎液在低浓度。

大鼠原位肠-肝灌流模型研究小补心汤总黄酮体内效应物质

抗抑郁作用经典古方小补心汤由代赭石、旋复花、竹叶和淡豆豉4味中药组成,含有大量的黄酮类化合物。张有志等研究结果表明,小补心汤乙醇提取物总黄酮（BX-2）具有良好的抗抑郁活性,且BX-2抗抑郁作用的效价强度比小补心汤明显提高,由于BX-2所含成分多,含量低,目前动物体内物质基础研究无法开展,为了研究其体内效应物质基础,本实验尝试用大鼠原位肠肝循环灌流模型对BX-2的体内效应物质基础进行初步研究。

大鼠离体肝灌流中葛根素的代谢动力学研究

目的:采用大鼠离体肝灌流模型,研究葛根素在大鼠肝脏中的代谢以及维拉帕米、红霉素和利福平对葛根素代谢的影响。方法:以1、10和50mg/L的葛根素溶液对大鼠离体肝脏进行灌流,HPLC法测定灌流液中葛根素的浓度;再分别在含10mg/L的葛根素溶液中加入不同量的维拉帕米、红霉素、利福平后对肝脏进行灌流,测定葛根素的消除情况。结果:1、10和50mg/L的葛根素溶液在肝脏的消除率分别为0.511±0.045、0.378±0.026、0.425±0.040ml/min,且灌流液中葛根素-时间曲线下面积(AUC)与加入剂量呈强正线性相关关系;随灌流液中维拉帕米和红霉素浓度的增大,肝脏对葛根素清除率逐渐降低;随着利福平剂量的增大肝脏对葛根素清除率逐渐增大。结论:葛根素从大鼠肝脏的消除为线性动力学过程;维拉帕米和红霉素对葛根素在大鼠离体肝脏的消除有抑制作用;利福平对葛根素在大鼠离体肝脏的消除有促进作用。

异甜菊醇在大鼠离体肝灌流中的药代动力学研究

目的研究异甜菊醇在大鼠肝脏内的代谢情况。方法给予SD大鼠离体肝灌流（112）行异甜菊醇的初步药动学研究（体外试验）。分离5只大鼠肝脏然后用含有异甜菊醇的介质进行循环灌流，在时间为0、1、3、5、10、15、20、25、30、40、50、60rain时收集灌流液样品，每间隔10min收集胆汁样品，样品用HPLC—UV分析。尿液（前面实验收集）、灌流液和胆汁样品用β-葡萄糖醛酸酶（1-3U／μL）培养再进行HPLC—UV分析。结果40～50min后的灌流液中，HPLC法检测不到异甜菊醇，而胆汁中完全没有检测到。灌流液和胆汁分别经过β-葡萄糖醛酸酶／硫酸根培养后，色谱方法与灌流液的一样保持不变，胆汁样品中得到了明显的异甜菊醇峰。60min中的药动学参数正T1/2、AUClast、Vz（ods）、CLH、EH（肝脏提取率）和回收率（R0-60代谢率）分别为：（17．82±2．5）min、（258．18±33．2）min·μg／mL、（425．35±32．1）mL、（17．7±2．2）mL／min、（0．59±0．07）和（18．08±2．5）。结论经过40—50min灌流后异甜菊醇主要在肝脏中积累，以葡萄苷酸化形式从胆汁排泄，很可能大部分经过胆汁排泄慢慢的消除到粪便中。

归脾颗粒剂对肝灌流液中酶AST、ALT的影响

目的 :评价归脾颗粒剂及含药血清对大鼠肝脏的影响。方法 :采用离体肝灌流模型。结果 :归脾颗粒剂 2 .5、5 .0 g·L-1 对肝灌流液中酶AST、ALT无影响 ,与空白组比较无差异 ;大鼠灌胃不同剂量归脾颗粒剂 7d后血清对大鼠肝灌流液中酶无影响 ,与空白组比较无差异。结论 :归脾颗粒剂及其含药血清对酶AST、ALT无影响 ,提示归脾颗粒剂对肝脏无毒性。

反相高效液相色谱法检测肝灌流液中更昔洛韦

目的 建立P-糖蛋白底物更昔洛韦在肝灌流液中浓度的测定方法。方法 将SD雄性大鼠施行肝脏灌流手术，收集肝灌流液。采用反相高效液相色谱法，应用外标法测定更昔洛韦在SD大鼠中的药物浓度。结果 在所建立的方法学下，更昔洛韦的保留时间为6．68min。标准曲线为Y=0．052X-0．172（r=0．9999），在50～2500ng·mL^-1肝灌流液浓度范围内呈良好的线性关系，最低定量限为50ng·mL^-1；在100，1000，2000ng·mL^-1低、中、高三个浓度下的绝对回收率为90．57％～94．78％，方法回收率为98．68％～105．59％，日内精密度〈11．00％，日间精密度〈15．30％（n=5）。结论 该方法快速、准确、简便，能够满足更昔洛韦药动学研究要求。

肝灌流技术及其在代谢研究中的应用

肝灌流技术及其在代谢研究中的应用陈秉，毕晓云，沈昌明（广东药学院劳动卫生教研室；广东省东莞市石龙医院；广州市海珠区妇幼保健院）（朱家琦审校）关键词肝灌流；代谢；代谢动力学；胆道分泌中图号Ｒ９６５；２肝脏是机体最主要的代谢器官。由于其解剖位置的特殊性及...

离体肝灌流方法及其质量控制

采用离体肝灌流方法，在麻醉状态下，使大鼠肝脏形成体外循环。结果：灌流２ｈ后，肝脏外观呈粉红色、质地均匀，无斑块状改变，经肝切片组织学检查，其显微结构基本正常，流出液丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）活性和蛋白质含量无异常改变。提示：此法可维持肝脏正常生理、生化功能至少２ｈ；该模型可用于物质代谢和中毒机理等方面的研究。

应用小鼠肝灌流术观察人参对缺氧和中毒肝损害的保护作用

本文采用小鼠肝脏离体灌流术,研究人参对缺氧和中毒肝损害的保护作用。通过LDH活力测定,台盼兰染色细胞核计数,以及病理组织检查,结果表明:加入人参制剂组其LDH释放率,台盼兰染色细胞核平均出现率,以及肝组织病理损害程度,均较阳性对照组低。人参对缺氧和中毒所致肝损害有一定保护作用。

评价大鼠离体肝灌流模型稳定性的方法

以自建的大鼠原位循环肝灌流模型为研究模型，建立一套实用的模型稳定性评价方法。首先进行一般稳定性评价，包括肉眼观察肝脏形态，监测门脉压、灌流液pH，定时检测灌流液K^＋浓度、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平，肝组织病理检查等；要求在整个灌流过程中肝脏色泽均匀，无斑块状改变，以门静脉压始终无骤变，稳定在8—14mmHg范围内，变化不超过0．5mmHg／30min，pH始终处于7．4～7．2。变化不超过0．1／30min，K^＋浓度无突然升高现象，灌流液中ALT、AST水平随时间无显著性变化，肝组织病理检查不出现除空泡性变以外的病变为标准，确定模型可维持稳定的时间。在满足一般稳定性的基础上，根据不同的研究目的对模型进行功能稳定性评估，要求研究所用的指标能在空白灌流组和阳性药灌流组之间体现显著性差异；本研究以药物肝损伤研究为例，以灌流液ALT、AST、LDH（乳酸脱氢酶）水平为指标，并进行肝组织病理检查，结果两组出现极显著性差异，故判定用所建立的灌流模型进行肝损伤研究可真实反映受试药的肝损伤情况，一般不会出现假阴性和假阳性结果。

鹅去氧胆酸对小鼠肝灌流及原代肝细胞胆汁酸代谢通路相关基因表达的影响

目的通过小鼠原代肝细胞、离体肝灌流模型和整体动物实验,比较鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)对胆汁酸代谢通路的影响。方法实验包括原代肝细胞、离体肝灌流和整体动物实验3部分,每部分均包括空白组和CDCA给药组(n=6),给药剂量分别为100μmol/L、100μmol/L和50 mg/kg。采用实时荧光定量PCR检测肝细胞或肝脏中Cyp7a1、Cyp8b1、Fxr、Shp、Bsep、Ostβ等基因表达的水平。结果在原代肝细胞的实验中,CDCA能显著上调Shp、Ostβ基因的表达(P<0.05),抑制Cyp7a1、Cyp8b1和Bsep基因的表达(P<0.05)。在离体肝灌流的实验中,CDCA能诱导Ostβ的基因表达(P<0.05),而在整体动物实验中,CDCA对Bsep基因的表达产生明显抑制(P<0.05)。结论由实验结果可知,在肝灌流及原代肝细胞中,CDCA对胆汁酸代谢通路的影响不同,在离体肝灌流模型与整体动物上的影响较一致。因此,在其开发与研究中,不能局限于体外细胞模型,还需要进一步的验证。

大鼠离体肝灌流液中柠檬苦素的分析测定

目的：建立柠檬苦素在大鼠肝灌流液中含量的测定方法。方法：SD大鼠行灌流手术,采用浓度为28.0μg·m L-1的柠檬苦素溶液对大鼠离体肝进行灌流,HPLC法测定灌流液中柠檬苦素的含量。结果：柠檬苦素在0.060~96.0μg·m L-1（n=9）范围内线性关系良好（r=0.998 8）;定量限为50 ng·m L-1,方法回收率为93.6%~102.1%。结论：本方法快速、准确、简便,能够满足柠檬苦素在大鼠肝脏中药动学的研究。

小鼠肝脏原位持续灌流方法的建立及其在肝脏非实质细胞分离中的应用

目的建立一种小鼠肝脏原位持续灌流的方法,并将该法应用于肝脏非实质细胞的分离。方法利用三通管和静脉留置针将门静脉、蠕动泵软管以及下腔静脉连接形成封闭回路,自门静脉端注入37℃的胶原酶消化液约60 ml,调节蠕动泵转速为20 ml.min-1行循环灌注约30 min,摘除肝脏剪切成小块组织,加入胶原酶孵育液消化30 min后碾碎制备成细胞悬液,离心后取沉淀先后以50%和35%的Per-coll密度离心即可获得小鼠肝非实质细胞。结果肝脏非实质细胞的得率为0.5×107～1×107个/鼠肝,流式检测CD45+细胞占(27.21±1.47)%。结论胶原酶肝脏原位持续灌流+体外孵育消化结合Percoll密度离心是分离小鼠肝脏非实质细胞的可靠方法。