在安全输血中应用丙型肝炎病毒核心抗原检测技术的初步探索

本研究探讨用丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原酶联免疫吸附技术(HCV-cAgELISA)筛查献血员感染HCV的可行性。对我医院2003年1月-2005年12月间的8677份献血者血清标本进行抗-HCV初检和复检。将仅初检阳性的15份血清标本和仅复检阳性的14份血清标本,分别再做HCV-cAgELISA和HCVRT-PCR检测。结果表明:经HCV-cAgELISA检测,29份仅初检(15份)和仅复检(14份)抗-HCV阳性血清标本中只有5份结果为阳性,阳性率为17.24%。经HCVRT-PCR检测,29份仅初检和仅复检抗-HCV阳性血清标本中同样也只有5份阳性结果,阳性率也为17.24%。结论:HCV-cAgELISA检测技术的敏感性与HCVRT-PCR技术类似,但成本明显降低,有可能作为HCV感染的辅助确证试验,或作为抗-HCV检测技术的更新换代技术用于安全输血中献血者血液的筛查。

乙型肝炎病毒核心抗原及Flt3配体双表达核酸疫苗的构建与体外表达

目的:构建可同时表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)和Flt3配体(FL)胞外段的双表达核酸疫苗。方法:将HBcAg和FL胞外段的基因用PCR方法扩增并分别引入相应的限制性内切酶酶切位点,然后克隆入真核双表达载体pIRES,获得含双基因片段的表达质粒;再取该表达质粒中的内部核糖体切入位点(IRES)序列和基因片段克隆入pJW4303载体中,获得相应的双表达核酸疫苗,经筛选鉴定后,以293T细胞瞬时表达检测两基因的表达水平。结果:构建成功以pIRES、pJW4303为载体的4种HBcAg和FL胞外段的双表达核酸疫苗,体外表达证实HBcAg和FL胞外段均能高效表达,基因位于IRES上游时表达水平较高。结论:用IRES元件实现了HBcAg和FL胞外段双表达核酸疫苗的构建,pJW4303为载体的核酸疫苗两基因表达水平优于pIRES为载体的核酸疫苗。

丙型肝炎病毒核心抗原的转位表达与肝(癌)细胞凋亡的关系

目的 探讨丙型肝炎病毒核心抗原的转位表达与肝(癌 )细胞凋亡的关系及其意义 .方法 采用免疫组织化学方法检测 HCV核心区抗原和 NS3区抗原在肝硬变 (L C)和肝细胞肝癌 (HCC)组织中的分布 ,同时对连续切片进行原位凋亡检测并计算凋亡指数 .结果 HCV核心区抗原定位于肝细胞或肝癌细胞的胞质或胞核中 ,在 L C组织中 ,核心抗原呈弥漫或灶状分布于肝细胞胞质 ,偶见胞核阳性的肝细胞 ,阳性率为 6 0 .7% ;核心抗原在癌组织中以核阳性分布为主 ,阳性率为 37.6 % ,癌旁肝组织以胞质阳性为多见 .HCC中 HCV核心抗原的核阳性率 (75 .0 % ,15例 / 2 0例 )明显高于其在 L C(17.7% ,6例 / 34例 )及癌旁肝组织 (11.8% ,2例 / 17例 )中的阳性率 (P<0 .0 5 ) ;在 HCC中 ,HCV核心抗原核转位表达的癌组织的 AI值 (0 .174± 0 .0 93)显著低于胞质阳性的癌组织 (0 .5 12± 0 .113,P<0 .0 1) . HCV NS3区抗原定位于肝细胞或肝癌细胞的胞质中 ,在 L C和 HCC组织中的阳性率分别为 5 3.6 %和 39.6 % .未发现 HCV NS3区抗原的表达与肝(癌 )细胞凋亡的相关性 .结论 HCV感染与我国 L C,HCC的发生关系密切 ,HCV核心抗原在肝癌组织中常发生核转位表达 ,这种核转位表达抑制了肿瘤细胞发生凋亡 。

乙型肝炎病毒核心抗原HBcAg基因重组杆状病毒的构建及鉴定

目的利用杆状病毒表达系统(BEVS)构建含乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的重组杆状病毒。方法采用PCR法从含乙型肝炎病毒全基因序列(adw)的质粒pHBV1中扩增出HBVC基因,亚克隆到pGEM-T载体,然后将HBVC基因插入载体pAcGHLT-A中,构建含有HBVC基因的重组质粒pAcGHLT-HBcAg,与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)联合转染秋粘虫细胞(Sf9),获得含有HBVC基因的重组杆状病毒。采用限制性内切酶酶切和DNA序列分析对重组病毒进行鉴定。结果利用杆状病毒表达系统,成功地构建了含HBVC基因的重组杆状病毒,感染昆虫细胞Sf9后,PCR检测可以扩增出相应大小的片段。结论利用BEVS成功构建了含有HBVC基因的重组杆状病毒,为进一步的研究奠定了基础。

373例乙型肝炎患者HBV-DNA定量与乙型肝炎病毒核心抗原及肝脏酶学指标的相关性分析

目的探讨HBV-DNA定量和乙型肝炎病毒核心抗原在诊断乙型肝炎和评价病情中的意义。方法收集373例乙型肝炎患者的HBV-DNA定量、HBeAg与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)等实验室诊断指标,进行相关性分析。结果 (1)HBV-DNA定量与HBeAg具有相关性(P<0.01)。(2)HBV-DNA定量与ALT、AST、GGT结果具有相关性(P<0.01)。(3)HBeAg与ALT、AST、GGT结果无相关性(P>0.05)。结论 (1)HBeAg一定程度上反映了病毒在体内的复制情况,但HBV-DNA定量是评价体内病毒复制更直接的指标。(2)HBV-DNA定量结果与肝功能受损情况相关,高病毒载量是肝功能受损的危险因素。

乙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

单克隆抗体是由识别一种抗原表位的B细胞产生的同源性抗体，具有特异性强、纯度高、效价高、无或少血清学交叉反应等优点，在临床和科研中得到了广泛应用。目前对乙型肝炎病毒的相关发病机制还在进一步探索，特别是在建立动物模型方面还有很多问题需要解决，如土拨鼠肝炎病毒核心抗原是否与人源型的核心抗原存在交叉反应等等都需要尽快弄清楚。我们将原核表达截短型乙型肝炎病毒核心抗原（HBc144）纯化后免疫BALB／C小鼠，制备出了抗乙型肝炎病毒核心抗原的两株单克隆抗体，并对其特异性、亲和力、抗原表位等性质进行了鉴定，

血清丙型肝炎病毒核心抗原、ＮＳ３抗原的检测及临床意义

目的 为检测病人血清中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心抗原、ＮＳ３抗原井探讨其临床意义。方法 用基因工程表达的ＨＣＶ核心蛋白、ＮＳ３抗原制各其单克隆抗体，建立检测病人血清中ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ３抗原的ＥＬＩＳＡ法。结果 ６０例慢性丙型肝炎患者；２５０例杭—ＨＣＶ—１８Ｇ阳性者；３０例抗—ＨＣＶ—ＩｇＧ、ＩｇＭ均阳性者；２００例透析病人；２０例白血病病人；１５０例普通病人中ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ３抗原阳性检出率分别为：６．６％、８．４％、１６．７％、４％、５％、２％和１３．３％、１０．４％、２３．３％、３．０％、５．０％、２．６％。结论ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ３抗原的检测，可作为现有检测方法的补充，能更好地反映患者体内ＨＣＶ的活动情况。

丙型肝炎病毒核心抗原检测在丙型肝炎筛检中的应用

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)对丙型肝炎(简称丙肝)筛查的意义。方法收集2014年10月至2015年10月8 000例门诊及住院患者,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HCV-cAg、丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab),并对HCVcAg或HCV-Ab阳性标本采用聚合酶链反应(PCR)法检测HCV-RNA进行确诊。结果以HCV-cAg或HCV-Ab阳性为标准,从8 000例血清样本中初步筛查出阳性样本82例,经HCV-RNA确证,其中HCV-RNA阳性73例,阴性9例,HCV-cAg的灵敏度及特异度分别为45.83%和99.98%,HCV-Ab的灵敏度及特异度分别为94.44%和99.90%,联合检测HCV-cAg与HCV-Ab的灵敏度及特异度分别为100.00%和99.86%。结论在丙肝筛检工作中,HCV-cAg与HCV-Ab二者有互补性,联合检测HCV-cAg与HCV-Ab有助于提高HCV筛查率。

丙型肝炎病毒核心抗原检测对临床诊断的价值

目的应用酶联免疫吸附法分别检测丙型肝炎病毒核心抗原和抗体,以了解丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床价值。方法应用丙型肝炎病毒游离核心抗原试剂盒、HCV-AbELISA试剂盒和丙型肝炎病毒PCR检测试剂盒,对来自笔者所在医院输血前及门诊筛查的260例样本和80例丙型肝炎或疑似丙型肝炎患者的血清标本进行HCV-cAg、HCV-Ab和HCV-RNA检测。结果 260例筛查样本HCV-Ab均为阴性,HCV-cAg阳性5例,HCV-cAg阳性率1.9%;其中HCV-RNA4例。80例HCV-Ab阳性的样本检出HCV-cAg阳性33例,HCV-cAg阳性率为41.25%;HCV-RNA47例。结论 HCV核心抗原检出时间早于抗体,HCV-cAg检测试剂盒可作为HCV抗体检测的补充试剂,尤其对术前HCV筛查的患者联合应用更具有临床价值。

丙型肝炎病毒核心抗原与HCV-RNA相关性研究

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)、抗体(HCV-Ab)与丙肝病毒RNA(HCV-RNA)之间的关系。方法对150例丙型肝炎(简称丙肝)抗体阳性感染者和100例健康体检者,分别进行HCV-cAg、HCV-Ab和HCV-RNA检测,对其相关性进行分析。结果 150例HCV-Ab阳性感染者中,HCV-cAg和HCV-RNA的阳性率分别为40%和42%。100例健康体检者中,HCV-Ab均为阴性,但有2例HCV-cAg阳性,阳性率为2%,此2例经HCV-RNA检测,均确诊为阳性。结论 HCV-cAg和HCV-RNA几乎同时出现,均能较准确的反映HCV复制状态。但由于HCV-cAg检测敏感性及特异性好、费用低、操作方便,对丙型感染病毒感染的辅助诊断具有重要意义。

丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床应用价值

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法的临床应用价值。方法对20例HCV抗体(HCV-Ab)阳性标本和200例HCV-Ab阴性标本进行HCV-cAg测定,同时采用核酸扩增进行HCV-RNA对照测定。结果20例HCV-Ab检测阳性的标本中HCV-cAg阳性8例,200例HCV-Ab检测阴性的标本中HCV-cAg阳性3例;以HCV-RNA聚合酶链反应(PCR)检测为对照,HCV-cAg检测试剂盒的敏感性为88.3%,特异性为99.5%。结论HCV-cAg ELISA检测方法敏感性和特异性较好,HCV-Ab和HCV-cAg联合检测可起到互补作用,提高阳性检出率,有利于早期诊断。

酶免疫法检测丙型肝炎病毒核心抗原的应用价值

目的:探讨酶联免疫法(EIA)检测丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)诊断丙型肝炎病毒(HCV)感染的应用价值。方法:(1)收集54例ALT>1.5倍正常值上限(ULN)抗HCV阳性患者血清。(2)54例患者血清分别作HCVcAg检测(EIA法)和HCV-RNA检测(PCR荧光定量法)。(3)比较HCVcAg的检测结果与HCV-RNA的检测结果的相关性。结果:(1)54例患者HCVcAg检测阳性21例(38.9%),HCV-RNA检测阳性31例(57.4%),其阳性率差异无统计学意义。(2)HCVcAg与HCV-RNA同时阳性19例,HCVcAg阳性而HCV-RNA阴性2例,HCVcAg阴性而HCV-RNA阳性12例,HCVcAg阳性与HCV-RNA阳性符合率达90.5%(19/21)。结论:(1)用EIA法检测HCVcAg和用PCR荧光定量法检测HCV-RNA,二者有相当高的符合率,故前者亦可作为HCV感染的确证试验。(2)用EIA法检测HCVcAg诊断HCV感染值得作为现有方法的补充,联合应用可提高临床诊断率。其方法操作简单,成本较低,更适合于基层医院应用。

丙型肝炎病毒核心抗原ELISA检测在丙型肝炎病毒感染诊断中的价值

丙型肝炎病毒（HCV）是慢性肝病的主要病原之一,呈世界流行,感染率为1%～3%,目前全球约有1.7亿HCV感染患者。约60%的急性丙型肝炎患者转化为慢性,而慢性患者中分别有8%～46%和11%～19%发展成肝硬化和肝细胞癌^（[1-2]）。丙型肝炎传播已经成为公共卫生问题,早期诊断是防止HCV传播的有效手段。

游离丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫吸附试验不适用于粒细胞集落刺激因子动员的造血祖细胞捐献者的筛查

市售的酶联免疫试验试剂盒抗-丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原酶联免疫(ELISA)检测系统(Ortho Clinical Diagnostics,Raritan,NJ),能够检测患者感染HCV后窗口期的HCV核心抗原,即在产生HCV RNA后的1 d～2 d内检测到HCV核心抗原,灵敏度为94%,总的特异性为99%.

合并HBV感染对慢性HCV感染者血清丙型肝炎病毒核心抗原检出情况的影响

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)感染对合并HBV感染的丙型肝炎病毒(HCV)感染患者血清丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)检出情况的影响。方法选取2017年11月至2019年11月期间我院收治的72例合并HBV/HCV感染患者为观察组,选择同期我院收治的72例慢性丙型肝炎患者为对照组。检测两组患者血清HCV RNA和HCVcAg,同时检测观察组患者血清HBV DNA和HBeAg,分析HCVcAg检出情况与患者HBV DNA、HBeAg的关系。结果对照组患者血清HCV RNA和HCVcAg检出率分别为83.33%和70.83%,显著高于观察组患者(58.33%和43.06%,P<0.05)。在观察组中,HBeAg阴性和HBeAg阳性感染患者分别为23例和49例,HBeAg阴性感染患者血清HCV RNA和HCVcAg检出率分别为82.61%和65.22%,显著高于HBeAg阳性感染患者(46.94%和32.65%,P<0.05)。对照组患者血清HCV RNA和HCVcAg检出率与HBeAg阴性感染患者相比,其差异无统计学意义(P>0.05)。在观察组中,HBV RNA阴性和HBV RNA阳性感染患者分别为20例和52例,HBV RNA阴性感染患者HCVcAg检出率为40.00%,HBV RNA阳性感染患者HCVcAg检出率为44.23%,其比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组患者HCVcAg检出率为70.83%,显著高于HBV RNA阴性感染患者HCVcAg检出率(40.00%,P<0.05)。结论合并HBV/HCV感染患者HCVcAg检出率显著低于单纯慢性丙型肝炎患者,合并HBV/HCV感染患者HCVcAg检出率显著降低与HBV复制关系不大,可能是HBeAg对HCV复制产生抑制,使HCVcAg表达降低。

丙型肝炎病毒核心抗原荧光定量型生物条形码检测在安全输血中的应用

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)荧光定量型生物条形码检测(FQ-BCA)筛查献血员感染HCV的可行性。方法将92份抗-HCV阳性、3 210份抗-HCV阴性献血员血清进行HCV RT-PCR和HCV-cAg FQBCA检测。结果抗-HCV阳性和抗-HCV阴性血清HCV RNA和HCV-cAg检测结果符合率分别为95.65%和99.94%,3 210份抗-HCV阴性血清HCV-cAg阳性2份,1份HCV RNA阳性,且HCV RNA拷贝数的上升与HCV-cAg FQ-BCA阳性检出率上升呈正相关。结论 HCV-cAg FQ-BCA检测敏感性与HCV RT-PCR类似,具有简便、快速、可靠等优点,较适用于安全输血中献血者的血液筛检。

不同小鼠IgG对丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫法检测的影响

目的获得最适合产品配制的小鼠-IgG。方法采用不同厂家的小鼠-IgG分别配制成不同的抗HCV-cAg酶结合物溶液,用酶联免疫法测定OD值。结果不同厂家的小鼠-IgG配制成的抗HCV-cAg酶结合物溶液,其检测结果有区别。结论配制抗HCV-cAg酶结合物溶液前应检测小鼠-IgG与产品的适配性。

丙型肝炎病毒核心抗原酶标抗体的制备及ELISA检测方法的建立

将抗丙型肝炎病毒核心抗原抗体(Anti-HCV Core protein)应用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),制备抗丙型肝炎病毒核心抗原酶标抗体,根据酶联免疫操作步骤,应用美国Ortho公司试剂盒的其它组分,建立一种丙型肝炎病毒核心抗原双抗夹心检测法,并对比市场上的试剂盒进行检测。

丙型肝炎病毒核心抗原检测在艾滋病合并HCV感染筛检中的作用

探讨丙型肝炎病毒核心抗原检测在艾滋病合并HCV感染筛检中的应用价值。方法 应用抗-HCV、HCV-cAg和HCV RNA联合检测,考察不同年龄组以及高和低CD4+T淋巴细胞组HIV感染者合并HCV感染的状况,并对HCV-cAg的应用价值做出评价。结果 CD4+结果为200-499×106 /L组抗-HCV、HCV-cAg和HCV RNA阳性率分别为13.9%、8.3%和19.4%,<200×106 /L组分别为33.5%、24.8%和42.9%,两组相比有统计学意义(P<0.05);以HCV RNA结果阳性为标准,单独抗-HCV、HCV-cAg和两者同时阳性率分别为42.0%、21.7%和36.2%。结论 HIV感染者较低的CD4+T淋巴细胞,更容易感染HCV而成为合并感染者,对于HIV感染者特殊的免疫功能状态,HCV-cAg的检测具有一定优势,可以弥补抗-HCV和HCV RNA检测的不足。