一种乙型肝炎病毒核酸PCR定量检测试剂的性能验证

目的验证和评价一种乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量PCR检测试剂的性能。方法根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP系列文件和ISO15189:2012的相关要求对试验试剂的精密度、正确度、可报告范围、定量检测限进行评价。结果精密度:高值(106 IU/mL)、低值(103 IU/mL)标本检测浓度对数值的批内变异系数(CV)分别为3.27%、4.00%,批间CV分别为4.84%、4.89%;正确度:试验试剂与比对试剂具有较好的相关性,直线回归方程为Y=1.006 2 X+0.226 4,r2=0.984 7>0.95;可报告范围:试验试剂在4.76×102~4.76×108 IU/mL范围内具有良好的线性(Y=0.995 9 X+0.183 9,r2=0.999>0.95);定量检测限为500IU/mL。结论试验试剂的各项检测性能与厂家声明相符。

丙型肝炎病毒核酸定量和抗-HCV血清学分析的诊断价值

目的探讨PCR-荧光探针法与抗-HCV检测在丙型肝炎(丙肝)诊断中的应用价值。方法回顾性分析265例疑似丙肝病毒感染者行HCV-RNA、抗-HCV及ALT检测的资料,统计不同年龄、性别分布情况,进行HCV-RNA与抗-HCV、ALT的相关性分析。结果 (1)男性抗-HCV与HCV-RNA的阳性率均高于女性,但差异无统计学意义(P>0.05);年龄>40岁的患者抗-HCV与HCV-RNA的阳性率明显高于年龄≤40岁的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)ALT异常率随HCV-RNA阳性率的增高而增加,并与HCV-RNA含量成正相关(r=0.999,P<0.05)。但ALT的水平与HCV-RNA含量无相关性(r=0.800,P>0.05)。(3)HCV-RNA阳性多伴有抗-HCV阳性(r=0.320),二者有很好的相关性。结论 ELISA法检测抗-HCV在丙型肝炎诊断中仍旧为首选检测方法。联合应用HCV-RNA和抗-HCV及ALT检测,是诊断丙型肝炎最为可靠的方法。

不同混合方式检测丙型肝炎病毒核酸的研究

目的 研究不同混合方式检测丙型肝炎病毒核酸含量 (HCVcDNA)的方法。方法 以未混合标本为对照 ,使用荧光定量PCR(FQ PCR)技术研究提取阶段混合 ,反转录阶段混合以及提取和反转录阶段均混合等不同实验条件下的HCVcDNA含量。结果 提取阶段混合组的HCVcDNA含量与对照组相比未见显著性差异 (P >0 0 5 ) ;反转录阶段混合组以及提取和反转录阶段均混合组的HCVcDNA含量低于对照组 (P <0 0 5 ) ,且在低浓度时出现假阴性结果。阴性标本在提取阶段混合未见假阳性。结论 在对混合血清进行HCVcDNA测定时 ,应将混合安排在提取阶段 ,不宜为增大混合标本数而在提取和反转录阶段均混合。

丙型肝炎病毒核酸定量检测的临床应用

本文采用实时荧光定量PCR方法对158例丙型肝炎抗体阳性患者的血清HCV RNA进行检测,探讨血清HCV RNA水平与患者肝功能损害情况的关系。1对象和方法1.1对象丙型肝炎抗体检测结果为阳性的病例标本共158例（男88,女70）,均来自我院门诊或住院病人,年龄（15～88）岁,平均（46.13±17.24）岁。以上病例血清的乙型肝炎、甲型肝炎、戊型肝炎及丁型肝炎病毒标志物均为阴性。

转氨酶与乙型肝炎病毒核酸载量的相关性临床诊断意义

目的探讨乙肝患者转氨酶与血清乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的相关性。方法对352例标本应用连续监测比色法检测血清中的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT);荧光定量PCR技术检测HBV-DNA。结果两种转氨酶在HBV-DNA阴性对照组与阳性组之间差异有统计学意义(P<0.05),但在HBV-DNA表达阳性的各组中,乙肝患者血清HBV-DNA水平的递增与AST、ALT两种转氨酶的浓度无关(P>0.05)。结论乙肝患者的转氨酶正常与否尚不能与其HBV-DNA复制状态有密切联系,可以作为判断肝功能损害进程的参考指标之一。

丙型肝炎病毒核酸定量测定的临床价值

目的 研究丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)载量与抗-HCV含量以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的相关性与符合性。方法 用FQ-PCR法检测128份怀疑HCV感染的血清中的HCV-RNA,同时检测ALT和抗-HCV。结果 128份样本中HCV-RNA阳性率为53.9%(69/128);抗-HCV阳性率为62.5%(80/128);ALT异常率为51.0%(65/128)。HCV平均载量为8.52×105 拷贝/ml血清。抗-HCV滴度和ALT异常随着HCV-RNA载量升高而增加。结论 用FQ-PCR法检测HCV-RNA可以确定(1)抗HCV与抗-HBs不同,不是中和抗体,(2)高滴度抗-HCV血清具有传染性。(3)抗-HCV滴度与HCV-RNA浓度之间呈正相关性r=0.952, P<0.001,且有符合性和互补性,(4)对慢性丙型肝炎长期抗-HCV阳性,若出现HCV-RNA阴性或阳性可以鉴别活动性、复制性程度,(5)是评价丙型肝炎抗病毒治疗效果的重要指标。

丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸含量与丙型肝炎病毒抗体和丙氨酸氨基转移酶的相关性

[目的]探讨丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)含量与丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)间的相关性.[方法]采用实时荧光定量PCR检测302例丙型肝炎患者血清中HCV RNA含量,同时采用ELISA法检测抗-HCV水平,利用全自动生物化学检测仪测定ALT水平.[结果]302例丙型肝炎患者血清标本中,抗-HCV均呈阳性,其中199份标本HCV RNA含量高于检测上限(103 U/mL),2种检测方法的符合率为65.9%.ALT异常率随HCV RNA含量的增高而升高,两者呈显著正相关(r=0.155,P<0.05);而ALT水平变化与HCV RNA含量无相关性(r=0.001,P>0.05).[结论]HCV RNA含量与抗-HCV水平是诊断HCV感染的重要指标,HCV RNA含量结合ALT水平测定可帮助临床了解HCV在体内复制的状况及肝脏损伤情况.

乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂性能评价要点

目的阐述乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的分析性能评价要点。方法结合体外诊断试剂现行法规和此类试剂自身的特点,对其标准品建立及分析性能评估中检测限、特异性、准确度、线性范围评估等方法进行了详细解析。结果与结论乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的分析性能评估应从试剂本身的定量特点出发,重点针对试剂定量的检测限、准确性、特异性等性能进行科学合理的评估。

乙型肝炎病毒核酸相关抗原在评价病毒复制中的应用价值

目的通过对乙型肝炎病毒核酸相关抗原(hepatitis B virus nucleic acid related antigen,HBV NRAg)与HBeAg和乙型肝炎病毒DNA(hepatitis B virus DNA,HBV DNA)之间的比较,探讨HBV NRAg在评价病毒复制中的应用价值。方法收集157例HBsAg阳性血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光微粒子免疫测定(CMIA)和荧光定量PCR法分别对血清进行HBV NRAg、HBeAg和HBV DNA含量检测。同时对188例HBsAg阴性血清进行HBV NRAg特异性检测。结果 157例HBsAg阳性血清中,HBV NRAg,HBeAg和HBV DNA阳性率分别为75.79%(119/157)、37.57%(59/157)和51.59%(81/157),HBV NRAg与HBeAg和HBV DNA比较,差别有统计学意义(χ2=19.88,P=0.000;χ2=46.69,P=0.000)。分别在HBeAg和HBV DNA阳性病例中,HBV NRAg S/CO值与HBeAg S/CO值和HBV DNA基因组拷贝数呈正相关(r=0.506,P=0.000;r=0.499,P=0.000)。在一致性评价中,HBV NRAg同HBeAg和HBV DNA两个指标联合用于评价病毒复制的一致性较好(Kappa=0.52),其阳性符合率为94.79%,总符合率为78.98%。HBV NRAgELISA检测特异性为99.40%。结论 HBV NRAg可作为临床评价HBV复制以及乙肝治疗效果监测的初筛指标,适合在各个层次的医院开展检测。

乙型肝炎血清免疫标志物、乙型肝炎病毒核酸水平变化与HBV的关系及临床意义

目的：探讨乙型肝炎血清免疫标志物、乙型肝炎病毒核酸水平变化与HBV的关系及临床意义。方法选取本院2013年2月∽2014年2月收治的108例乙型肝炎患者为研究对象,按HBV DNA含量高低分为A（〈103拷贝/ml）、B（103∽105拷贝/ml）、C（106∽108拷贝/ml）3组,分别检测3组的乙型肝炎血清免疫标志物（HBV M）与乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）含量。结果 A组的HBeAg为（3.971±14.47）S/CO,B组为（446.7±785.8）S/CO,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）；A组的抗-HBe、HBeAg、HBsAg与C组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）；B组的HBeAg与C组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）；3组的抗-HBs、抗-HBc比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。HBV M阳性标本中抗-HBs、抗-HBc与HBsAg含量与HBV DNA无相关性,抗-HBe与HBV DNA呈负相关,HBeAg与HBV DNA呈正相关。结论定量检测HBV DNA可真实反映HBV的复制情况,对于传染性评价、乙型肝炎诊治及疗效观察均具有指导意义；定量检测HBV M虽在HBV复制程度的判断及传染性评价方面无明显价值,但可为乙型肝炎数据管理奠定基础。

定量检测丙型肝炎病毒核酸的临床意义

目的 研究丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒（HCV-RNA）载量与抗-HCV含量以及丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平之间的相关性和符合性。方法 用FO-PCR法检测146例高度怀疑丙肝感染的血清中的HCV-RNA，同时检测抗-HCV和ALT.结果 146份标本中HCV-RNA阳性率为55．5％（81／146）;抗-HCV的阳性率为58．2％（85／146）;ALT异常率为54．8％（80／146）。HCV-RNA平均我量为6．98×10^5拷贝／ml血清。抗-HCV滴度和ALT异常率随着HCV-RNA载量升高而增加。结论 用FQ-PCR法检测HCV-RNA可以确定：（1）高滴度抗-HCV血清具有传染性；（2）抗-HCV与HCV-RNA之间呈正相关关系r=0．980，P〈0．001，且有符合性和互补性：（3）对慢性丙型肝炎长期抗-HCV阳性，若出现HCV-RNA阴性或阳性可以鉴别活动性、复制性程度；（4）评价抗病毒治疗效果的重要指标。

实时荧光PCR检测丙型肝炎病毒核酸及其临床意义

目的:探讨实时荧光PCR检测技术在丙型肝炎病原诊断及在监测干扰素-α治疗慢性丙型肝炎早期病毒学应答反应(EVR)中的临床意义。方法:采用一种新的丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)扩增(PCR)定量检测方法——实时荧光PCR检测HCV-RNA,对96％例慢性丙肝(其中20例随机接受Pegasys或Referon-α治疗,每例患者分别采集治疗前后系列血清7份)、30例其它肝病、15例非肝病和86例健康献血员的血清标本进行HCV-RNA检测,部分血清标本与Am-plicor(Roche)进行核对。结果:96例慢性丙肝患者血清HCV-RNA检出率为85.4％(82/96)、其它肝病、非肝病和健康献血员中均未检出HCV-RNA;部分标本经与Amplicor核对呈较好相关性,r(log)=0.91。随机接受Pegasys或Referon-α治疗的20例丙肝患者治疗前后EVR显示,前者的EVR似较后者明显,但因病例数太少,无明显统计学差异(G=4.467,P>0.05)。结论:实时荧光PCR检出的HCV-RNA载量可较客观地反映丙肝患者体内病毒复制水平,支持干扰素治疗慢性丙型肝炎EVR可用于预测长期疗效。

应用分子信标荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒核酸的评价

目的:分子信标(Molecular Beacon)是近年新发展的一种荧光标记发夹形寡核苷酸探针。本文目的在于对国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒(厦门泰伦生物工程有限公司的“乙型肝炎病毒荧光PCR定量检测试剂盒”)的主要性能进行评价。方法:以Roche公司的乙型肝炎病毒(HBV)定量检测试剂盒AMPLICOR HBV MONITOR^(TM) Test Kit为参比,对分子信标定量检测临床血清标本HBV DNA的结果,进行比较和分析。结果:根据两种试剂盒定量检测34份乙型肝炎和非肝炎血清及一份系列10倍稀释血清(含高水平HBV DNA)的数据,并以Roche试剂盒的结果为参比标准,分子信标试剂盒定量检测HBV DNA的相对敏感性、特异性和符合率均为100％(分别为:19/19,15/15和34/34);其定量检测HBV DNA的线性范围和下限分别为10~3～10~8 copies/ml和10~3 copies/ml;两种试剂盒定量检测HBV DNA的相关系数(r)=0.987。结论:初步结果表明:该国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒的主要性能,与Roche公司的AM-PLICOR HBV MONITOR^(TM) Test试剂盒相似,并具有较后者更宽的线性定量范围。

荧光定量PCR法检测丙型肝炎病毒核酸的临床意义

丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病,HCV感染可导致肝脏慢性炎症、坏死和纤维化,部分患者甚至可发展为肝硬化及肝癌[1],对人类的健康和生命危害极大,已成为严重的社会和公共卫生问题。抗-HCV检测可反映HCV的感染或既往感染,而HCV-RNA定量检测是反映HCV复制的特征指标,是抗病毒治疗的依据。本文对277例抗-HCV阳性患者同时进行HCV-RNA定量检测,

血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测在100例丙型肝炎患者诊断中的应用价值

[目的]探讨血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测在丙型肝炎患者诊断中的临床意义.[方法]选择2017年1月至2019年2月间接受检测的100例丙型肝炎患者作为研究对象,所有患者均接受单独血清丙型肝炎病毒核酸含量检测、肝功能检测及血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测,比较不同检测方法的阳性率并分析血清丙型肝炎病毒核酸含量与肝功能指标的相关性.[结果]血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测的阳性检出率显著高于单独血清丙型肝炎病毒核酸含量检测和肝功能检测(χ~2=19.151,P<0.01);胆碱酯酶正常组的前白蛋白及白蛋白水平均显著高于胆碱酯酶轻度异常组和胆碱酯酶异常组,相关性分析结果显示,血清胆碱酯酶与前白蛋白、白蛋白呈正相关(r=0.725,0.806,P<0.05).[结论]血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测在丙型肝炎的诊断中有较高的阳性检出率.

柳州市血清学标志阴性急性肝炎的戊型肝炎病毒核酸(HEV RNA)检测及序列分析

目的了解血清学标志阴性急性病毒性肝炎中的戊型肝炎病毒核酸(HEV RNA)检出率和部分核苷酸序列。方法采用异硫氰酸胍一步法提取 HEV RNA,然后进行逆转录套式聚合链反应(RT-n PCR)扩增。并用直接测序法对部分HEV RNA逆转录PCR产物进行核苷酸序列测定。结果 18例血清学标志阴性的急性肝炎病人血清中,HEV RNA阳性7例,为38.9％(7/18),序列测定 85.7％(6/7)为典型中国株,并检出1例变异株。结论在血清学标志阴性病毒性肝炎中,还应进行RNA检测,以排除已知病毒,发现变异株。

慢性乙型肝炎患者干扰素治疗过程中乙型肝炎病毒核酸定量检测的临床意义

目的 观察慢性乙型肝炎患者干扰素治疗过程中乙型肝炎病毒核酸 (HBV DNA )的动态变化及其与乙型肝炎e抗原 (HBeAg)和血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)的关系。 方法 对 15例慢性乙型肝炎患者用美国生产的a 2b干扰素治疗 ,疗程 8个月 ,不用其他辅助药物 ,并检测HBV DNA浓度、乙型肝炎三系 (HBV M )和ALT的变化。结果 干扰素治疗后 ,HBV DNA水平呈进行性下降 ,HBeAg转阴率为 5 3.3% ,ALT复常率为 73.3%。 结论 动态观察慢性乙型肝炎患者干扰素治疗前后HBV DNA水平 ,可确切了解患者的感染状态 ,有助于病例的选择和疗程预后的估计。该指标的变化比HBeAg转阴更敏感 ,治疗期间应辩证地对待ALT的变化。

聚合酶链反应技术在定量检测丙型肝炎病毒核酸中的应用

目的:研究丙型肝炎患者血清中的丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)载量与抗-HCV含量以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的相关性。方法:应用聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量检测231份HCV-RNA临床标本,同时采用ELISA法检测抗-HCV,用生化分析仪测定ALT水平。结果:231份样本中有136份HCV-RNA含量高于80拷贝/ml血清,阳性率为58.9%(136/231);139份样本抗-HCV阳性,阳性率为60.2%(139/231);100份样本ALT异常,异常率为43.3%(100/231)。结论:应用FQ-PCR方法检测HCV-RNA特异性强、灵敏度高,具有良好的临床应用价值。

乙型肝炎病毒核酸两种PCR定量方法的比较

目的 选用PCR 杂交酶免疫法和荧光能量转换PCR法 ,对它们在乙型肝炎病毒 (HBV)DNA定量分析中的灵敏度、特异性及稳定性进行比较研究 ,以便寻求一种较为精确的定量PCR法。方法 分别用上述两种方法测定 2 0份正常人和 30份慢性乙型肝炎病人血清中HBVDNA的含量 ,在检测过程中 ,用罗氏Amplicor法作为阳性参照 ,衡量实验体系的稳定性。结果 1.灵敏度 :两种方法的灵敏度很接近 ,PCR 杂交酶免疫法为 4× 10 3 拷贝 /ml,而荧光能量转换PCR法为 3× 10 3 拷贝 /ml。 2 .特异性 :所有HBsAg、HBeAg、抗 HBs和抗 HBc均为阴性的血清 ,用两种PCR方法比较 ,结果相同 ,血清中HBVDNA均为阴性。 3 .稳定性 :重复实验结果表明 ,PCR 杂交酶免疫法优于荧光能量转换PCR法 ,它们的变异系数分别为 31.33 %和 5 2 .0 6 % ,两种PCR方法均显示出良好的线性关系。结论 PCR 杂交酶免疫法是一种较为精确的定量PCR方法 ,可用于检测病毒DNA的复制情况 ,并对评价药物的疗效和疾病的转归 。