乙型肝炎病毒感染的遗传学研究

乙型肝炎病毒感染的遗传学研究方小武黄天华谢庆东汕头大学医学院生殖生物研究室汕头市５１５０６３乙型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＢＶｉｒｕｓ，ＨＢＶ）感染是病毒性乙型肝炎的病原学基础。随着研究的深入，学者们发现，ＨＢＶ感染不仅能引起肝细胞损害，而且能造成...

乙型肝炎病毒共价键闭环DNA的表观遗传调控研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染仍然是威胁全球人类生命与健康的重要危险因素。虽然目前的抗病毒治疗药物在控制乙型肝炎进展有显著疗效,但却始终无法达到根治HBV感染的目标。HBV共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)是HBV转录复制的原始模板,也是HBV持续感染的关键因素。但由于缺少有效的完全清除HBV cccDNA的治疗方法,慢性乙型肝炎患者需长期服药以防治疗后停药复发。研究证实HBV cccDNA的转录受表观遗传机制调控,其中cccDNA甲基化、组蛋白修饰、miRNA、染色质重塑等均影响HBV cccDNA的功能。本文就HBV表观遗传调控的最新研究进展进行综述。

炎症和免疫指标对乙型肝炎病毒感染相关慢加急性肝衰竭预后判断价值研究进展

乙型肝炎病毒感染相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)是在慢性乙型肝炎病毒感染导致的慢性肝病基础上,短期内出现急性肝功能失代偿的临床综合征。HBV-ACLF具有病情进展迅速、治疗效果差、死亡率高的特点。炎症和免疫应答是HBV-ACLF发生、发展及产生多器官、组织损伤的重要原因。本文对超敏C反应蛋白、降钙素原、白细胞介素类、淋巴细胞亚群类、趋化因子等炎症指标,以及超敏C反应蛋白/白蛋白比值、中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板/白细胞比值等多因素指标在HBV-ACLF病情及预后判断中的应用进行综述,发现动态观察炎症和免疫相关指标对HBV-ACLF预后判断、治疗方式选择等具有指导意义,且多因素指标判断HBV-ACLF患者预后的灵敏度及特异度优于单因素指标。炎症和免疫指标对HBV-ACLF患者预后判断具有指导意义。

甲胎蛋白在乙型肝炎病毒感染相关慢加急性肝衰竭诊治中的价值

乙型肝炎病毒感染相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus infection-related acute liver failure,HBV-ACLF)是在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染导致的慢性肝炎和终末期肝病基础上发生的以肝脏功能急性衰竭为特征的临床综合征,是中国最主要的肝衰竭类型,短期死亡率极高。基础研究发现甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)水平与HBV-ACLF短期预后相关,可用于预测肝衰竭患者的短期预后。临床研究发现由中性粒细胞、乙型肝炎病毒表面抗原和AFP组成的NHA-ACLF模型,由总胆红素、年龄、血肌酐、国际标准化比值和AFP组成的TACIA评分模型,含AFP的人工肝支持系统-预后模型(APM)以及AFP的四分位数分层等对HBV-ACLF短期预后预测价值优于单用AFP。

乙型肝炎病毒表面抗原清除影响因素的研究进展

近年来,随着各种抗病毒药物的使用及乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)疫苗和母婴阻断的广泛普及,慢性乙型肝炎(CHB)的防治取得了显著进步。但数据显示,2019年全球一般人群乙肝病毒表面抗原(HBsAg)流行率为3.8%,约有150万新发HBV感染者,2.96亿慢性感染者,82万人死于HBV感染相关疾病[1],HBV感染仍然是全球范围内威胁人类健康的重大公共卫生问题。但研究也表明HBsAg清除后持久性佳,复发率低,乙肝相关不良事件(肝癌、失代偿肝硬化、肝移植和/或死亡)发生率也显著下降[2],并且HBsAg清除是CHB患者最接近临床治愈[持续病毒学应答且HBsAg阴转伴或不伴有抗-HBs阳转、丙氨酸转氨酶(ALT)正常、肝组织病变轻微或无病变]的一个指标。而寻找有利于HBsAg清除的相关因素进行个体化治疗提高临床治愈率一直是临床关注的热点问题。因此本文主要从宿主、病毒、治疗方案等角度对与HBsAg清除有关的相关因素进行概述。

富马酸丙酚替诺福韦用于预防乙型肝炎病毒母婴传播有效性和安全性的系统评价

目的探讨富马酸丙酚替诺福韦(tenofovir alafenamide fumarate,TAF)预防乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)母婴传播的有效性和安全性。方法计算机检索PubMed、Cochrane Library、Embase、CNKI、WanFang Data、VIP数据库,检索TAF用于妊娠期妇女的研究,检索时限均为建库至2022年2月。由2名研究者独立完成筛选文献、提取资料、评价纳入研究的偏移风险后,采用Rev Man 5.4软件进行Meta分析。结果共纳入6篇文献,包括596例孕妇。Meta分析表明,TAF组母婴传播阻断率(RR=0.67,95%CI:0.12~3.75,P=0.65)、新生儿先天畸形率(RR=0.33,95%CI:0.01~7.91,P=0.50)及母亲产前HBV DNA水平(SMD=0.09,95%CI:-0.09~0.26,P=0.34)与富马酸替诺福韦二吡呋酯(tenofovir disoproxil fumarate,TDF)组相当。TAF组无严重不良反应发生,一般不良反应发生率低于TDF组,对肌酐影响(SMD=-0.90,95%CI:-3.22~1.42,P=0.45)与TDF组相似,但对尿β_(2)微球蛋白的影响较TDF组小。结论当前有限证据表明,TAF用于预防HBV母婴传播疗效与TDF相似,对肾功能影响较TDF小,提示针对HBV感染合并肾功能受损孕妇,TAF可能比TDF更合适。

乙型病毒性肝炎的诊断技术与药物治疗研究进展

乙型病毒性肝炎(HB)是临床上常见的疾病,由乙型肝炎病毒(HBV)感染而引起,在我国发病率较高。HB会造成不同程度的肝功能损害,严重者将造成肝功能衰竭、肝硬化甚至肝细胞癌,威胁患者的生命。因此,HB患者的早期诊断和治疗,在避免肝功能损害、提高生存期和改善预后方面具有重要的意义。目前HB的治疗以聚乙二醇干扰素(Peg-INF)和核苷酸类似物(NUC)为代表的抗病毒药物为主。虽然这些传统药物可以抑制HBV复制,延缓肝功能受损,但无法彻底清除病毒。随着医疗技术的发展,越来越多的检测技术和新型药物应用于HB患者的诊断与治疗,并取得了良好的临床效果。本文就近年来HB诊断技术与药物治疗的进展进行综述,旨在为HB的临床诊治及未来研究提供参考。

乙型肝炎病毒前S1蛋白与病毒复制的关系

目的探讨乙型肝炎病毒前S1蛋白(preS1)与乙型肝炎病毒血清标志物(HBV-M)以及HBV-DNA之间的关系;了解preS1在乙肝病毒感染及复制中的应用价值。方法应用ELISA法检测1254例preS1和HBV-M;应用荧光定量PCR法检测372例HBV-DNA。结果1254例中有573例preS1阳性,阳性率45.7%并且preS1阳性只存在于HBsAgHBeAgHBcAb(大三阳)、HBsAgHBeAbHBcAb(小三阳)、HBsAgHBcAb(小二阳)3种血清模式中,阳性率分别为96.0%、68.6%、81.4%,经χ2检验,3者之间差异极显著。分析372例HBV-DNA,有292例>1×104,其中preS1阳性268例,阳性符合率为91.8%,而HBeAg阳性符合率为53.4%;另外80例HBV-DNA<1×104病例中,preS1阳性率仍为50.0%,而HBeAg阳性率仅为2.5%。结论通过对preS1、HBeAg和HBV-DNA的检测分析,证实了preS1作为判断HBV病毒感染和复制的指标比单纯用HBeAg和HBV-DNA定量更敏感,更确切,更方便,是一项非常好的检测指标。

应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅱ结合蛋白

目的 通过筛选乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)结合蛋白 ,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HBV的表面抗原基因启动子Ⅱ的聚合酶链反应 (PCR)产物DNA作为固相筛选分子 ,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果 噬菌体经富集后 ,从随机筛选的 2 0个克隆中得到 4个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性分析 ,确定了和HBVSPⅡ结合的肝细胞蛋白———尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 4 (NADHDH4 )。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HBVSPⅡ的结合蛋白 ,分析了该蛋白的编码基因 ,为进一步研究HBV的复制、转录、调节机制开辟了新的途径。

Bcl-2和Bax在乙型肝炎病毒相关性肾炎患者肾组织中的表达

目的:观察Bcl-2和Bax在乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)患者肾组织中的表达情况。方法:选取肾病理资料完整的HBV-GN患者20例,对照组10例为基本正常肾组织。采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,并计算凋亡指数,免疫组化检测肾组织Bax和Bcl-2表达。结果:HBV-GN组较对照组肾细胞的凋亡指数明显增加,凋亡细胞多分布于近端、远端肾小管及集合管上皮细胞,肾小球少见。HBV-GN组Bcl-2主要见于肾小管上皮细胞表达,呈质、膜和核多部位阳性,Bax在肾小球、肾小管均有表达,主要定位于肾小管上皮细胞,包曼囊壁、肾小球系膜区少见。结论:HBV-GN细胞凋亡的主要发生部位是肾小管上皮细胞,Bax和Bcl-2多表达于肾小管上皮,提示肾小管间质的损害可能也是HBV-GN致病的重要机制之一。

乙型病毒性肝炎相关疾病患者住院经济负担及影响因素调查研究

目的调查乙型病毒性肝炎(乙肝)相关疾病患者住院经济负担及影响因素,为制定减轻疾病经济负担的卫生政策提供依据。方法采用时间阶段连续病例抽样方法,选择2012年8—12月因乙肝相关疾病在县级医疗机构住院的患者196例,其中急性乙肝3例、慢性乙肝141例、肝硬化代偿期18例、肝硬化失代偿期22例、肝癌12例,按照疾病经济负担理论和方法计算直接经济负担和间接经济负担。采用多元线性逐步回归法分析乙肝相关疾病患者住院经济负担的影响因素。结果 196例住院患者次均经济负担28 971元,其中直接经济负担19 916元(68.7%),间接经济负担9 055元(31.3%);直接经济负担中直接医疗费用19 087元(95.8%),直接非医疗费用829元(4.2%);间接经济负担中患者费用6 348元(70.1%),陪护费用2 707元(29.9%)。多元线性逐步回归分析结果显示,住院天数、药品比例、年龄、疾病类型与乙肝相关疾病患者住院经济负担有回归关系(P<0.05)。结论乙肝相关疾病患者住院经济负担较重,直接经济负担占主要部分,通过合理缩短住院天数、适当控制药品比例、延缓疾病进展可以降低经济负担。

隐匿性乙型肝炎病毒感染患者S基因突变特点分析

目的分析1例血清HBV DNA长期阳性但HBsAg阴性的隐匿性乙型肝类病毒感染(OBI)患者HBV S基因突变特点,揭示S基因突变与OBI发生及肝脏疾病进展的关系。方法收集该患者不同时间点的4份血清样本,扩增HBV S基因并进行克隆测序,挑选代表性突变株病毒基因构建重组载体并进行表型分析。结果从该患者4份血清样本中检出多种S基因突变形式,包括前S1区大片段缺失、s126–127"RPCMNCTI"插入突变、sQ129N、s131–133 TSM→NST和经典的sG145R突变等,其中s131–133 TSM→NST在前后4份动态样本的检测病毒克隆中所占比例分别为0%、26%、59%和74%;前S1区大片段缺失在4份样本检测病毒克隆中始终存在,所占比例分别为26%、17%、15%和21%。表型分析发现,sQ129N和s131–133 TSM→NST可以降低抗体对HBsAg的亲和力,增加病毒分泌;与野生株相比,前S1区大片段(nt 3046–3177)缺失病毒株复制力下降了43.7%,表面抗原启动子Ⅱ(SPⅡ)活性下降了97.2%;sG145R可降低病毒的分泌能力。结论此例HBV感染患者的长期OBI临床表现是由于其感染有多种S基因突变病毒株引起,其中一些S基因突变可以影响病毒的表型特点,可能与肝脏疾病进展密切相关。

聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性丙型肝炎病毒/乙型肝炎病毒共感染临床疗效

目的研究慢性丙型肝炎(CHC)与丙型肝炎病毒/乙型肝炎病毒(HCV/HBV)共感染者用聚乙二醇干扰素α-2a(PEG-IFNα-2a)抗病毒治疗疗效的观察。方法治疗前后定期采集31例CHC、30例HCV/HBV共感染者的外周血,检测HCV RNA、HBV DNA和肝脏纤维化指标。结果治疗后CHC患者血清中HCV RNA含量51.6%<102拷贝/ml,HCV/HBV共感染者HCV、HBV下降均不理想。结论 PEG-IFNα-2a抗病毒治疗HCV/HBV共感染者疗效较单纯丙型肝炎患者差,但对HBV、HCV有抑制作用,并部分改善机体免疫功能及肝功能。

乙型肝炎病毒核心基因启动子序列突变及准种

目的通过对乙型肝炎病毒(HBV)基本核心基因启动子(BCP)变异的研究,阐明HBV准种在慢性感染者中存在的意义。方法以中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自43例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV的BCP基因,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术展示缺失突变,DNA测序确定病毒的变异程度。结果聚丙烯酰胺凝胶电泳结果发现,57.8％患者血清中可见2-3条扩增条带;测序结果发现BCP区存在多种突变形式,点突变中以140nt(T→C)最为常见,缺失突变多见于TA1,TA2及TA3,多表现为8bp、20bp的缺失。结论 HBV BCP区内有一缺失高变区,并在患者个体体内存有多种变异形式;TA1,TA2及TA3的变异可能影响e抗原的表达。结果提示HBV慢性携带者体内有HBV准种共存。

隐匿性乙型肝炎病毒感染的检测及临床特点分析

研究不明原因性肝炎患者中隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染的巢式聚合酶链式反应(PCR)检测及HBV隐匿性感染的临床特点。不明原因性肝炎患者104例,收集临床资料及血清。HBV基因组S、X、C区分别设计2套巢式引物,比较扩增效率,挑选扩增效率高的引物巢式PCR扩增,检测出隐匿性HBV感染者。隐匿性HBV感染者与其它不明原因肝病患者易感因素、临床症状、体征、生化检查、影像学检查等方面比较分析。检测出隐匿性HBV感染13例。隐匿性HBV感染者较其它不明原因肝病患者年龄大,多为中老年患者,并且肝硬化比例明显高于后者。本组不明原因性肝炎患者中约有12.5%为隐匿性HBV感染。HBV隐匿性感染导致肝脏炎症,甚至肝硬化。

乙型病毒性肝炎患者门诊直接经济负担及影响因素调查

目的调查乙型病毒性肝炎(乙肝)患者的门诊直接经济负担及影响因素,为进一步完善医疗保障政策提供依据。方法采用时间阶段连续病例整群抽样方法,选择2012年8—12月于江苏省重大传染病综合防治示范区县级医疗机构门诊就诊的乙肝患者为调查对象,通过问卷调查乙肝患者的门诊直接经济负担,采用SPSS 19.0统计软件对乙肝患者的一般资料、次门诊费及年门诊费进行单因素及多因素线性回归分析。结果本调查共纳入乙肝患者436例,次门诊费平均670.0元,年门诊费平均12 714.0元。不同婚姻状况患者的检查费、次门诊费合计,不同经济状况患者的挂号费、检查费,不同医疗保障类型患者的挂号费、检查费,不同疾病类型患者的门诊费合计,抗病毒治疗和非抗病毒治疗患者的药品费、次门诊费合计比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同医疗保障类型患者年门诊费用中自付费比例间差异有统计学意义(χ2=49.307,P=0.000)。多因素线性回归分析显示,药品费、检查费、抗病毒治疗是次门诊费的影响因素;抗病毒治疗、次门诊费、年门诊次数、疾病类型是年门诊费的影响因素。结论乙肝患者门诊直接经济负担较大,抗病毒治疗加重了患者的经济负担;现行基本医疗保障制度对于门诊经济风险的分担效果有限,应将乙肝患者门诊抗病毒治疗纳入医疗保险统筹支付,通过早期治疗延缓疾病进展,从而降低社会负担。

自身抗体在乙型病毒性肝炎和自身免疫性肝炎中的特点分析

目的分析自身抗体在乙型病毒性肝炎及自身免疫性肝炎中的特点。方法将血清样本分为3组:乙型病毒性肝炎组(HBV)306例、自身免疫性肝炎组(AIH)235例和健康对照组150例,采用间接免疫荧光法和欧蒙印迹法检测血清中抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗肝肾微粒体Ⅰ型(LKM-1)抗体和抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)抗体等肝病相关自身抗体。结果 (1)HBV组和AIH组ANA检出率分别为9.1%、80.42%,明显高于健康对照组;AIH组ANA阳性率显著高于HBV组(P<0.05)。(2)HBV组ANA滴度1∶100、1∶320、1∶1 000阳性率分别为6.2%、2.6%、0.3%,以低滴度(1∶100)为主,AIH组1∶100、1∶320、1∶1 000滴度阳性率分别为22.98%、41.28%、14.47%,以高滴度(≥1∶320)为主。(3)HBV组AMA、ASMA、抗LKM-1及抗SLA/LP抗体的阳性率分别是0.3%、0.9%、0.3%和0%,AIH组的阳性率分别为36.6%、25.1%、23%和2.55%,明显高于HBV组。(4)AIH组荧光模型以核均质型和核仁型为主;HBV患者以颗粒型为主。(5)采用1999年诊断积分系统评估,28例自身抗体阳性乙肝患者中有1例评分超过16分,达到自身免疫性肝炎确诊标准(≥16分)。结论自身免疫性肝炎患者具有高滴度的自身抗体;乙型病毒性肝炎患者血清中低滴度的自身抗体不构成自身免疫性肝炎,高滴度的自身抗体要结合临床资料排除自身免疫性肝炎。

阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎过程中发生病毒突破患者的(HBV)P基因变异分析

目的观察阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)单药治疗慢性乙型肝炎(慢乙肝)过程中发生病毒突破的患者乙型肝炎病毒(HBV)P基因区变异发生情况。方法选取51例阿德福韦酯单药治疗(10 mg/d,疗程>12月)发生病毒突破的慢乙肝患者作为研究对象,分别检测随访发现病毒突破时患者的血清ALT、HBV DNA水平,并采用PCR产物直接测序法分析HBV P区基因的变异发生情况。结果51例患者中有37例检测出阿德福韦酯耐药相关变异,且rt181位点变异多于rt236位点(分别为33例和8例,其中两位点联合变异4例,P<0.001)。联合变异患者其血清HBV DNA水平高于单一变异患者[分别为(6.53±0.45)log10拷贝/mL、(5.37±1.08)log10拷贝/mL,P=0.043]。结论在应用阿德福韦酯单药治疗的慢乙肝患者中可筛选出HBV P基因区的相关耐药变异,不同耐药位点患者的HBV DNA水平可有差异。

乙型肝炎病毒反转录酶区rtI233V变异的演变及病毒学特点分析

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)反转录酶区rtI233V变异的演变规律及其与阿德福韦酯(ADV)耐药的相关性。方法分析9830例慢性HBV感染者血清样本中HBV rtI233V变异的检出率。选择其中2例代表性患者,动态收集血清样本,扩增HBV RT基因并克隆测序(>20个克隆/样本),观察rtI233V变异的演变过程。构建pTriEx-HBV(C)1.1倍野生株和3种变异株(rtI233V、rtN236T、rtI233V+rtN236T)复制子,瞬时转染HepG2肝癌细胞,分别加入不同浓度的拉米夫定(LAM)、ADV、恩替卡韦(ETV)和替诺福韦(TDF)。采用实时荧光定量PCR法检测不同浓度药物作用后细胞培养上清中HBV DNA的水平,分析变异病毒复制力与表型耐药的变化特点。结果9830例慢乙肝患者血清样本中共检出rtI233V位点变异28例,检出率0.28%,其中rtI233V单独变异19例,与rtN236T等经典耐药变异联合出现9例。该变异的检出患者均有ADV治疗史,其中16例(57.1%)接受ADV单药治疗6个月以上,12例(42.9%)接受包括ADV的多药序贯联合治疗1年以上。病毒复制力与表型耐药分析显示,rtI233V变异株的复制力与野生株接近,rtN236T变异株的复制力较野生株显著降低;rtI233V变异株对LAM、ADV、ETV和TDF均敏感,rtI233V+rtN236T联合变异对耐药性的影响不大,但rtI233V变异可明显恢复rtN236T变异株受损的复制力。结论rtI233V位点变异与ADV应答不佳相关,虽不直接降低病毒对ADV的敏感程度,但可增加经典ADV耐药病毒株的复制力,是一种复制力补偿变异。