乙型肝炎病毒e抗原与金属硫蛋白相互作用的研究

乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)被认为与乙型肝炎病毒 (HBV)引起免疫耐受 ,免疫系统功能障碍有关。为探讨HBeAg在乙型肝炎发病机制中的作用 ,寻找防治HBV感染的有效方法 ,应用酵母双杂交系统 3构建HBeAg诱饵质粒 ,转化酵母细胞AH10 9后 ,与含肝cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合、双杂交 ,在营养缺陷培养基 (SD/ Trp Leu His Ade)上及X α 半乳糖苷酶 (X α gal)蓝白斑双重筛选与肝细胞蛋白结合的蛋白 ,结果获得真阳性菌落 39个 ,提取酵母质粒转化大肠杆菌 ,测序后进行生物信息学分析 ,发现其中含金属硫蛋白(MT)基因的菌落有 3个。进一步用网织红细胞裂解物体外翻译、蛋白间免疫共沉淀实验证实 ,金属硫蛋白与HBeAg间有确切的结合作用。

乙型肝炎病毒E抗原、大蛋白与乙肝病毒DNA的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)表面E抗原(HBe Ag)、大蛋白(LHBs)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)的关系。方法分别检测109例HBe Ag阳性和116例HBe Ag阴性的乙型肝炎患者的LHBs、HBV DNA表达情况,并进行对比分析。结果 HBe Ag阳性组中,LHBs、HBV DNA的检测率分别为89.9%和84.4%,二者比较无统计学差异(P>0.05);HBV DNA定量与HBe Ag定量和LHBs均呈正相关(r分别为0.81、0.94,P均<0.05),不同HBV DNA载量组间HBe Ag定量和LHBs含量均有统计学差异(P均<0.01)。结论对HBe Ag阴性患者而言,LHBs能在一定程度上反映体内HBV的复制情况,可作为HBV DNA的补充,指导临床诊治和用药。

乙型肝炎病毒E抗原检测方法性能的初步评价

目的对采用电化学发光法测定乙型肝炎病毒E抗原(HBeAg)进行方法学性能的初步评价。方法严格参照美国临床及实验室标准协会(CLSI)EP10-A2文件,对电化学发光法测定HBeAg结果进行统计,计算其偏差、总不精密度及其截距、斜率、非线性、交叉污染率、漂移性,并与各浓度对应设定值作比较。结果HBeAg高、中、低值3种浓度分别为10.30、5.20、0.10COI,测定结果与均值偏倚分别为-0.02、0.00、0.00,总不精密度分别为0.311,0.00、0.00%,截距:0.00800,斜率:0.99720,交叉污染:0.15000,非线性:-0.01140,漂移:0.00400,(P>0.01)。结论德国Roch E-170全自动电化学发光分析仪测定HBeAg偏差、总不精密度均在允许范围内;有良好的线性关系,交叉污染率较低,稳定性很好,能满足临床常规检测需求。

慢性乙型肝炎患者病毒基因组与乙型肝炎病毒e抗原、肝功能关系分析

目的探讨乙型肝炎病毒基因组(HBV-DNA)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、肝功能的相关关系,为临床治疗提供参考。方法回顾分析401例患者的HBV-DNA、HBeAg、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,对HBVDNA与HBeAg进行相关性分析。根据患者的HBV-DNA、HBeAg水平进行分组,比较各组的ALT、AST水平差异。结果 (1)HBV-DNA与HBeAg的阳性率存在相关性,相关系数r=0.671(P<0.01);(2)HBV-DNA载量达105 copies/mL时,血清ALT、AST较HBV-DNA阴性组及低载量组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);(3)在HBV-DNA载量相当时,HBeAg阳性组与阴性组ALT、AST活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论 (1)HBeAg与HBV-DNA具有相关性;(2)HBV-DNA载量较高的患者容易出现肝功能异常;(3)HBeAg的存在情况与肝功能无显著相关性。

乙型肝炎病毒e抗原阴性慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗

乙型肝炎病毒(HBV)e 抗原(HBeAg)阴性 HBV 感染是相当常见一个问题,是慢性乙型肝炎(CHB)的第二状态,是与HBeAg 阳性的 CHB 同等重要的一种 HBV 感染形式.前 C 区A83位点的替换突变和 CP 双替换突变是导致 HBeAg 阴性的两种形式,而准种漂变是形成 HBeAg 阴性 HBV 的主要原因。HBeAg 阴性 CHB 是一个推断性诊断,不具有特征性表现目前拉米夫定是较为理想的治疗 HBeAg 阴性 CHB 患者的抗病毒药物,IFNα治疗的远期疗效相对较差,但治疗是改变患者预后的一项重要手段.

乙型肝炎病毒e抗原真核表达载体的构建及在酵母中的表达

为探讨乙型肝炎病毒 (HBV)e抗原 (HBeAg)的功能 ,用多聚酶链反应 (PCR)的方法以HBVayw亚型全序质粒pCP10为模板扩增HBeAg基因 ,克隆到pGEM -T载体中扩增并测序 ,鉴定符合GenBank报告序列。用EcoRI和PstI双酶切后回收片段 ,连接到真核表达载体pGBKT7中并转化酵母AH10 9,在色氨酸缺陷型培养基 (SD/-Trp)上筛选阳性菌落。提取阳性酵母菌的蛋白质 ,进行十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)和Western免疫印迹分析 ,显示HBeAg基因在酵母细胞中表达 ,表达产物在胞内存在 ,相对分子质量 (Mr)为 43 0 0

乙型肝炎病毒e抗原与核心抗原调节靶基因的比较

目的利用基因表达谱芯片技术筛选、比较乙型肝炎病毒e抗原和核心抗原调节靶基因。方法利用分子生物学技术和生物信息学技术相结合,克隆HBeAg和HBcAg的编码基因,常规分子生物学技术构建相应的真核细胞表达载体pcDNA3.1-HBeAg和pcDNA3.1-HBcAg脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,利用基因表达谱芯片技术筛选转染细胞的差异表达cDNA的类型。结果对于2个基因转染细胞系差异表达基因谱的分析,HBeAg和HBcAg共同上调的基因1条;HBeAg和HBcAg共同下调的基因1条;未发现HBeAg上调,而HBcAg下调;或HBeAg下调,而HBcAg上调的基因类型;还有一些靶基因,或只受到HBeAg的调节,或只受到HBcAg的调节。结论应用基因表达谱芯片技术对于HBeAg和HBcAg反式调节的靶基因进行分析,可以发现HBeAg和HBcAg可引起体内多个系统相关的基因表达改变,两者在体内所调节的基因种类方面还有很大差异。

乙型肝炎病毒e抗原检测评价慢性乙型肝炎患者体内病毒复制的探讨

目的探讨乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)检测在评价乙型肝炎(下称乙肝)病毒复制中的价值。方法对湛江市妇幼保健院肝病专科306例慢性乙肝患者用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行血清学标志物检测和实时定量聚合酶链反应检测HBV DNA。结果125例HBeAg阳性标本中HBV DNA含量超过103copy/mL的有108例,占86.4%;181例HBeAg阴性标本中HBV DNA含量低于103copy/mL有101例,占55.8%。结论HBeAg阳性一般可以认为病毒在体内复制,但HBeAg阴性不能认为病毒在体内处于静止状态。HBV DNA定量测定是评价乙肝体内复制最可靠的指标。

乙型肝炎病毒e抗原的生物学功能及血清学转换的免疫学基础

目前在临床乙型肝炎的治疗中,乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)消失及其抗体的出现已成为重要的疗效指标。本文回顾了HBeAg的发现及其生物学和医学意义,对HBeAg与乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)的免疫原性进行了比较,阐述了HBeAg血清学转换的免疫学基础,并对出现HBeAg血清学转换的意义作了分析。

乙型肝炎病毒e抗原的B细胞表位预测

【目的】预测乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的B细胞表位。【方法】用Lasergene软件包中的Protean软件和吴玉章的氨基酸抗原指数预测法对HBeAg的氨基酸序列进行分析,预测其B细胞表位。【结果】推测最有可能的B细胞表位位于HBeAgN-端第50～63、85～94区段和第137～146区段内或它们的附近,其他区段如HBeAgN-端第12～18、24～32、37～43、118～124区段和第150～157区段内或它们的附近也可能存在B细胞表位。【结论】用多种方法预测HBeAg的B细胞表位,为制备更好的HBV感染者血清学检测相关诊断用品的研究提供线索。

阿德福韦酯联合拉米夫定治疗乙型肝炎病毒e抗原阳性慢性乙型肝炎患者40例临床观察

慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者血清内多存在高水平乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）DNA,如在早期不对其进行有效干预,易恶化形成肝硬化、肝癌,严重威胁患者生命。目前临床有多种CHB治疗方案,但均存在耐药问题。为解决耐药问题对抗病毒疗效的影响,

CYP2R1基因多态性与恩替卡韦抗病毒治疗乙型肝炎病毒e抗原血清学转换的相关性

目的 探讨维生素D代谢酶基因CYP2R1多态性与慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者恩替卡韦治疗后乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)血清学转换的相关性.方法 选择CHB患者65例,使用恩替卡韦治疗48 w,随访至72 w;根据治疗应答效果分为完全应答(CR)组和非完全应答(NCR)组,对两组患者CYP2R1 rs2060793和rs12794714进行基因分型.观察其疗效和血清HBeAg转换的情况.结果 治疗48 w后,30例为CR组,35例为NCR组.CYP2R1 rs12794714 TT基因型(OR=2.019,95%CI:0.982~4.319,P=0.035)可以预测恩替卡韦治疗完成后持续的HBeAg血清学转换.在恩替卡韦治疗48 w后,CYP2R1 rs12794714 TT基因型患者的HBV DNA含量明显低于非TT基因型患者含量(P<0.05).结论 携带T等位基因的CHB患者在恩替卡韦治疗后更容易获得HBeAg血清转换效果.

乙型肝炎病毒e抗原抑制Fas介导的肝细胞凋亡

目的探讨乙肝病毒e抗原(HBeAg)对Fas介导的人肝癌细胞株细胞毒作用及凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-HBeAg重组载体并筛选表达HBeAg的肝癌细胞株,通过CCK-8、TUNEL及AnnexinⅤ实验检测HBeAg对Fas激动型抗体(anti-Fas CH11)介导的HepG2、Huh7、Hep3B细胞毒作用及凋亡的影响;过表达p53后检测HBeAg对CH11介导的Huh7、Hep3B细胞凋亡的影响;p53基因沉默或过表达后,观察HBeAg对CH11介导的HepG2细胞凋亡的影响。通过Real-time PCR和Western blot检测HBeAg对p53及mFas mRNA和蛋白表达的影响。结果 HBeAg可抑制CH11介导的HepG2细胞毒性及凋亡(均P<0.05);过表达p53后,HBeAg可抑制CH11介导的Huh7和Hep3B细胞毒性及凋亡(均P<0.05);p53的促凋亡效应可被HBeAg抑制,且靶向p53基因沉默可阻断CH11介导的细胞凋亡(均P<0.05);HBeAg可下调p53蛋白并抑制mFas转录与表达(均P<0.05)。结论 HBeAg抑制Fas介导的肝细胞凋亡依赖于p53表达,可能与下调mFas受体机制有关。

时间分辨荧光免疫法乙型肝炎病毒e抗原定量测定试剂盒的研制与性能评价

目的对自研时间分辨荧光免疫法(TRFIA)乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)定量测定试剂盒进行性能评价。方法 2株单克隆抗体分别用于固相包被和铕标记,固相双抗体夹心二步分析法检测人血清HBeAg,并对自研试剂盒线性范围、精密度、分析灵敏度、特异度等进行评价,与对照试剂盒平行检测1 020例样本,检验结果采用线性回归分析,一致性采用Kappa检验。结果自研试剂盒线性范围为0.60～160 NCU/mL,相关系数达0.99,批内和批间变异系数均小于10%,灵敏度达0.05NCU/mL,检测国家标准物质或自制参考品的效价比为0.90～1.10,检测国家参考品符合国家的质量检定标准,37℃恒温箱烘烤6d后检测性能无明显改变,与同类试剂检测结果线性相关系数达0.95,临床研究试验总符合率达100%,Kappa指数为1。结论自研试剂盒精密度好、灵敏度高、准确性好、线性范围宽、符合率高,可取代对照试剂盒,值得推广应用。

乙型肝炎患者622例前S1抗原与乙型肝炎病毒e抗原乙型肝炎病毒-DNA的相关性探讨

前S1蛋白（PreS1）是组成乙肝病毒（HBV）外膜蛋白的重要成分之一，其含有肝细胞膜受体，对HBV附着于肝细胞和诱导特异性免疫应答具有重要作用[1-3]。近年来，作为一种新的HBV检测指标，PreS1的临床价值越来越受到人们的关注[4]。HBV血清标志物（HBV-M），即“乙肝三系”中的“e系统”作为临床上观察HBV存在及动态变化情况的常规检查项目，被得到广泛的应用。近年来随着HBV变异导致乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）检测阴性比率的增高，为了寻求新的更能反应乙肝病毒动态变化的免疫学指标，了解PreS1蛋白在HBV患者中的表达及与HBV-M以及HBV-DNA之间的关系，本研究对622例乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性的乙型肝炎携带者及患者的血清样本进行检测分析，并对HBeAg检测结果和PreS1检测结果不一致的样本，进一步进行HBV-DNA检测。结果报告如下。

慢性乙型肝炎病毒e抗原阳性患者HBV基因分布及抗病毒治疗研究

目的分析慢性乙型肝炎病毒e抗原阳性患者HBV基因分布情况,比较其与不同抗病毒药物之间相关性.方法选择110例乙肝病毒e抗原为阳性的慢性乙肝患者,按照确认HBV基因分型随机平均分为恩替卡韦组和干扰素组,经过1 a治疗周期后,比较两组患者临床特点、HBe Ag及HBV DNA转阴率,分析变异的HBV基因.结果 110例慢性病毒性乙肝患者中HBV基因分型包括30例B基因型(27.27%)、74例C基因型(67.27%)、其他基因型6例(5.45%).B基因型中轻度慢性乙型肝炎患者(43.33%)高于C基因型(15.71%),差异具有统计学意义(P<0.05);而C基因型的肝硬化失代偿期患者(29.73%)与B基因型比较差异具有统计学意义(P<0.05);HBV B基因型感染患者的HBe Ag转阴率、HBV DNA转阴率恩替卡韦组与干扰素组比较差异无统计学意义(P>0.05);干扰素组HBV C基因型感染患者的HBe Ag转阴率、HBV DNA转阴率优于恩替卡韦组,差异具有统计学意义(P<0.05).所有入组患者接受治疗期间4例发生基因型变异的均为恩替卡韦组中C基因型患者,与干扰素组比较差异无统计学意义(P>0.05).4例中有2例变异基因位点为rt L180M+rt M204V+rt L184L,其余2例是在rt L180M+rt M204V+rt S202G位点产生的变异.结论 HBe Ag阳性慢性乙型肝炎患者HBV多为C基因型,对于此类基因型临床可首选长效干扰素进行抗病毒治疗.

不同乙型肝炎病毒e抗原表达的慢性乙型肝炎患者T细胞亚群水平差异性分析

目的分析不同的乙型肝炎病毒e抗原(HBe Ag)表达的慢性乙型肝炎患者T细胞亚群水平差异。方法选择2014年10月—2015年12月于黑龙江省大庆市第二医院就诊的慢性乙型肝炎患者65例。根据HBe Ag的表达分为阴性组30例,阳性组35例。比较两组CD3、CD4、CD、CD4CD25百分率。结果 HBe Ag阳性组CD8(31.2±5.6)%、CD4CD25(31.8±5.5)%高于阴性组高于阴性组CD8(27.6±5.3)%、CD4CD25(28.6±4.7)%,差异均有统计学意义(t=2.6595、2.5293,P=0.0078、0.0114)。结论不同HBe Ag表达的慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞水平差异有统计学意义,且HBe Ag表达阳性者更为显著。

乙型肝炎病毒e抗原的研究进展

乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)是乙型肝炎核心抗原的可溶性成分,为HBV复制和具有传染性的标志。HBeAg可与人白细胞抗原协同,并调节宿主的免疫应答,在HBV病毒的清除中发挥重要作用。同时HBeAg对HBV DNA的复制具有调节作用。在临床实践中,HBeAg的检测对指导乙型肝炎的诊断和治疗也具有十分重要的临床意义。HBeAg变异后出现的HBeAg阴性慢性乙型肝炎具有特殊的临床特征,使其越来越受到重视。

三种酶联免疫吸附试验法试剂对低值乙型肝炎病毒e抗原检出的比较

乙型肝炎病毒e 抗原（HBeAg）为一种可溶性蛋白抗原 ,是乙型肝炎（HBV） 活动性复制和有传染性的重要标志 ,HBeAg 检测对于乙型肝炎的诊断、机体免疫状态的评价及病程的转归具有重要意义.目前广泛应用的酶联免疫吸附试验（ELISA）法存在不同的特异性和敏感性的差异 ,且结果仅可提示抗原是否存在.微粒子酶免法（MEIA）为一种新的检测方法 ,可半定量地检测HBeAg , MEIA 法特异性强和敏感高 ,更客观地反映其存在情况[1].本研究对720 份血清HBeAg 在半定量检测同时进行了定性检测 , 根据MEIA 半定量结果及3种ELISA 定性试剂检测结果比较 ,可以得到ELISA 定性检出低值血清HBeAg 的符合率.

乙型肝炎病毒e抗原阴性的乙型肝炎患者乙型肝炎病毒大蛋白检测分析的意义

乙型肝炎病毒大蛋白（hepatifisBviruslargeenvelopeprotein，HBV．LP）存在于感染性颗粒（Dane颗粒）和亚病毒管状颗粒上，是病毒形成完整外膜的重要标志，与病毒复制、病毒颗粒组装和从细胞内释放调节密切相关。近年来，发现它对反映乙型肝炎病毒（HBV）在体内感染及复制状况具有越来越重要的临床意义[1-51。本文对乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）阴性的乙型肝炎患者血清标本分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测HBV．DNA、酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测HBV．LP。对HBV．LP在反映HBV感染与复制等方面的作用进一步研究，现报告如下。