从细胞自噬角度探讨紫草多糖抑制H22肝癌实体瘤细胞增殖的作用机制

目的:探讨紫草多糖是否通过诱导自噬而抑制H_(22)肝癌实体瘤细胞的增殖。方法:将40只KM小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组(阳性药物,30 mg/kg,ip,每4 d给药1次)和紫草多糖低、高剂量组(100、300 mg/kg,ig,每天给药1次),每组10只。各组小鼠均腋下接种H_(22)细胞株复制H_(22)肝癌实体瘤模型,造模同时各给药组小鼠给予相应药物,模型组小鼠ig等体积生理盐水。末次给药后,记录并测定小鼠体质量、瘤质量系数和胸腺、脾脏指数;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法测定小鼠瘤组织中自噬相关基因Atg5、Beclin1 m RNA表达水平;Western blot法测定瘤组织中自噬微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)蛋白表达水平。结果:紫草多糖可显著降低H_(22)实体瘤小鼠的瘤质量系数,抑瘤率达34.7%;可显著上调瘤组织中自噬相关基因Atg5、Beclin1 m RNA的表达和LC3A/B蛋白的表达,较模型组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:紫草多糖通过促进肝癌细胞的自噬,从而抑制H_(22)肝癌实体瘤细胞的增殖、延缓肿瘤生长。

水蛭素活性因子对荷瘤鼠肝癌及Th1/Th2类细胞的影响

目的探讨水蛭素活性因子对肝癌实体瘤及Th1/Th2类细胞因子的作用机制,为临床用药提供理论依据。方法取小鼠48只,随机分为模型对照组、5-Fu组、水蛭素活性因子大剂量组、水蛭素活性因子小剂量组。接种H22肝癌瘤细胞,连续用药14 d,剥离肿块,比较各组肿瘤生长情况,并计算抑瘤率。取肝癌实体瘤组织标本,提取细胞总RNA进行Th1/Th2类细胞因子检测,紫外分光光度计测出光值。并进行反转录(RT)反应、聚合酶链反应(PCR)、电泳鉴定,定量分析,图像输入分析系统,进行表达强度分析。结果水蛭素活性因子对小鼠肝癌实体瘤具有明显的抑制作用,大剂量组和小剂量组抑制率分别为46%和43%。荷瘤鼠用药后,IL-2、IFN-γ细胞因子呈高表达,IL-4、IL-10细胞因子呈低表达。结论水蛭素活性因子能提高荷瘤鼠IL-2、IFN-γ细胞因子的抗癌水平,使机体由Th2类细胞向Th1类细胞逆转,增强了细胞的免疫应答能力。

黄连解毒汤抗肿瘤作用的实验研究

目的:研究黄连解毒汤的抗肿瘤作用。方法:采用H22小鼠肝癌实体瘤移植性肿瘤模型进行体内实验,通过检测抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数等指标观察黄连解毒汤的体内抑瘤作用及对免疫器官的影响。并运用血清药理学方法研究了对人结肠癌Swille,人肺腺癌SPC-A-1,人胃癌SGC-7901,人乳腺癌细胞MCF-7体外生长的抑制作用。结果:对荷瘤小鼠肝癌H22在体内有抗肿瘤活性,抑瘤率大、中、小剂量组分别为45·45%(P<0·001),28·73%(P<0·05),17·78%。含药血清在体外用MTT法测试结果显示,对4种人瘤株,大、中剂量组抑瘤作用均呈现极显著差异(P<0·001)。结论:黄连解毒汤对H22小鼠肝癌实体瘤有一定的体内抗肿瘤活性,并具剂量依赖性;其含药血清体外对4种人的肿瘤细胞也有一定抑制作用。

中药水蛭素对荷瘤鼠Ki-67与VEGF表达的影响

目的分析Ki-67增生抗原与VEGF细胞因子在荷瘤鼠组织中的表达,探讨其与肿瘤的内在关系。方法取小鼠48只,随机分成4组,左前腋下接种H22肝癌瘤细胞0.2毫升/只。连续用药水蛭素,第15天处死动物,剥离肿块称重。同时取荷瘤鼠肿块组织固定、包埋、切片、染色、孵育、滴加抗体等,用免疫组化法检测Ki-67增生抗原与VEGF细胞因子的表达。Ki-67阳性表达定位于细胞核,VEGF阳性表达定位于细胞质。结果Ki-67与VEGF模型对照组呈强阳性;水蛭素大剂量组呈弱阳性;水蛭素小剂量组呈阳性。结论水蛭素能抑制荷瘤鼠肝癌实体瘤Ki-67增生抗原与VEGF细胞因子的高表达,具有明显的抗肿瘤作用,这与中药水蛭素活血化瘀及强大的抗凝血功效有密切关系。

辽东楤木叶总皂苷对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

目的:研究辽东楤木叶总皂苷对荷瘤小鼠抑瘤作用的效果,初步探讨其体内抑瘤作用机制。方法:采用小鼠H22肝癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验,测定肿瘤生长抑制率,利用光镜、电镜等方法进行形态学观察,是否产生凋亡小体。结果:辽东楤木叶总皂苷对小鼠的H22实体瘤生长具有明显的抑制作用,形态学观察显示,治疗组与对照组比较,肿瘤团块较小,异型性不明显,病理性核分裂和间质血管较少,淋巴细胞浸润明显。电镜下可见凋亡小体形成,其中以总皂苷组最明显。结论:辽东楤木叶总皂苷对荷瘤小鼠具有较强的体内抗肿瘤作用,作用机制可能与其能够抑制肿瘤细胞分裂、增殖及能够诱导肿瘤细胞凋亡有关。

肿节风与氟尿嘧啶联合应用的抗肿瘤作用

目的:研究肿节风注射液与氟尿嘧啶(5-Fu)联合应用对小鼠移植性肝癌H22实体瘤生长的抑制作用。方法:建立小鼠H22实体瘤模型。小鼠60只,随机分为6组:正常对照组、肿节风注射液小剂量组(1.5g/kg,ip)、大剂量组(3g/kg,ip)、5-Fu组联合用药组。小鼠接种24h后开始给药,每天1次,连续10d。观察各组小鼠移植瘤生长情况及体重变化。并考察给药后胸腺、脾脏指数、外周血象的变化。结果:肿节风注射液小剂量组抑瘤率为26.84%,肿节风注射液大剂量组抑瘤率为44.74%,5-Fu组抑瘤率30.77%,联合用药组抑瘤率分别为58.39%与65.16%,与正常对照组比较,均有显著性差异(P<0.01);联合用药组抑瘤率高于单用肿节风注射液组和5-Fu组(P<0.01)。且联合用药对胸腺、脾脏指数、外周血象无明显影响。结论:肿节风注射液和5-Fu联用对小鼠移植性肝癌H22实体瘤有协同抗肿瘤作用,并能减轻5-Fu的毒副作用。

壳寡糖对小鼠微循环及移植性肿瘤的影响

目的探讨壳寡糖的作用机制。方法观察壳寡糖对小鼠耳廓小动脉的血流变化,对S180肉瘤的影响和对肝癌H22实体瘤的影响。结果壳寡糖能加快小鼠耳廓小动脉的血流速度,对S180肉瘤和肝癌H22实体瘤具有明显的抑制作用。结论壳寡糖对小鼠微循环和移植性肿瘤具有显著的影响。

水蛭素活性成分对P^(53)基因及血管内皮刺激因子表达的影响

目的:探讨水蛭素活性成分抗肿瘤的作用靶点,为临床用药提供理论依据。方法:①肝癌实体瘤实验:取小鼠左前腋下接种H22肝癌瘤细胞0.2ml/只,次日开始灌胃给药,模型对照组给予生理盐水,阳性对照组给予5-FU,中药组分别给予不同剂量的水蛭素活性成分,连续用药14d,于第15d处死动物,剥离肿瘤。②P53基因与血管内皮刺激(VEGF)因子表达:将剥离的肿瘤组织固定于福尔马林溶液中,包埋,切片,染色,进行免疫组化。P53基因阳性表达定位于细胞核,染色呈棕褐色。血管内皮刺激因子阳性表达定位于细胞浆,染色呈棕黄色。高倍镜下随机观察5个视野,每个视野计数200个细胞,阳性细胞占肿瘤细胞数的多少分为:细胞核内和细胞浆内未见染色颗粒为阴性(-),百分数在11～30%之间为弱阳性(+),百分数在31～50%之间为阳性(++),百分数平均大于50%为强阳性(+++)。结果:实验表明,水蛭素活性成分对H22肝癌实体瘤具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为49.46%和38.83%;同时,水蛭素活性成分能抑制荷瘤鼠P53基因与血管内皮刺激因子的高表达。结论:水蛭素活性成分对H22肝癌实体瘤P53基因及血管内皮刺激因子具有显著的影响。

芝莲化癥颗粒对荷瘤小鼠的免疫功能效应研究

目的:对芝莲化癥颗粒影响荷瘤小鼠的免疫功能进行科学的实验研究,为确定该制剂的功能主治和临床疗效提供依据。方法:制备H22肝癌实体瘤荷瘤小鼠模型,选取主要指标:巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数,溶血素、溶血空斑的形成,外周血淋巴细胞转化率,进行各项对比实验。结果:芝莲化癥颗粒以30 g·kg-1、15 g·kg-1、7.5 g·kg-1的剂量给荷瘤小鼠连续10天灌服,中剂量组可显著提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数,大剂量组可显著促进荷瘤小鼠溶血素及溶血空斑的形成,可显著提高荷瘤小鼠外周血淋巴细胞转化率。结论:芝莲化癥颗粒能够显著提高感染H22肝癌实体瘤小鼠的肌体免疫力,其功能主治项可以描述为:能够显著提高肌体免疫力,缓解肝细胞癌对肝脏的损害,延长生存期。