原发性肝癌组织长链非编码RNA JPX、微小RNA-371a-5p表达水平及其与患者术后5年预后关系研究

目的:探讨原发性肝癌组织长链非编码RNA(lncRNA)JPX、微小RNA-371a-5p(miR-371a-5p)表达水平及其与患者术后5年预后的关系。方法:选取行根治术治疗的105例原发性肝癌患者的癌组织以及距离癌组织3 cm的癌旁正常组织。RT-qPCR检测组织中lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA JPX与miR-371a-5p的靶向关系。术后随访5年根据生存情况将患者分为生存组(64例)和病死组(41例)。比较肝癌组织和癌旁正常组织lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平。比较生存组和病死组临床病理特征及lncRNA JPX、miR-371a-5p水平。Pearson法分析lncRNA JPX、miR-371a-5p水平与肝内转移、肿瘤分化程度、中国肝癌分期(CNLC)、血管侵犯的相关性。多因素Cox回归分析原发性肝癌患者术后5年预后影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析肝癌组织lncRNA JPX、miR-371a-5p对患者术后5年生存的预测价值。结果:肝癌组织中lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平较癌旁正常组织升高(均P<0.05)。lncRNA JPX可正向调控miR-371a-5p表达。lncRNA JPX、miR-371a-5p高表达患者5年总生存率分别低于lncRNA JPX、miR-371a-5p低表达患者(均P<0.05)。生存组无肝内转移、肿瘤高/中分化、CNLCⅠ-Ⅱ期、无血管侵犯患者比例高于病死组,且lncRNA JPX和miR-371a-5p表达水平低于病死组(均P<0.05)。有肝内转移、肿瘤低分化、CNLCⅢa期、有血管侵犯、lncRNA JPX高表达、miR-371a-5p高表达是原发性肝癌患者术后5年生存的独立危险因素(均P<0.05)。肝癌组织lncRNA JPX与miR-371a-5p呈正相关,两者与肝内转移、CNLC分期、血管侵犯呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关(均P<0.05)。lncRNA JPX、miR-371a-5p联合预测患者术后5年生存的曲线下面积(AUC)大于lncRNA JPX及miR-371a-5p单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:原发性肝癌组织lncRNA JPX、miR-371a-5p呈高表达,lncRNA JPX可正向调控miR-371a-5p,两者是患者术后5年生存的独立危险因素,对术后5年生存的预测价值较高。

血浆肝癌微血管侵袭相关的长链非编码RNA对子痫前期的预测价值

目的研究肝癌微血管侵袭相关的长链非编码RNA(LncRNA MVIH)在子痫前期患者血浆中的表达,探讨其单独或联合其他指标对子痫前期的预测价值。方法选取本课题组在研项目孕期前瞻性队列留取的2016年12月至2018年4月间孕7~16周患者血浆标本,根据妊娠结局有无子痫前期进行分组,将产妇分为子痫前期组和正常对照组,进行病例对照研究。收集产妇孕早期相关临床资料及血浆,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)法检测两组患者血浆LncRNA MVIH表达水平,对所有统计指标进行单因素分析,将具有统计学差异的指标进行Logistic回归分析,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析各独立危险因素及回归模型对子痫前期的预测价值。结果孕16周前体质量指数(BMI)、收缩压、舒张压、平均动脉压(MAP)、白细胞、血红蛋白、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血尿酸、尿蛋白与子痫前期呈正相关,LncRNA MVIH与子痫前期呈负相关。具有预测价值的独立标志物依次是LncRNA MVIH、尿酸、白细胞、ALT、尿蛋白,预测子痫前期的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.763、0.741、0.663、0.666、0.601,联合方程AUC为0.890,敏感度和特异度分别为86.4%和83.1%,准确度为84.7%。结论血浆LncRNA MVIH与子痫前期密切相关,且对子痫前期发生有一定的预测价值,联合LncRNA MVIH、尿酸、白细胞、ALT、尿蛋白可提高子痫前期预测率。

长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)尿路上皮癌相关基因1(UCA1)在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测UCA1在正常乳腺上皮细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231中的表达.通过小干扰RNA(siRNA)构建UCA1低表达细胞株,质粒构建UCA1过表达细胞株,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、平板克隆法检测细胞增殖能力,qRT-PCR和蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)基因和蛋白表达量以及基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白表达情况,细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力.结果 与正常乳腺上皮细胞株MCF-10A相比,UCA1在乳腺癌细胞株中的表达均升高,以MCF-7细胞株最高;敲低UCA1可抑制MCF-7细胞的增殖、集落形成、细胞划痕愈合、迁移和侵袭(P﹤0.05),且cyclin D1基因和蛋白水平以及MMP2蛋白表达量均下调.过表达UCA1可促进MCF-7细胞的增殖、集落形成、细胞划痕愈合、迁移和侵袭(P﹤0.05),且cyclin D1基因和蛋白水平以及MMP2蛋白表达量均上调.结论 UCA1在乳腺癌细胞中表达升高,可能是通过调控cyclin D1和MMP2促进乳腺癌的增殖、迁移和侵袭.

长链非编码RNA HOTAIR在肝癌细胞生物学行为中的调节作用及其机制研究进展

反义转录长链非编码RNA-同源盒基因转录反义RNA(HOTAIR)是在肝癌细胞中第一个被发现的长链非编码RNA,其可通过调控表观遗传和染色质状态来调节其基因的表达水平,并影响肝癌细胞的生物学行为。其中,HOTAIR可通过与PRC2转录抑制复合物结合,使其相应靶基因甲基化,从而诱导和促进肝癌细胞的激活与增殖,或者通过竞争同种miRNA,参与靶基因的水平表达调节,来促进肝癌细胞的侵袭与转移。沉默HOTAIR可通过调控miR-217-5p活化磷酸化-磷脂酰肌醇3-激酶/磷酸化-苏氨酸蛋白激酶/基质金属蛋白酶-2/9信号通路及降低磷酸化信号转导和转录激活因子3的表达水平,促进肝癌细胞凋亡现象的发生。

白藜芦醇苷通过抑制长链非编码RNA HULC表达抑制肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的增殖和侵袭

原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,目前仍在寻找有效的治疗手段。我们之前的研究证实白藜芦醇苷能够抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,但其具体的分子生物学机制仍不清楚。本文主要探讨白藜芦醇苷调控肝癌细胞系SMMC-7721和Hep G2肝癌细胞系增殖能力的分子生物学机制。首先,我们构建大鼠原发性肝癌模型,发现模型组肝组织中长链非编码RNA HULC的表达较正常组明显升高;同时检测白藜芦醇苷预防组(分为低剂量组,中剂量组和高剂量组)肝组织中肝癌细胞中出现异常的高表达(HULC)的表达情况。结果显示,在中、高剂量组中HULC的表达明显降低。在体外实验中,SMMC7721和Hep G2中HULC的表达明显较正常肝组织显著增高,然而白藜芦醇苷高剂量组中HULC的表达发生明显降低,同时在SMMC7721和Hep G2中加入白藜芦醇苷后,高剂量组中细胞增殖能力明显下降。为了进一步探究HULC在白藜芦醇苷预防肝癌中的功能,我们构建了HULC过表达质粒以及针对HULC的siRNA片段,并验证了过表达和敲低的效率。在使用高剂量白藜芦醇苷处理SMMC7721和Hep G2的同时,过表达HULC能够逆转白藜芦醇苷引起的对细胞增殖的抑制,然而敲低HULC则能够更加有效地降低白藜芦醇苷对细胞增殖的抑制效果。这提示我们白藜芦醇苷能够可能通过调控HULC的表达抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,二者具有协同作用。本文结果为预防原发性肝癌提供了新的理论依据但其临床疗效还需要进一步验证。

长链非编码RNA膀胱癌相关转录因子1通过调控miR-5590-3p/SMAD5信号轴抑制喉鳞状细胞癌的增殖和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)膀胱癌相关转录因子1(bladder cancer-associated transcript 1,BLACAT1)在喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)中的表达及其对喉鳞癌细胞增殖、侵袭的影响及分子机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测45例喉鳞癌组织和对应的癌旁组织中BLACAT1和miR-5590-3p的表达,分析BLACAT1表达与临床病理学参数的关系。将BLACAT1 siRNA、对照siRNA及阴性对照和miR-5590-3p模拟物转染喉鳞癌Hep-2细胞,采用qRT-PCR检测BLACAT1、miR-5590-3p和母亲DPP同源物5(果蝇)[mothers against DPP homolog 5(Drosophila),SMAD5]的表达,CCK-8和Transwell小室检测Hep-2细胞增殖和侵袭的变化,双荧光素酶报告基因检测miR-5590-3p与BLACAT1和SMAD5之间的相互作用。结果 喉鳞癌组织中BLACAT1的表达水平(8.483±0.995)显著高于癌旁组织(1.099±0.019),差异有统计学意义(t=5.765,P<0.001)。在有淋巴结转移的喉鳞癌组织中BLACAT1的表达水平(12.50±1.772)显著高于无淋巴结转移组织(6.268±1.997),差异有统计学意义(t=3.319,P=0.0018)。BLACAT1的表达与淋巴结转移和组织学分级密切相关(P<0.01)。抑制BLACAT1的表达能够显著抑制Hep-2细胞的增殖和侵袭能力。miR-5590-3p在喉鳞癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,且miR-5590-3p表达的上调能够显著抑制Hep-2细胞的增殖和侵袭能力。此外,BLACAT1和SMAD5是miR-5590-3p的直接作用靶点,下调BLACAT1表达能促进Hep-2细胞中miR-5590-3p的表达和抑制SMAD5的表达,而miR-5590-3p模拟物能抑制Hep-2细胞中SMAD5的表达。结论 BLACAT1/miR-5590-3p/SMAD5调控轴可能在喉鳞癌细胞的增殖和侵袭中发挥重要作用,因而可能成为喉鳞癌患者潜在的治疗靶点。

长链非编码RNA在肝癌侵袭转移中的研究进展

长链非编码RNA(LncRNA)指一类不能编码蛋白质,其长度大于200个核苷酸的RNA分子。研究提示LncRNA通过多种分子机制途径在调控肿瘤生长、侵袭浸润和转移中发挥促进或抑制作用。肝癌术后复发转移是患者低生存率的主要原因,因此系统探讨促进或抑制肝癌侵袭转移的lncRNA的作用机制,有助于肝癌的靶向治疗、预测复发转移和预后判断。文中就LncRNA与肝癌侵袭转移相关机制的最新研究进行综述,以期为肝癌的防治提供新思路。

长链非编码RNA LINC02163在肝细胞肝癌中表达上调并促进肝癌细胞迁移和侵袭

目的研究长链非编码RNA LINC02163在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及肝癌细胞系中的表达及对肝癌细胞迁移、侵袭的影响。方法利用Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)检测LINC02163在5株肝癌细胞系(HuH-7、HCCLM3、MHCC-97H、SNU-182和SMMC-7721)、正常肝细胞系(L02)和60例肝癌组织及其配对癌旁组织中的差异表达情况,分析LINC02163的表达水平与肝癌患者临床病理参数的关系;利用LipofectamineTM 2000转染LINC02163小干扰RNA(siRNA)至HuH-7、HCCLM3肝癌细胞内敲低LINC02163表达;通过Transwell实验检测敲低LINC02163后肝癌细胞迁移、侵袭能力的改变。结果 LINC02163在肝癌组织中的表达水平明显高于配对癌旁组织(P<0.001);LINC02163在肝癌组织中的表达与TNM分期、微血管侵犯(MVI)明显相关(P<0.01);与正常肝细胞系(L02)比较,LINC02163在5株肝癌细胞系中高表达(P<0.001),其中在HuH-7细胞系中表达最高,其次是HCCLM3细胞系;肝癌细胞HuH-7、HCCLM3敲低LINC02163的表达后迁移和侵袭能力明显降低(P<0.01)。结论 LINC02163在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达上调,其可促进肝癌细胞的迁移和侵袭,故可能与肝癌的发生、发展密切相关。

长链非编码RNA FOXD2-AS1通过靶向miR-122-5p调控肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制

目的探究长链非编码RNA(LnRNA)FOXD2-AS1通过靶向微小RNA-122-5p(miR-122-5p)对肝癌细胞增殖和侵袭迁移的分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞系与正常肝细胞FOXD2-AS1与miR-122-5p的表达情况;双荧光素酶报告明确FOXD2-AS1与miR-122-5p的靶向关系;分别过表达或沉默FOXD2-AS1与miR-122-5p,采用甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞活性,Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力,Western印迹检测细胞增殖及侵袭迁移相关蛋白表达。结果与正常肝细胞HL-7702相比,肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2、BEL-7402中FOXD2-AS1表达水平显著升高(P<0.05),而miR-122-5p表达水平显著降低(P<0.05),且选取SMMC-7721细胞系进行后续实验。FOXD2-AS1过表达可明显抑制miR-122-5p表达,沉默FOXD2-AS1可显著促进miR-122-5p表达;miR-122-5p mimic还可明显减弱WT-FOXD2-AS1的荧光素酶活性;沉默FOXD2-AS1可显著抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭,且能显著抑制细胞增殖特异性周期蛋白(Cyclin)-D1及迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达;抑制miR-122-5p表达可明显减弱沉默FOXD2-AS1对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论沉默FOXD2-AS1可通过靶向上调miR-122-5p表达进而抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭。

长链非编码RNA UCA1对胰腺癌细胞系侵袭转移的影响

目的探讨尿路上皮癌相关1(UCA1)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞侵袭转移的影响。方法用荧光定量PCR检测11例胰腺癌组织和配对的癌旁组织及5种胰腺癌细胞系中UCA1的表达,通过RNA干扰技术降低胰腺癌细胞系Bx PC-3的UCA1水平,用Transwell侵袭实验和划痕实验观察Bx PC-3细胞的侵袭和迁移能力,Western blot检测MMP-2和MMP-9的蛋白水平。结果胰腺癌组织的UCA1水平高于相应的癌旁组织(P<0.05),UCA1差异性表达于5种胰腺癌细胞系;干扰UCA1后,Bx PC-3细胞的MMP-2和MMP-9的蛋白水平均降低(P<0.01),侵袭能力和迁移能力明显减弱(P<0.01)。结论 UCA1在胰腺癌中高表达,下调UCA1通过降低MMP-2和MMP-9的表达减弱胰腺癌细胞系Bx PC-3的体外侵袭转移能力。

敲低长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制TPC-1甲状腺乳头状癌细胞上皮间质转化及其侵袭和迁移

目的检测甲状腺乳头状癌组织长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(AFAP1-AS1)的表达,敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,研究其对TPC-1细胞上皮间质转化(EMT)的影响及相关分子机制。方法采用实时定量PCR检测60例甲状腺乳头状癌组织lncRNA AFAP1-AS1表达;利用RNA干扰技术(RNAi)敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,设置AFAP1-AS1敲低(shAFAP1-AS1)组和阴性对照RNA(shNC)组及未转染的TPC-1细胞为对照组。通过集落形成实验检测TPC-1细胞集落形成能力、 TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;通过实时定量PCR检测敲低AFAP1-AS1后,细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β联蛋白(β-catenin)、锌指转录因子snail2的mRNA水平, Western blot法检测其蛋白水平。结果与癌旁组比较,甲状腺乳头状癌组中AFAP1-AS1 mRNA表达水平显著增加;敲低AFAP1-AS1后, TPC-1细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力均显著降低;与shNC组和对照组相比,敲低AFAP1-AS1后,细胞snail2、 vimentin和β-catenin的mRNA和蛋白表达显著降低,而E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著增加。结论 lncRNA AFAP1-AS1在甲状腺乳头状癌组织高表达,敲低TPC-1细胞AFAP1-AS1后,癌细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力显著下调,可能与抑制细胞EMT过程有关。

长链非编码RNA HOTAIR,H19,HULC联合检测对HBV相关肝癌的诊断价值

目的探讨长链非编码RNA HOTAIR,H19,HULC联合检测对HBV相关肝癌的诊断价值。方法将早期HBV相关肝癌患者120例作为肿瘤组、健康体检者120例作为对照组。通过实时荧光定量PCR检测长链非编码RNA HOTAIR,H19,HULC的表达量。用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)的AUC分析长链非编码RNA HOTAIR,H19,HULC表达量在早期HBV相关肝癌中的诊断意义。结果HBV相关肝癌患者血清中长链非编码RNA HOTAIR,H19,HULC的表达量均高于健康体检者(P<0.05)。长链非编码RNA HOTAIR,H19,HULC鉴别早期HBV相关肝癌患者与健康人群的灵敏度分别为86%,89%,91%,特异度分别为85%,90%,93%;长链非编码RNA HOTAIR,H19,HULC联合鉴别诊断早期HBV相关肝癌的灵敏度为91.67%,特异度为93.33%,准确度为92.50%。结论长链非编码RNA HOTAIR,H19,HULC的表达量可作为诊断早期HBV相关肝癌的潜在标志。

长链非编码RNA MALAT1在骨肉瘤细胞中的表达变化及其对细胞侵袭能力的影响

目的探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录物1(lncRNA MALAT1)在骨肉瘤细胞中的表达变化及其对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响。方法 (1)采用qRT-PCR法检测骨肉瘤MG-63细胞及正常成骨细胞系h FOB1.19中的lncRNA MALAT1表达。(2)将MG-63细胞随机分为MALAT1沉默组和MALAT1非沉默组,分别转染MALAT1-siRNA质粒及con-siRNA质粒;转染48 h,采用qRT-PCR法检测lncRNA MALAT1表达,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测ROCK1蛋白表达。(3)将MG-63细胞随机分为对照组、MALAT1沉默组、MALAT1沉默+ROCK1对照组及MALAT1沉默+ROCK1过表达组,分别转染con-siRNA质粒、MALAT1-siRNA质粒、MALAT1-siRNA+pcDNA质粒、MALAT1-siRNA+oe-ROCK1质粒;转染48 h检测各组ROCK1蛋白表达和细胞侵袭能力。结果 (1)MG-63细胞lncRNA MALAT1相对表达量高于hFOB 1.19细胞(P<0.01)。(2)MALAT1沉默组lncRNA MALAT1相对表达量、细胞侵袭能力及ROCK1蛋白相对表达量均低于MALAT1非沉默组(P均<0.01)。(3)对照组、MALAT1沉默+ROCK1过表达组ROCK1蛋白表达及细胞侵袭能力均高于MALAT1沉默组、MALAT1沉默+ROCK1对照组(P均<0.01)。结论骨肉瘤细胞lncRNA MALAT1表达升高;lncRNA MALAT1可能通过调控ROCK1表达而参与骨肉瘤细胞侵袭。

HBV相关性和非HBV相关性肝细胞癌组织的长链非编码RNA的表达分析

目的探讨HBV相关性和非HBV相关性肝细胞癌(HCC)组织的长链非编码RNA(lncRNA)的表达情况。方法选择行手术治疗的HBV相关HCC患者42例、非HBV相关HCC患者45例,采用原位杂交技术检测两组患者肿瘤维修组和癌旁组织中肌动蛋白丝相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)、肝癌微血管浸润相关lncRNA(MVIH)和肺腺癌转移相关转录本1(MALAT-1)的表达水平,并比较不同临床特征HCC患者肿瘤组织AFAP1-AS1、MVIH和MALAT-1的表达情况。结果在两组患者中,肿瘤组织AFAP-AS1的染色分数低于癌旁组织(P<0.05),而肿瘤组织MVIH和MALAT-1的染色分数高于癌旁组织(P均<0.05)。HBV相关性HCC组癌旁组织中的AFAP-AS1染色分数高于非HBV相关HCC组癌旁组织(P<0.05),而两组肿瘤组织AFAP-AS1染色分数、两组肿瘤组织或癌旁组织中MVIH和MALAT-1的染色分数比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。在HBV相关性HCC、非HBV相关性HCC患者中,AFAP1-AS1、MVIH和MALAT-1在不同的分期和分型患者的肿瘤组织中的表达水平比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论在HCC组织中AFAP1-AS1表达下调而MVIH和MALAT-1表达上调,三者均参与了HCC的发生发展,而AFAP1-AS1的表达可能还受到HBV相关生物学过程的调节。

肝癌组织中长链非编码RNA CCAT2的表达变化及意义

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)在肝癌(HCC)组织中的表达变化,并探讨其意义。方法收集100例份HCC患者的癌及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测癌及癌旁组织中CCAT2表达;分析癌组织中CCAT2表达与HCC患者临床病理特征间的关系;Kaplan-Meier法检测CCAT2表达与患者生存率间的关系。结果 LncRNA CCAT2在HCC癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05);LncRNA CCAT2表达与HCC患者的TNM分期、肝内播散灶及血管侵袭密切相关(P均<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小及肝硬化无关(P均>0.05);Log Rank检验结果显示,CCAT2高表达与HCC患者不良预后呈正相关(χ~2=6.481,P=0.011)。结论 HCC癌组织中LncRNA CCAT2呈高表达,且与TNM分期、肝内播散、血管侵袭有关;检测LncRNA CCAT2在癌组织中的表达有助于病情判断。

长链非编码RNA在肝癌中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是指长度超过200个核苷酸的非编码RNA,不具有编码蛋白质功能。近年来研究发现,与肝癌有关的lncRNA包括H19、HOC转录反义RNA、肝癌过表达转录本、肺腺癌转移相关转录本1、人母系表达基因3等,其与肝癌的发生、发展关系密切,有望成为新型的肝癌标志物及治疗靶点,在肝癌诊断、预后和治疗方面应用前景良好。

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关功能

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及其对OSCC细胞生物行为学的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测OSCC患者(55例)癌组织、癌旁正常黏膜组织及人口腔鳞状细胞癌SCC25、人正常口腔角质细胞株(NOK)细胞中lncRNA AFAP1-AS1的表达,分析AFAP1-AS1与OSCC患者病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析AFAP1-AS1与患者预后的关系。AFAP1-AS1 siRNA转染SCC25细胞,细胞计数(CCK-8)及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭的变化,蛋白质印迹(Western blot)检测侵袭相关蛋白、肌动蛋白纤维相关蛋白1(AFAP1)及Rho GTP酶家族成员蛋白的表达情况,免疫荧光染色检测细胞骨架肌动蛋白微丝结构的变化。结果OSCC组织中AFAP1-AS1的表达高于癌旁正常黏膜组织,SCC25细胞中AFAP1-AS1的表达高于NOK细胞(P<0.001)。AFAP1-AS1的表达与OSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),AFAP1-AS1高表达患者的生存率低于AFAP1-AS1低表达者(P<0.05)。AFAP1-AS1 siRNA转染后AFAP1-AS1的表达水平下调,SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,AFAP1、RhoA、Rac2、Rab10、RhoGDI和Pfn1的表达上调,RhoC的表达下调,细胞骨架中应力纤维丝减少,肌动蛋白完整性丢失。结论lncRNA AFAP1-AS1在OSCC组织及SCC25细胞中高表达,与OSCC的发生进展及预后相关。下调AFAP1-AS1能够抑制OSCC的增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过调控肌动蛋白纤维丝的完整性实现的。

外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p诊断乙型肝炎病毒相关性肝癌的价值研究

目的分析血浆外泌体长链非编码RNA(LncRNA)SFTA1P和miR-483-3p在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝癌(HCC)的表达水平,评估其诊断价值。方法选择2022年1月—2024年1月本院收治的58例HBV相关性HCC患者作为HCC组;将同期收治的55例HBV患者作为HBV组;另选同期50名体检健康者作为对照组。运用纳米颗粒跟踪分析系统和蛋白质印迹分析鉴定血浆外泌体,并采用RT-qPCR检测外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p水平,分析二者水平分别与HCC临床病理特征之间的关系,Pearson法分析LncRNA SFTA1P和miR-483-3p表达水平的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA SFTA1P和miR-483-3p对HCC患者诊断的敏感性和特异性。结果外泌体LncRNA SFTA1P与miR-483-3p表达水平呈负相关(r=-0.7277,P<0.001)。与对照组相比,HBV、HCC组LncRNA SFTA1P水平依次增高,而miR-483-3p水平依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。LncRNA SFTA1P、miR-483-3p表达水平与TNM分期,肿瘤分化程度、淋巴结转移、AFP及AST有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、ALT、γ-GGT无关(P>0.05)。LncRNA SFTA1P和miR-483-3p单独诊断HCC时的曲线下面积(AUC)分别为0.886、0.851,敏感度分别为86.20%、89.70%,特异度分别为78.00%、70.00%;联合诊断的AUC为0.957,敏感度和特异度分别为94.80%、82.00%。结论血浆外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p的联合诊断可提高HBV相关性HCC的诊断率,为其诊断及后续治疗提供新的研究思路。

长链非编码RNA MALAT1调控骨肉瘤细胞侵袭能力的机制

目的分析长链非编码RNA人肺腺癌转移相关转录本(MALAT)1与miR-205的关系,研究MALAT1调控骨肉瘤细胞侵袭能力的机制。方法采用实时荧光定量核酸扩增检测(QPCR)对MALAT1、miR-205在两组细胞的表达差异进行比较;利用细胞转染实验分析MALAT1、miR-205的表达关系;采用荧光素酶基因检测分析MALAT1、miR-205的靶向调控关系;利用细胞迁移侵袭试验(Transwell实验)研究MALAT1对骨肉瘤细胞侵袭能力的调控作用。结果MG63、Sao-2细胞的MALAT1的表达水平明显高于hFOB细胞,而MG63、Sao-2细胞的miR-205的表达水平明显低于hFOB细胞(P<0.05)。MG63、Sao-2细胞在转染si-MALAT1后的miR-205表达水平均明显高于对应NC组(P<0.05)。MG63、Sao-2细胞在转染miR-205模拟物后的MALAT1表达水平均明显低于对应NC组(P<0.05)。MG63、Sao-2细胞在共转染miR-205模拟物+MALAT1野生型载体后的荧光值明显低于对应NC组(P<0.05)。MG63、Sao-2细胞在共转染miR-205模拟物+MALAT1突变型载体后的荧光值与对应NG组比较差异无统计学意义(P>0.05)。MALAT1+miR-205模拟物组细胞侵袭数明显高于miR-205模拟物组(P<0.05)。结论在骨肉瘤细胞中,MALAT1的表达较高而miR-205的表达较低,二者的表达呈负相关,且存在相互抑制的关系。MALAT1与miR-205存在靶向调控效应;miR-205可抑制骨肉瘤细胞的侵袭能力,而MALAT1可靶向逆转此抑制效应,促进骨肉瘤细胞的侵袭与进展,对于骨肉瘤的预测与治疗具有重要指导意义。

LncRNAAC073352.1对肝细胞性肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

探讨长链非编码RNA-AC073352.1(LncRNA AC073352.1)对肝细胞性肝癌(HCC)细胞(HepG2细胞)增殖、侵袭及迁移的影响。方法 利用生物信息学方法,通过癌症基因组图谱数据库分析LncRNA AC073352.1在肝细胞性肝癌和正常组织中表达情况(由于LncRNA AC073352.1该基因名称较长,以下均简称LncRNA)。常规培养HepG2细胞并随机分为空白对照组(Control组,仅加入培养基)、LncRNA敲低对照组(si-NC组,转染si-RNA空载质粒)、LncRNA敲低组(si-LncRNA组,转染敲低质粒)、LncRNA过表达对照组(pcDNA3.1-NC组,转染pcDNA3.1空载质粒)、LncRNA过表达组(pcDNA3.1+LncRNA组,转染过表达质粒),转染对应质粒24-48小时进行后续实验。采用qRT-PCR方法检测各组细胞内LncRNA的表达,并确定转染效率;CCK8方法检测各组细胞增殖能力;细胞划痕、Transwell实验观察各组细胞迁移与侵袭能力;Western blot法检测各组细胞内β-catenin、Vimentin、Slug蛋白的表达情况。结果 生物信息学分析结果显示与正常结肝组织相比,LncRNA AC073352.1在肝细胞性肝癌组织中表达增高(P<0.0001)。qRT-PCR分析结果显示,与si-NC组相比,si-LncRNA 组中LncRNA mRNA表达量明显降低(P<0.0001);与pcDNA3.1-NC组相比,pcDNA3.1+LncRNA组中LncRNA mRNA表达达量明显升高(P<0.0001),HepG2细胞敲低或过表达细胞模型构建成功。结论 LncRNA AC073352.1在肝癌组织中高表达,可能通过调控HepG2细胞上皮间充质转化过程进而参与其增殖、侵袭和迁移。