猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗激发抗肿瘤细胞免疫

探讨以猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗对小鼠细胞免疫抗肿瘤的影响。以猪软骨多糖作为免疫佐剂,采用共同培养的方法制备小鼠肝癌H22细胞全细胞肝癌疫苗,免疫小鼠后,分别以脾淋巴细胞、巨噬细胞为对象检测肝癌疫苗对小鼠机体细胞免疫的影响。结果表明,以猪软骨多糖为免疫佐剂的全细胞肝癌疫苗能明显刺激脾淋巴细胞活化、增强巨噬细胞的吞噬能力。以猪软骨多糖为免疫佐剂的肝癌疫苗能增强机体的细胞免疫,为软骨多糖用于肿瘤的免疫治疗和免疫预防提供了试验依据,为进一步的临床免疫治疗肿瘤奠定了基础。

人细胞融合肝癌疫苗的制备及其融合细胞百分率的检测

手术取病人新鲜肝癌组织及部分脾脏 ,分离纯化、激活B细胞 ,应用PEG融合肝癌细胞与激活B细胞 ,经培养灭活制得肿瘤疫苗。同时测定了融合肝癌疫苗的融合率、冻存后复苏活细胞百分率。结果显示 ,3例融合细胞的融合率分别为 6 6 84 %、74 4 3%、76 5 5 % ,融合细胞经DMSO和甘油冻存后复苏活细胞百分率分别为 95 %、97%。研究表明 ,人细胞融合肝癌疫苗具有很高的融合率和冻存后复苏活细胞百分率 ,便于制备及储存 ,适合临床应用。

HLA-A^＊0201限制性AFP抗原决定簇肽特异性肝癌疫苗的制备

目的探讨人HLA-A*0201限制性AFP抗原决定簇肽(含MHC-Ⅰ类分子HLA-A*0201)作为原发性肝癌特异性抗原制备肝癌肿瘤疫苗的可行性。方法应用14個AFP抗原决定簇肽片段分別体外脉冲刺激健康人血液树突状細胞(DC),將DC与自体T淋巴细胞共同培养并扩增其数量,使AFP抗原决定簇肽导入CD8+阳性T淋巴细胞(CD8+-CTL)并对表达相应AFP抗原决定簇肽的K562/A 2.1细胞(人慢性髓原性白血病细胞株K562转染人HLA-A*0201基因)产生特异性杀伤并释放gamm a-干扰素(ELISPOT测定)。结果有4个AFP抗原决定簇肽对表达相应AFP抗原决定簇肽的K562/A 2.1细胞杀伤能力较?,称之为免疫决定簇肽(Immunodom inant);另有10个AFP抗原决定簇肽对表达相应AFP抗原决定簇肽的K562/A 2.1细胞杀伤能力較弱,称之为亚免疫决定簇肽(Subdom inant)。结论AFP抗原决定簇肽可以作为肝癌特异性抗原制备肝癌肿瘤疫苗,K562/A 2.1细胞可以作为有效的抗原提呈细胞(APC)用于实验研究。

GM-CSF分泌型肝癌疫苗对移植性肝癌小鼠CTL杀伤活性的作用机制

目的研究粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)分泌型肝癌疫苗对移植性肝癌小鼠细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性的作用机制。方法本实验建立3个组别:肝癌疫苗组(A组),肝癌组(B组)及PBS对照组(C组)。在小鼠体内注入H 22肝癌细胞构建移植性肝癌组,同时建立GM-CSF分泌型肝癌疫苗组及PBS对照组;采用流式细胞术检测每组小鼠外周血中CD8+T细胞免疫效应分子的表达水平;采用MTT方法检测各组脾细胞细胞毒T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性;采用Western blot方法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和γ-干扰素(γ-interferon,γ-INF)的表达水平。结果流式细胞术结果表明,与肝癌组相比,GM-CSF分泌型肝癌疫苗可显著地增加小鼠外周血中CD8+T细胞的表达(P<0.01);MTT结果表明,与肝癌组相比,GM-CSF分泌型肝癌疫苗可显著地增加脾细胞细胞毒T淋巴细胞的杀伤活性(P<0.01);Western blot结果表明,与肝癌组相比,GM-CSF分泌型肝癌疫苗组可显著下调TNF-α和γ-INF蛋白的表达(P<0.01)。结论 GM-CSF分泌型肝癌细胞疫苗可显著地抑制H22肝癌细胞H22的活性,其作用机制可能是通过活化CD8+T细胞的表达和提高脾细胞细胞毒T淋巴细胞的杀伤活性,降低TNF-α和γ-INF蛋白的表达。

肝癌疫苗激活的TIL细胞对原发性肝癌患者的NK细胞活性的影响及意义

目的 :探讨经肝癌疫苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞 (tum or infiltrating lym phocytes,TIL)对原发性肝癌患者 NK细胞活性的影响。方法 :使用冷冻方法制成肝癌疫苗 ,用于激活 TIL 细胞。对 2 6例原发性肝癌患者使用经肝癌疫苗激活的 TIL 细胞治疗 ,检测其治疗前后 NK细胞活性的变化 ,并与对照组相比较。结果 :应用肝癌疫苗激活的 TIL 细胞的患者 ,其 NK细胞活性明显提高。结论 :应用肝癌疫苗激活的 TIL 细胞 ,能明显地提高原发性肝癌患者的

GM-CSF分泌型肝癌疫苗对荷瘤鼠肿瘤生长及TNF-α的影响

肝细胞癌（HCC）是世界上常见的恶性肿瘤之一,东亚地区特别是中国是其高发区之一。手术切除和肝移植是目前最有效的治疗方法,但术后复发率较高,而且大部分患者被诊断时已失去手术机会。经肝动脉栓塞化疗、射频消融等治疗方法在临床的广泛应用,延长了患者的生存时间,但5年生存率仍然较低。肝癌对化疗放疗均不敏感,

成功研制新型肝癌疫苗

我国科研人员研制成功一种能教会人体免疫系统识别并杀伤肿瘤细胞的肝癌疫苗，日前被美国商标专利局授予发明专利。目前，有关部门正将此项技术列为重中之重的高科技攻关项目。中国国家食品药品监督管理局同时批准这一治疗性疫苗进入二期临床研究。

我国研制成功教人体自我杀伤肿瘤的肝癌疫苗

我国科学家在肿瘤疫苗制备和单克隆抗体应用研究方面又获得重大成果：由上海市张江生物技术研究中心研制成功的一种能教会人体免疫系统识别并杀伤肿瘤细胞的新型肝癌疫苗，日前被美国商标专利局授予发明专利。所谓肿瘤疫苗是采用细胞融合技术，将病人身体中的肿瘤细胞与抗原提呈细胞进行“杂交”，制备出可广泛应用于恶性肿瘤治疗的高免疫原性肿瘤细胞疫苗。在国外进行的临床研究表明，这种疫苗能够有效治疗和控制肿瘤的转移和复发，并且能克服化学药物治疗和放射疗法的毒副作用。

细胞因子处理联合B7—l基因转染制备有效的肝癌疫苗

在体外用IFN-Y和TNF-。等细胞因子处理B7-1表达阳性的Hepal-6,观察其对小鼠肝癌表面MHC Class Ⅰ和ICAM-1表达的调节作用和对体内外抗肿瘤免疫反应的影响。结果发现:单独B7-1基因转染的Hepal-6的致瘤性消失,但仅能诱导部分细胞毒性和部分保护性免疫反应,而B7-1基因转染与细胞因子处理联合应用则能诱导强烈的细胞毒杀伤活性和完全的抗Hepal-6保护性免疫反应。结论B7-1共刺激分子在小鼠肝癌的表达是激活抗肿瘤免疫所必需的但不充分,而B7基因转染联合IFN-7等细胞因子处理能诱导彻底的抗肿瘤免疫反应。

肝癌疫苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞治疗原发性肝癌的研究

目的探讨经冷冻的肝癌疫苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞 (s TIL)治疗原发性肝癌的作用。方法 2 6例原发性肝癌患者使用s TIL治疗 ,并检测治疗前后其CD3、CD4、CD8、CD4/CD8比值、自然杀伤细胞 (NKC)活性和血清白细胞介素 2受体 (sIL 2R)水平的变化 ,计算 1、2、3年生存率 ,并与对照组相比较。结果应用s TIL患者 ,其第 19天、30天的CD3、CD4、CD4/CD8比值和NKC活性分别为 5 5± 3、76± 5 ;2 8 3± 1 6、44 6± 2 3;1 19± 0 2 2、2 2 1± 0 36 ;9 8± 1 2、17 4± 2 2。与对照组比较明显升高 (P <0 0 1)。而CD8和血清sIL 2R明显下降 ,分别为 2 4 9± 1 4、2 1 1± 1 2 ;5 6 9± 90、15 0± 31(P <0 0 1)。其 3年生存率为 88% ,与对照组 (5 7% )比较明显升高 (P <0 0 5 )。结论应用s TIL治疗原发性肝癌 。

表达趋化因子MIP-1α的小鼠肝癌疫苗抗肿瘤活性的研究

目的 探讨小鼠趋化因子 (mMIP 1α)的重组腺病毒载体 (AdmMIP 1α)体外感染肝癌细胞株Hepa1 6后 ,其体内抗肿瘤活性及其成为肝癌疫苗的可能性。 方法 腺病毒载体体外感染Hepa1 6细胞 ,通过绿色荧光蛋白 (GFP)的表达检测感染效率 ;每天细胞计数 (连续 14d)观察细胞的体外生长曲线 ;取 5× 10 6个修饰后的Hepa1 6细胞接种C5 7BL/ 6小鼠 ,4周后在AdmMIP 1α组未荷瘤小鼠原接种部位的对侧再接种 2× 10 6个野生型Hepa1 6或EL4细胞 ,观察肿瘤大小并作统计学处理。结果 AdmMIP 1α能有效感染靶细胞Hepa1 6 ,感染前、后Hepa1 6的体外生长无明显改变 ;修饰后Hepa1 6细胞的体内成瘤性下降 ;4周后再接种Hepa1 6细胞 ,肿瘤生长速度显著降低 ;而再接种的EL4细胞呈渐进性生长 ,与对照组差异无显著意义。 结论 表达mMIP 1α基因的肝癌细胞的体内成瘤性下降 ,能激发特异性免疫保护反应 ,有可能成为有效的肝癌疫苗。

肝癌疫苗研究进展

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。近年来在传统的手术、化疗和放疗等治疗肝癌方法不断进展的基础上，基因治疗、免疫治疗获得兴起，特别是免疫治疗成为肝癌综合治疗中的第四种模式，显示了广阔良好的应用前景。

肝癌DC疫苗诱导CTL的效应与机理研究

目的 探讨肝癌DC疫苗诱导肝癌特异性淋巴细胞的效应与机理。方法 用流式细胞术检测肝癌细胞表面HLA-DR的表达;用CM-CSP和IL-4从健康人外周血诱导DC,使之负载肝癌相关抗原,并在BCG HSP-70作用下活化,制成肝癌DC疫苗;用流式细胞术检测BCG HSP 70活化的负载肝癌抗原DC对自身淋巴细胞的活化;分别用MIT法和ELISA检测肝癌DC疫苗活化的淋巴细胞培养上清中TNF和IL-12水平;用原位杂交检测淋巴细胞内IFN-γmRNA表达;用流式细胞术检测经DC疫苗活化后淋巴细胞表面Fas-L表达;最后检测肝癌DC疫苗活化的淋巴细胞对肝癌细胞的特异性杀伤。结果 肝癌DC疫苗在体外诱导活化的淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤以CD4^+ T CTL为主,不但可以杀伤SMMC-7721细胞,同时对其它3种肝癌细胞也有不同程度的杀伤。CTL培养上清液和细胞中可分别检测到T_(HI)型细胞因子TNF和IFN-γ mRNA。Fas和Fas配体途径发挥了重要的作用。结论 为肝癌DC疫苗的进一步深入研究及今后的临床应用奠定了良好的基础。

肿瘤坏死因子α基因转导的人肝癌细胞疫苗对小鼠肝癌移植瘤的影响

目的 用肿瘤坏死因子α (TNF α)基因转导的人肝癌细胞作为疫苗接种小鼠 ,研究其对小鼠肝癌移植瘤的免疫排斥作用。方法 取昆明种小鼠 40只 ,分为 5组 ,每组 8只。分别采用经60 Co照射的TNF α基因转导的人肝癌细胞 (BEL 740 4 TNF Co组 )、未经60 Co照射的TNF α基因转导的人肝癌细胞 (BEL 740 4 TNF组 )、经60 Co照射的人肝癌细胞 (BEL 740 4 Co组 )以及未经60 Co照射的人肝癌细胞 (BEL 740 4组 )接种小鼠 ,生理盐水对照组仅注射生理盐水。然后将小鼠肝癌细胞株H2 2移植于上述 5组小鼠 ,观察肝癌移植瘤生长情况 ,并应用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)法观察肿瘤细胞凋亡指数。结果 BEL 740 4 TNF Co组小鼠接种经60 Co照射的TNF α基因转导的人肝癌细胞疫苗后 ,肝癌移植瘤成瘤率下降 ,瘤体生长受抑制 ,细胞凋亡指数增高 ,与BEL 740 4 Co组、BEL 740 4组及生理盐水对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,但与BEL 740 4 TNF组相比 ,差异则无统计学意义 (P>0 .0 5 )。结论 TNF α基因转导的人肝癌细胞疫苗对小鼠肝癌移植瘤有较强的免疫排斥作用。

肝癌DC疫苗活化的CTL对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:本研究探讨肝癌DC疫苗活化的CTL对人肝癌裸鼠皮下抑制瘤的抑制作用。方法:将负载肝癌相关抗原DC经BCG HSP70活化后制成肝癌DC疫苗,用此肝癌DC疫苗诱导的肝癌特异性淋巴细胞预防和治疗人肝癌裸鼠皮下移植瘤,同时观察DC对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的直接预防作用和冷冻复苏后肝癌特异性淋巴细胞对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的预防和治疗作用。结果:DC对肝癌细胞的抑制率为97％,用冷冻复苏后的CTL预防人肝癌裸鼠皮下移植瘤,对肝癌细胞的平均抑制率为96％;冷冻复苏后的CTL治疗人肝癌裸鼠皮下移植瘤,对肝癌细胞的抑制率为98％。结论;本研究结果为肝癌DC疫苗的进一步深入研究及今后的临床应用奠定良好的基础。

能教人体自我杀伤肿瘤的肝癌疫苗问世

我国科学家在肿瘤疫苗制备和单克隆抗体应用研究方面又获得重大成果：由上海市张江生物技术研究中心研制成功的一种能教会人体免疫系统识别并杀伤肿瘤细胞的新型肝癌疫苗，日前被美国商标专利局授予发明专利。

我国在肝癌治疗性疫苗制备方面取得重要成果

近日，一种能教会人体免疫系统识别并杀伤肿瘤细胞的肝癌疫苗在上海制备成功，标志着我国在肿瘤疫苗制备和单克隆抗体应用研究方面取得重要成果。