PTEN慢病毒过表达肝癌稳转株的构建及对Huh-7肿瘤活性的影响

目的构建过表达PTEN的人肝癌稳转细胞株,观察PTEN对肝癌细胞生物学行为的影响并探讨潜在机制。方法将编码PTEN的基因编码片段克隆到慢病毒载体pLV-puro-GFP,利用293T细胞得到慢病毒原液感染肝癌细胞Huh-7,嘌呤霉素筛选获得稳定过表达PTEN的Huh-7细胞。用RT-PCR、免疫荧光和Western blot法检测细胞内基因和蛋白的表达;Transwell检测细胞迁移活性;探讨AKT抑制剂MK2206对稳转株的药理作用。结果成功构建了PTEN过表达的肝癌稳转细胞株(Huh-7/hPTEN)。与对照株Huh-7/EGFP相比,Huh-7/hPTEN细胞PTEN的蛋白和mRNA表达升高(P<0.01),P53蛋白表达升高,Slug和AR的mRNA表达水平下降(P<0.01),HNF4α的mRNA表达升高(P<0.01),耐药蛋白ABCB1和ABCC2的表达下降,E-cadherin蛋白和mRNA表达升高(P<0.01),Vimentin的蛋白和mRNA表达下降(P<0.01),细胞迁移性能减少;Huh-7/hPTEN细胞对AKT抑制剂MK2206的利用率升高,并影响相关蛋白的表达。结论成功构建PTEN过表达肝癌稳转株,PTEN过表达可改善肝癌Huh-7细胞肿瘤生物学效应,致癌蛋白表达下降,迁移减弱。