桃叶珊瑚苷抑制人肝癌细胞系HepG2增殖

目的探讨桃叶珊瑚苷(AU)对人肝癌细胞系HepG2增殖、凋亡和细胞周期的影响及其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,CCK-8法筛选AU的最佳给药浓度。随机将HepG2细胞分为对照组、AU 12.5 mg/L组(AU L组)、AU 62.5 mg/L组(AU H组)和AU H+Akt通路激动剂(SC79)组(AU H+SC79组),观察各组细胞增殖状态。5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EDU)法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡和细胞周期;Western blot检测磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、p-MDM2、MDM2、p-p53、p53蛋白表达水平。结果选择浓度为12.5、62.5 mg/L的AU进行后续实验。与0 mg/L AU比较,AU L组、AU H组细胞增殖显著降低(P<0.05);与对照组比较,AU L、AU H组悬浮和脱落细胞逐渐增多,细胞皱缩变圆,G0/G1期细胞占比、EDU阳性染色细胞比例以及p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2蛋白表达水平下降,S和G2/M期细胞占比、细胞凋亡率以及p-p53/p53蛋白表达水平升高(P<0.05);与AU H组比较,AU H+SC79组上述变化得到改善(P<0.05);移植瘤裸鼠接受AU治疗后,瘤体体积和质量均下降。结论AU可能通过调控Akt/MDM2/p53信号通路抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞与细胞凋亡。

一封肝癌细胞的自白书

“我是癌细胞,自在又逍遥;杀人不眨眼,吃人不放盐。”大家好,我就是让人闻风丧胆的肝癌细胞,别看我小,却威力巨大,我是中国第四位常见恶性肿瘤及第二位肿瘤致死病因。你一定好奇我是从哪里来的吧?今天就跟大家唠唠我的前世今生。

雷公藤红素通过调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡

目的探究雷公藤红素(tripterine,TRI)抑制肝癌细胞(hepatocellular carcinoma,HCC)进展的新机制。方法利用不同浓度(0、0.5、2和8μmol·L-1)TRI作用于肝癌细胞,然后利用CCK-8、细胞克隆、Transwell和蛋白免疫印迹等实验方法评估细胞表型和可能机制;再利用siRNA将靶基因GSDME进行干扰,确定GSDME的作用;最后使用移植肿瘤模型验证TRI在体内抑制HCC细胞的生长的机制。结果TRI可抑制HCC细胞增殖、克隆和侵袭,促进细胞焦亡。免疫印迹结果显示,TRI处理后肝细胞癌HepG2或Hepa1-6中GSDME表达均上调,同时cleaved caspase-3和PARP也明显升高。敲除GSDME后可部分逆转TRI诱导的细胞焦亡。同时GSDME敲低后的细胞具有更强的克隆和迁移能力,且与单独的TRI治疗组相比,细胞凋亡率降低。在体内实验中,TRI抑制可HCC肿瘤生长,TRI+siGSDME组小鼠肿瘤生长速度比单独TRI治疗组快。此外,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中p-eIF2a、ATF4均升高。免疫荧光结果显示,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中ATF4阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论TRI抑制肝癌细胞生长和侵袭可能与其调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡有关。

Nlrp6过表达通过调控AMPK-Srebp1c轴抑制脂质合成抑制肝癌细胞的增殖

目的探讨Nlrp6通过调控脂质合成抑制肝细胞癌(HCC)进展的作用及其机制。方法通过分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中的RNA-seq数据和临床信息,评估Nlrp6在不同病理分级的HCC组织中的表达变化,并进行Kaplan-Meier生存分析及相关性分析。将腺病毒转染HepG2细胞过表达或敲低Nlrp6,使用棕榈酸(PA)构建肝脂肪变性模型。油红O染色评估Nlrp6对肝癌细胞HepG2脂质沉积的影响,CCK-8、Edu染色及克隆形成实验探讨Nlrp6对HepG2细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR检测脂质合成相关基因的表达,Western blotting检测AMPK-Srebp1c轴相关蛋白的表达水平。使用肝脏特异性敲除Nlrp6小鼠,进行高脂饮食喂养24周,构建动物肝脂肪变性模型。取小鼠肝脏进行组织学染色,检测纤维化及肝癌标志物相关基因的表达,同时验证AMPK-Srebp1c信号通路的变化。结果生信分析结果显示在HCC患者肝脏组织中,Nlrp6的表达显著降低,且随着病理分级增加而进一步降低,同时Nlrp6的表达与患者生存期显著相关(P<0.0001)。细胞实验结果显示,Nlrp6过表达抑制了HepG2细胞的脂质沉积和细胞增殖,而Nlrp6敲低则产生相反效果(P<0.05)。q-PCR结果显示,Nlrp6可抑制脂质合成相关基因的表达(P<0.05),Western blotting结果表明过表达Nlrp6可促进AMPK的磷酸化,抑制调控脂质合成的转录因子Srebp1c的表达(P<0.05)。而Nlrp6敲低则抑制AMPK的磷酸化,促进Srebp1c的活化(P<0.05)。动物组织病理学染色结果表明,肝脏特异性敲除Nlrp6会促进肝脂肪变性及胶原沉积,q-PCR检测纤维化基因与染色结果一致(P<0.05),而肝癌标志物AFP的表达水平明显上升(P=0.06)。肝脏组织样本Western blotting结果证实Nlrp6的缺失会抑制AMPK的磷酸化,上调Srebp1c的表达(P<0.05)。结论Nlrp6通过AMPK-Srebp1c轴抑制脂质合成,其可能是抑制肝癌细胞增殖的重要途径之一,进而改善HCC的进展。

连翘叶茶对肝癌细胞增殖和迁移功能的影响及其作用机制

【目的】探究连翘叶茶粗提物及其主要成分连翘苷和连翘酯苷A对肝癌细胞LM3增殖和迁移功能的影响及其作用机制。【方法】利用水提法提取连翘叶绿茶和红茶,HPLC方法检测连翘绿茶和连翘红茶中有效成分连翘苷、连翘酯苷A的含量。采用CCK8实验,探究两种连翘叶茶粗提物、连翘苷和连翘酯苷A对肝癌细胞LM3增殖的影响;利用两种连翘叶茶粗提物、连翘苷和连翘酯苷A培养肝癌细胞LM3,通过细胞划痕实验,观察24、48、72、96 h细胞迁移情况,检测两种连翘叶茶粗提物、连翘苷和连翘酯苷A对肝癌细胞LM3迁移的影响;使用RT-PCR技术,检测增殖迁移相关基因Ki-67、Erk、PI3K和mTOR的表达,揭示连翘叶茶粗提物及其主要成分连翘苷和连翘酯苷A影响肝癌细胞增殖迁移功能的分子机制。【结果】连翘叶绿茶和红茶粗提物、连翘苷均显著抑制肝癌细胞LM3的增殖和迁移,连翘酯苷A显著抑制肝癌细胞LM3的迁移。其中,连翘绿茶粗提物在低、中和高浓度,培养时间24、48、72 h,均可明显抑制肝癌细胞增殖和迁移。连翘红茶粗提物随着浓度升高对LM3细胞增殖和迁移的抑制效果不断增强,在高浓度72 h抑制效果最佳。RT-PCR结果分析,其主要作用机制可能是通过降低Ki-67基因表达量来实现的。【结论】连翘叶绿茶和连翘叶红茶粗提物及连翘苷和连翘酯苷A均能够通过降低Ki-67表达抑制肝癌细胞LM3的增殖或迁移。

吡喹酮通过5-HT2B受体对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨吡喹酮(praziquantel,PZQ)对肝癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养Hep3B人肝癌细胞株和Hepa1-6小鼠肝癌细胞株,分为正常对照组、PZQ处理组、5-羟色胺2B(5-HT2B)受体抑制剂组(RS127445组)、5-HT2B受体抑制剂+PZQ处理组(RS127445+PZQ处理组)。采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测Hep3B人肝癌细胞株和Hepa1-6小鼠肝癌细胞株中5-HT2B受体mRNA相对表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,western blot法检测Bax、Bcl-2凋亡相关蛋白表达量。结果Hep3B人肝癌细胞株和Hepa1-6小鼠肝癌细胞株5-HT2B受体mRNA相对表达水平正常对照组为1.02±0.09和1.01±0.20,PZQ处理组为1.36±0.16和1.66±0.16,经PZQ处理后5-HT_(2B)受体mRNA相对表达水平均增加(t=3.22、5.07,P均<0.05)。PZQ处理组两种细胞株48 h细胞增殖率为(74.00±4.58)%和(77.00±5.29)%,低于正常对照组(t=9.88、7.47,P均<0.01);72 h细胞增殖率为(71.00±6.08)%和(67.33±7.57)%,低于正常对照组(t=7.87、6.00,P均<0.05)和RS127445+PZQ处理组(t=5.48、3.48,P均<0.05)。PZQ处理组两种细胞株48 h细胞迁移率为(52.91±3.15)%和(17.28±1.78)%,低于正常对照组(t=7.86、13.46,P均<0.01);72 h细胞迁移率为(58.79±3.25)%和(22.29±5.87)%,低于正常对照组(t=11.65、9.57,P均<0.05)和RS127445+PZQ处理组(t=3.13、6.97,P均<0.05)。PZQ处理组两种细胞株72 h细胞凋亡率为(16.13±0.66)%和(20.70±2.85)%,高于正常对照组和RS127445+PZQ处理组(t=27.82、5.65、9.54、4.10,P均<0.01);Bax相对蛋白表达水平分别为1.70±0.18和2.23±0.14,高于正常对照组(t=2.83、7.89,P均<0.05)和RS127445+PZQ处理组(t=9.40、5.25,P均<0.05);Bcl-2相对蛋白表达水平分别为0.52±0.17和0.53±0.02,低于正常对照组(t=3.57、8.39,P均<0.05)和RS127445+PZQ处理组(t=12.09、6.12,P均<0.05)。结论PZQ可通过5-HT2B受体对肝癌细胞的增殖、迁移和凋亡造成影响。

MEK1/2抑制剂U0126对射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H作用的研究

目的研究MEK1/2抑制剂U0126对肝癌射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H的增殖、迁移和侵袭的影响。方法运用肝癌细胞系HepG2体外制作射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H,通过细胞增殖、划痕、侵袭实验,观察实验组(加入10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L的U0126)和对照组(不加入U0126)细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果实验组(加入10、20、30μmol/L的U0126)的吸光度值分别为:(0.6929±0.08257)、(0.5084±0.06012)、(0.4549±0.07660),对照组吸光度值为:(1.1245±0.07971);组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组的迁移面积分别为:(5640.2±285.4)mm^(2)、(5082.4±237.7)mm^(2)、(4821.7±246.3)mm^(2),对照组的迁移面积为:(6053.8±269.2)mm^(2),组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组的每高倍视野细胞计数分别为:(164.2±18.89)个、(138.4±18.06)个、(129.4±18.54)个,对照组的每高倍视野细胞计数为:(226.6±16.81)个,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论U0126可抑制射频消融术后残留肝癌细胞HepG2-H的增殖、迁移和侵袭。

DEPDC1B结合p65在肝癌细胞和荷瘤小鼠肿瘤生长中的作用及机制研究

目的 研究DEP结构域蛋白1B(DEPDC1B)在肝癌细胞和荷瘤小鼠肿瘤生长中的作用及相关机制。方法 分别将过表达DEPDC1B的质粒(oe-flagDEPDC1B)与对照质粒(oe-NC)转染至H22肝癌细胞系中,采用蛋白质印迹法检测flag和DEPDC1B蛋白表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖能力。通过flag抗体富集flag-DEPDC1B结合蛋白,通过质谱进行鉴定,并对免疫共沉淀物进行关键蛋白验证。在oe-flag-DEPDC1B转染细胞中加入p65抑制剂Helenalin,采用实时荧光定量PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖能力。分别将oe-flag-DEPDC1B和oe-NC转染细胞注射至C57/B6小鼠皮下,注射后2周开始监测小鼠肿瘤体积,注射后5周处死小鼠。分别采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法和ELISA法检测肿瘤组织中DEPDC1B、p65、IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果 与oe-NC组细胞比较,oe-flag-DEPDC1B组细胞中DEPDC1B蛋白表达水平显著升高,细胞增殖能力显著增强(P均<0.05)。flagDEPDC1B可结合关键蛋白p65,免疫沉淀物中可以检测到p65蛋白。与oe-NC组细胞比较,oe-flag-DEPDC1B组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平均显著升高(P均<0.05)。与oe-flag-DEPDC1B组细胞比较,oe-flag-DEPDC1B+Helenalin组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA表达水平均显著降低,细胞增殖能力均显著减弱(P均<0.05)。在荷瘤小鼠中,与oe-NC组小鼠比较,oe-flag-DEPDC1B组小鼠的肿瘤体积增长更快,肿瘤组织中DEPDC1B、p65、IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平均显著升高(P均<0.05)。结论 DEPDC1B可通过结合NF-κB信号通路中关键蛋白p65激活NF-κB信号通路,促进肝癌生长。

自噬在人肝癌细胞Huh7对仑伐替尼耐药中的调节作用

目的研究自噬在人肝癌细胞Huh7对仑伐替尼耐药中的调节作用。方法以人肝癌细胞Huh7为对象,采用低浓度逐渐递增联合长期给药的方式构建仑伐替尼耐药细胞模型Huh7-LR,以CCK-8实验和流式细胞术检测亲本细胞Huh7及耐药细胞Huh7-LR对仑伐替尼的敏感性,以Westernblot实验和GFP-mCherry-LC3质粒转染实验分别检测细胞中自噬效应蛋白Beclin-1、自噬接头蛋白sequestosome1(又名p62)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平和细胞自噬水平。通过饥饿诱导构建自噬激活细胞模型,以Westernblot实验和GFP-mCherry-LC3质粒转染实验分别检测细胞中p62蛋白表达水平和细胞自噬水平,以流式细胞术检测自噬激活对仑伐替尼敏感性的影响。结果与亲本细胞相比,Huh7-LR细胞的耐药指数为6.2,其p62蛋白的表达水平显著升高,凋亡率、Beclin-1蛋白的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均显著降低(P<0.05或P<0.01),自噬水平有所下降。自噬激活可显著升高Huh7-LR细胞中p62蛋白的表达水平(P<0.05)和自噬水平,并显著升高其凋亡率(P<0.05)。结论自噬参与了仑伐替尼耐药,激活自噬可一定程度逆转肝癌细胞对仑伐替尼耐药。

阿托伐他汀对人肝癌细胞株HepG2生物钟基因震荡性的影响

目的探讨阿托伐他汀(AT)对人肝癌细胞株HepG2(简称HepG2)生物钟基因与蛋白表达节律的影响。方法基于MOE软件设计AT与生物钟蛋白的分子对接虚拟实验;在HepG2与人骨肉瘤细胞BMAL1::LUC-U2OS(简称U2OS)中分别设置实验组(加入101,102,103,104 nmol/L AT),对照组(加入0 nmol/L AT),空白组(加入0.1%二甲基亚砜),给药24 h后采用CCK-8法检测细胞在不同浓度AT处理后的活力;在不影响正常细胞活力的浓度下,采用免疫印迹(Western blot)法检测脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(BMAL1)、昼夜节律蛋白2(PER2)、视黄酸受体相关孤儿受体γ(RORγ)、核受体亚家族1组D成员(NR1D1)的蛋白表达水平;采用LumiCycle实验检测细胞生物节律基因BMAL1的震荡情况;通过血清休克实验确定生物钟基因BMAL1,PER2,NR1D1及隐花色素2(CRY2)的节律表达。结果高于100 nmol/L的AT会对HepG2产生细胞毒性。在避免AT对正常细胞活性影响的背景下,选择AT 100 nmol/L浓度进行后续实验。给予AT刺激后,BMAL1和PER2蛋白表达量减少(P<0.05);LumiCycle实验结果显示,实验组(AT 100 nmol/L)的相位较对照组(0 nmol/L)滞后2.696 h(P<0.01)。血清休克实验结果显示,实验组PER2基因的表达较对照组显著下调(P<0.05)。结论AT能调节外周生物钟蛋白与基因的表达,使生物钟核心基因BMAL1表达滞后,PER2基因与蛋白表达均显著下调,具有治疗生物钟紊乱相关疾病、睡眠障碍等的应用前景。

果糖对肝癌细胞增殖的影响

目的观察果糖摄入对肝癌细胞增殖的影响,并探讨对c-Myc/SLC1A5信号上调的机制。方法培养HepG2肝癌细胞,添加果糖进行干预,分别设置5、10mmol/L为低、高剂量果糖组,设置0mmol/L果糖为空白对照组;应用CCK-8进行细胞活性检测,克隆形成实验进行细胞增殖情况检测,流式细胞术进行细胞周期和细胞凋亡检测;应用荧光定量PCR检测c-Myc和SLC1A5的mRNA的转录情况,蛋白免疫印迹检测c-Myc和SLC1A5的蛋白表达情况,以明确其机制。结果CCK-8细胞增值率及克隆形成实验细胞增殖结果均显示果糖能促进肝癌细胞的体外增殖(高剂量组>低剂量组>空白组),且差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示果糖能抑制肝癌细胞的体外凋亡(高剂量组<低剂量组<空白组),然而G 2/M期的细胞所占比例结果为高剂量组>低剂量组>空白组。c-Myc和SLC1A5 mRNA的相对表达量及蛋白表达结果均为高剂量组>低剂量组>空白组。结论果糖摄入可以促进肝癌细胞的体外增殖,诱导c-Myc/SLC1A5的表达,该结果提示过多的果糖摄入具有促进肝癌发生与发展的潜在可能,其作用机制可能与c-Myc/SLC1A5的激活密切相关。

白术精油对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨白术精油对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养HepG2、MHCC97-L、MHCC97-H肝癌细胞,给予不同质量浓度白术精油干预,通过MTT法检测细胞存活率,平板克隆实验检测细胞增殖活性,Hoechst33342染色观察凋亡细胞形态及数目,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblot法检测细胞Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3和cleavedPARP蛋白表达。结果MTT和平板克隆实验结果显示,白术精油可剂量依赖性地降低HepG2、MHCC97-L和MHCC97-H肝癌细胞存活率和增殖能力(P<0.05,P<0.01)。Hoechst33342染色和流式细胞术结果显示,白术精油可剂量依赖性地促进HepG2和MHCC97-H肝癌细胞凋亡(P<0.05,P<0.01)。Westernblot实验结果显示,白术精油可升高HepG2和MHCC97-H肝癌细胞中cleavedcaspase-3、cleavedPARP和Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论白术精油可能通过诱导肝癌细胞凋亡,从而发挥抑制其增殖活性的作用。

白花蛇舌草提取物通过抑制有氧糖酵解和促进氧化磷酸化抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨白花蛇舌草提取物(HDE)对肝癌细胞增殖的影响及其与有氧糖酵解和氧化磷酸化的关系,并分析其可能机制。方法 采用CCK-8实验和细胞增殖实验(5-ethynyl-2-deoxyuridine, EDU)检测不同质量浓度(20、40、80 mg/mL)HDE对肝癌细胞SNU-368增殖的影响;采用酶标仪检测乳酸脱氢酶活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、线粒体呼吸链复合体活性,采用pH计检测细胞外液pH值,采用细胞氧耗仪检测细胞氧耗,分析HDE对SNU-368细胞有氧糖酵解和氧化磷酸化的影响;采用qRT-PCR实验检测各组SNU-368细胞中GLUT1、GLUT4、HK2、GPI、PFKL、ALDOA和HIF-1α的mRNA表达,采用Western blotting检测HIF-1α的蛋白表达。用过表达HIF-1α的慢病毒转染肝癌细胞SNU-368构建过表达HIF-1α稳转细胞株,并进行HDE相应干预后,采用qRT-PCR和Western blotting检测HIF-1α的mRNA及蛋白表达。结果 CCK-8实验显示,HDE呈一定的浓度依赖效应抑制肝癌细胞增殖(均P<0.05);糖代谢相关检测结果显示,HDE可以抑制葡萄糖摄取和乳酸生成,降低乳酸脱氢酶活性,升高细胞外培养液pH值,增加细胞氧耗和线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性(均P<0.05);qRT-PCR结果显示,HDE抑制了GLUT1、HK2、GPI、ALDOA mRNA的表达(均P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting实验显示,与对照组相比,HDE组HIF-1α mRNA及蛋白的表达明显减少;而与HDE组相比,HDE干预过表达HIF-1α的HIF-1α-LV组中,HIF-1α mRNA及蛋白表达再次增加(P<0.05)。结论 HDE通过抑制肝癌细胞有氧糖酵解、促进氧化磷酸化而抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与抑制HIF-1α的表达有关。

PGRMC1介导的肝癌细胞自噬降低^(125)I粒子辐射敏感性

目的 探究孕激素受体膜组分1(progesterone receptor membrane component 1,PGRMC1)介导的自噬对^(125)I粒子照射肝癌细胞辐射敏感性的影响。方法 肝癌细胞Huh7和LM3分别暴露于不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)的^(125)I粒子,利用透射电镜观察细胞自噬情况。使用自噬抑制剂氯喹(chloroquine, CQ)、激动剂雷帕霉素(rapamycin, Rapa)和PGRMC1抑制剂AG-205验证PGRMC1介导的自噬在肝癌细胞对^(125)I粒子照射敏感性中的作用。利用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞术检测细胞增殖、集落形成及凋亡情况,Western blot检测细胞中PGRMC1、微管相关蛋白轻链3-Ⅰ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅰ,LC3-Ⅰ)、LC3-Ⅱ和p62相对表达量。结果 不同剂量^(125)I粒子照射后Huh7和LM3细胞增殖和克隆形成能力显著降低(P<0.05),细胞凋亡数显著增加(P<0.01),且呈剂量依赖性。与0 Gy组相比,6 Gy组Huh7和LM3细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加(P<0.01),p62表达显著下调(P<0.01)。与6 Gy组相比,6 Gy+CQ组Huh7和LM3细胞增殖能力和克隆形成数显著下降(P<0.05),细胞凋亡显著增加(P<0.05),而6 Gy+Rapa组上述结果则相反。与6 Gy组相比,6 Gy+AG205组Huh7和LM3细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P<0.05),p62表达显著上调(P<0.05),细胞增殖能力和克隆形成数显著降低(P<0.01),细胞凋亡显著增加(P<0.01),而6 Gy+PGRMC1组上述结果则相反。结论^(125)I粒子照射诱导的PGRMC1升高可促进细胞自噬,从而增加肝癌细胞的增殖及克隆形成能力,减少肝癌细胞的凋亡。

上海交通大学公共卫生学院王慧、李晓光团队发现肿瘤细胞与免疫细胞营养竞争诱导肝癌细胞免疫逃逸的机制和干预靶点

2024年7月2日,上海交通大学公共卫生学院王慧教授和李晓光研究员团队在国际消化系统著名期刊Gut在线发表题目为“Glutamine metabolic competition drives immunosuppressive reprogramming of intratumour GPR109A^(+) myeloid cells to promote liver cancer progression”的研究论文。该研究利用肝癌队列样本和动物模型发现肝癌肿瘤微环境内存在一群特殊的GPR109A^(+)髓系细胞亚群,该细胞亚群具有较强的免疫抑制功能,并与肝癌的不良预后密切相关。进一步研究发现,肿瘤微环境中肝癌细胞和髓系细胞之间存在营养竞争:肝癌细胞通过掠夺谷氨酰胺,驱动髓系细胞发生营养应激和代谢重编程,进而诱导GPR109A^(+)免疫抑制性髓系细胞介导的免疫逃逸和治疗抵抗。

鼠李柠檬素下调NEK2抑制肝癌细胞恶性生物学行为

目的:分析鼠李柠檬素通过NIMA相关激酶2(NEK2)抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:网络药理学分析鼠李柠檬素可能的作用靶点为NEK2,TCGA_LIHC数据库分析肝癌组织中NEK2表达及预后的关系。检测不同浓度鼠李柠檬素对肝癌细胞增殖及NEK2蛋白表达的影响,设置对照组和鼠李柠檬素组,检测两组细胞增殖、迁移和侵袭。观察鼠李柠檬素对移植瘤体积、质量及瘤组织中Ki67蛋白表达。构建shNEK和稳定过表达NEK2细胞,观察鼠李柠檬素抑制NEK2对肝癌细胞生物学行为的影响。结果:与癌旁组织相比,癌组织NEK2的表达明显上调(P<0.05),且其表达量与预后有关(P<0.05)。随着鼠李柠檬素浓度越高,HepG2细胞和Hep3B细胞相对存活率降低(P<0.05)。鼠李柠檬素组增殖活性、侵袭、迁移细胞数均低于对照组(P<0.05),移植瘤体积和质量明显低于对照组(P<0.05),Ki67蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),且随着鼠李柠檬素浓度越高、作用时间越久,NEK2蛋白表达下降更为明显(P<0.05)。NEK2基因沉默可以促进细胞增殖、侵袭和迁移,NEK2过表达可以逆转鼠李柠檬素抑制的细胞增殖、侵袭和迁移(P<0.05)。结论:鼠李柠檬素可以抑制NEK2蛋白表达,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

黄芩苷诱导肝癌细胞发生铁死亡的作用机制研究

目的探讨黄芩苷诱导肝癌HepG-2细胞发生铁死亡的可能机制。方法该研究采用不同浓度(10、20、30、40、50、60、70、80、90,100μmol/L)的黄芩苷处理肝癌HepG-2细胞24 h,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC_(50))。根据IC_(50)将细胞分为对照组(黄芩苷浓度=0μmol/L)、25μmol/L黄芩苷处理组和50μmol/L黄芩苷处理组,使用谷胱甘肽(GSH)试剂盒测定分组后细胞内GSH水平;采用Western blot试验检测分组后细胞内铁死亡相关蛋白胱氨酸-谷氨酸的反向转运体亚基(xCT)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二价金属转运蛋白1(DMT1)表达水平;采用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)水平。随后本研究测定了同时使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1和黄芩苷处理后的细胞活力、GSH水平变化。采用Pearson相关对肝癌HepG-2细胞内GSH水平与黄芩苷浓度的相关性进行分析。结果肝癌HepG-2细胞活力随着黄芩苷作用浓度增加而明显降低。黄芩苷能减少肝癌HepG-2细胞内GSH水平,下调细胞中xCT和GPX4蛋白表达水平,上调DMT1表达水平和升高ROS水平。Ferrostatin-1可有效抑制黄芩苷诱导的细胞铁死亡,主要表现为细胞活力和GSH水平恢复。Pearson相关分析结果显示,肝癌HepG-2细胞内GSH水平与黄芩苷浓度呈负相关(P<0.05)。结论黄芩苷可通过下调GPX4和xCT蛋白表达水平,上调DMT1表达水平,诱导ROS大量生成,并导致肝癌HepG-2细胞铁死亡。

附子含药血清对人肝癌细胞侵袭和迁移的影响及机制

目的探讨中药材附子含药血清对人肝癌细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法按50 g/L浓度生附子水煎液和0.9%生理盐水分别灌胃SD大鼠,一周后获得附子含药血清和空白血清;使用附子含药血清(5%、10%、15%及20%)干预肝癌SK-Hep-1、SMMC-7721细胞,筛选最佳含药血清浓度;取对数期生长期SK-Hep-1、SMMC-7721细胞,采用CCK-8法检测附子含药血清对肝癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测对肝癌细胞凋亡的影响,Transwell实验和划痕实验来评估不同浓度的含药血清对细胞侵袭和迁移能力的影响;实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹法检测细胞中钙黏蛋白1(CDH1)、钙黏蛋白2(CDH2)和核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素10(IL-10)含量变化。结果附子含药血清能显著抑制肝癌细胞的增殖并增加其凋亡率,同时降低细胞的迁移和侵袭能力,这些效应随含药血清浓度的提高而增强;附子含药血清能够增加两种肝癌细胞中CDH1的蛋白质和mRNA表达,而降低CDH2和NF-κB蛋白质和mRNA的表达;附子含药血清还使两种肝癌细胞中TNF-α和TGF-β1含量降低,而IL-10含量增加,并且显示出剂量效应,且具有统计学意义(P<0.05)。结论附子含药血清抑制人肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡,其机制可能与调节CDH1、CDH2和NF-κB的表达有关。

青蒿琥酯下调lncRNA HOTAIR表达抑制肝癌细胞增殖及迁移作用

目的:探讨青蒿琥酯通过抑制lncRNA HOTAIR表达对人肝癌细胞增殖、迁移能力影响及其作用机制。方法:分别采用MTT法、Transwell小室法检测不同浓度青蒿琥酯对人肝癌细胞Huh7、HepG2增殖及迁移能力的影响;采用qRT-PCR法检测青蒿琥酯对Huh7细胞HOTAIR表达影响;使用HOTAIR过表达质粒转染Huh7细胞,qRT-PCR验证其转染效率;不同浓度青蒿琥酯处理正常Huh7细胞和Huh7+HOTAIR-OE细胞,MTT法、Transell小室法检测各组细胞增殖、迁移能力变化,验证HOTAIR过表达对青蒿琥酯抑癌作用影响,进一步了解青蒿琥酯通过调控HOTAIR实现对肝癌细胞的抑制作用。结果:青蒿琥酯可抑制人肝癌Huh7、HepG2细胞增殖及迁移能力,且呈剂量依赖性(P<0.05);青蒿琥酯可抑制Huh7细胞HOTAIR表达;HOTAIR过表达后减弱了青蒿琥酯抑制Huh7细胞的增殖及迁移能力(P<0.05)。结论:青蒿琥酯可能是通过或者部分通过下调lncRNA HOTAIR表达,从而达到抑制肝癌细胞增殖和迁移能力。

黄芪多糖对阿帕替尼抗肝癌细胞的增强作用及对CA199、CA724肿瘤标志物的影响

目的 探讨黄芪多糖对阿帕替尼抗肝癌活性以及CA199、CA724肿瘤标志物的影响。方法 采用CCK-8法检测黄芪多糖(50、100、200、400 mg/L)、阿帕替尼(10、20、40、80μmol/L)以及黄芪多糖联合阿帕替尼[3个浓度(100、200、400)黄芪多糖+20μmol/L阿帕替尼]对肝癌细胞存活率的影响。根据细胞存活率将肝癌细胞Hep3B分为对照组、200 mg/L黄芪多糖组、20μmol/L阿帕替尼组、200 mg/L黄芪多糖+20μmol/L阿帕替尼组。采用流式细胞术、Transwell法检测Hep3B凋亡率以及迁移、侵袭细胞数。ELISA法检测细胞培养液中糖类抗原199(CA199)、CA724水平。结果 对照组、200 mg/L黄芪多糖组、20μmol/L阿帕替尼组、200 mg/L黄芪多糖+20μmol/L阿帕替尼组Hep3B细胞凋亡率分别为(5.12±0.26)%、(8.92±0.47)%、(13.96±0.75)%、(37.73±1.95)%;细胞迁移数量分别为(274±12.23)个、(220±13.50)个、(198±10.83)个、(114±5.54)个;细胞侵袭数量分别为(188±7.65)个、(152±10.19)个、(127±8.53)个、(82±3.047)个;CA199水平分别为(28.43±1.67)U/ml、(23.56±2.16)U/ml、(20.29±1.25)U/ml、(5.42±0.22)U/ml,CA724水平分别为(68.96±3.49)U/ml、(60.45±3.26)U/ml、(56.97±1.70)U/ml、(26.16±1.65)U/ml。与对照组比较,200 mg/L黄芪多糖组、20μmol/L阿帕替尼组细胞存活率、迁移和侵袭数、CA199和CA724水平降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与200 mg/L黄芪多糖组、20μmol/L阿帕替尼组比较,200 mg/L黄芪多糖+20μmol/L阿帕替尼组细胞存活率、迁移和侵袭数、CA199和CA724水平降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05)。结论 黄芪多糖可增强阿帕替尼对肝癌细胞的抗增殖、促凋亡和抗迁移侵袭作用,并降低肿瘤标志物CA199、CA724的水平。