板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的 :板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐药细胞株BEL 740 4/ADM耐药逆转作用及机制研究。方法 :MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用 ;免疫组化法检测细胞P 糖蛋白 (P gp)和多药耐药相关蛋白 (MRP)的表达 ;采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM的浓度。结果 :耐药肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物产生多药耐药性 ,耐药细胞P gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞 (P <0 .0 1) ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ;ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时 ,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论 :肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物具有多药耐药性 ,其多药耐药性与P gp和MRP过量表达有关 ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低P gp药物外排功能。

蝎毒对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM逆转作用研究

目的:研究蝎毒(BMK)对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM耐药逆转的的机理。方法:采用免疫组化检测细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达,荧光定量PCR法检测多药耐药基因MDR1 mRNA水平。结果:50mg/L蝎毒处理Bel-7404和Bel-7404/ADM后,细胞表面P-gp表达分别由原来的4.20±0.05、68.49±3.07下降到4.05±0.07、37.15±2.03,差异均有统计学意义(u=3.0253,P=0.0025)。多药耐药基因MDR1 mRNA表达分别由原来的1.73±0.35、9.51±1.82下降到2.35±0.18、4.58±0.22,差异无统计学意义(u=1.6036,P=0.1088)。结论:BMK在非细胞毒剂量水平具有下调MDR1 mRNA、P-gp的表达的作用。

转染HBx诱导肝癌细胞株Bel-7404多药耐药的初步研究

目的研究HBx转染对肝癌细胞株Bel-7404增殖、细胞周期以及多药耐药的影响,并探讨HBx转染诱导肝癌多药耐药发生的可能机制。方法选用人肝癌Bel-7404细胞株进行转染,根据HBx转染情况将细胞分为三组,分别为转染HBx细胞组(Bel-7404-HBx组)、转染空载体细胞组(Bel-7404-con组)和空白细胞组(Bel-7404组);实时定量PCR检测各组细胞中HBx RNA的表达。Western blot法检测各组细胞中HBx、Notch-1和多药耐药蛋白(MRP)的表达,CCK-8法检测各组细胞增殖活性和多药耐性,流式分析仪检测各组细胞生长周期。结果 PCR扩增凝胶电泳显示Bel-7404-HBx组有HBx片段出现,而其他两组未见HBx m RNA的表达;Western bolt结果显示在Bel-7404-HBx组处有蛋白条带(即HBx蛋白),而Bel-7404组和Bel-7404-con组未见表达。与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Bel-7404-HBx组细胞增殖显著加快(P<0.05);与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Notch-1和MRP在Bel-7404-HBx组的蛋白表达增加;细胞周期结果显示,与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Bel-7404-HBx组G_0/G_1期细胞显著减少(P<0.05),S期显著增加(P<0.01),G_2/M期变化不大(P>0.05);多药耐药实验显示,与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,丝裂霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、顺铂和奥沙利铂在Bel-7404-HBx组中耐药指数明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论转染HBx的Bel-7404细胞可能通过诱导Notch-1与MRP的过表达,最终导致肝癌细胞株Bel-7404增殖能力增强和多药耐药的发生。

熊果酸对肝癌细胞株Bel-7404转移及侵袭能力的影响

目的 观察熊果酸（UA）对肝癌细胞株Bel-7404细胞转移侵袭能力及相关基因基质金属蛋白酶（MMP）-2、金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-2 mRNA和蛋白表达水平的影响.方法 选用3个组：A组（UA 50 μmol/L）、B组（顺铂10mg/L）和C组（DMEM空白对照）对Bel-7404细胞进行处理,用细胞迁移实验及Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot法检测细胞中MMP-2、TIMP-2 mRNA及蛋白的表达水平.结果 对Bel-7404细胞作用48 h后,A、B两组细胞的迁移速率（35.2±8.7）、（30.5±8.6）μm/h及侵袭穿膜细胞数（21.2±5.3）、（20.2±5.7）个、MMP-2 mRNA 0.24±0.06、0.23±0.05及蛋白0.21±0.01、0.24±0.04表达水平均较C组（75.6±8.7）μm/h、（54.8±7.8）个、0.46±0.11、0.42±0.06明显降低,差异均有统计学意义（P〈0.01）,而TIMP-2 mRNA0.87±0.05、0.83±0.06及蛋白0.98±0.06、0.95±0.09表达水平均比C组0.31±0.02、0.59±0.02高,差异均有统计学意义（P〈0.01）;A、B两组间细胞的迁移速率、侵袭穿膜细胞数、MMP-2和TIMP-2 mRNA及蛋白表达水平的比较差异均无统计学意义（P〉0.05）.结论 UA可抑制肝癌Bel-7404细胞株的迁移侵袭,其机制可能与MMP-2表达下调而TIMP-2表达上调有关.UA 50 μmol/L对Bel-7404细胞迁移侵袭能力的抑制作用与顺铂10 mg/L具有相同的效果及机制.

夜香树3种甾体皂苷对人肝癌细胞株BEL-7404增殖抑制作用机制研究

目的:探讨夜香树3种甾体皂苷(SSCN)对肝癌细胞株BEL-7404增殖抑制作用及其机制。方法:夜香树叶用有机溶剂提取并鉴定3种SSCN,体外培养BEL-7404细胞,采用细胞集落形成法体外测定SSCN对人肝癌细胞株BEL-7404增殖的影响;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率变化;单细胞凝胶电泳(SCGE)分析细胞DNA损伤;用质粒PBR322解旋反应观察SSCN对肿瘤BEL-7404细胞拓扑异构酶Ⅱ的影响。结果:3种SSCN对肝癌细胞BEL7404有明显的抑制作用,并呈剂量-时间依赖性,流式细胞仪分析结果显示,G0/G1和G2/M期细胞数增多,S期减少,呈现细胞阻滞现象,并伴有大量的细胞凋亡。SSCN可以引起DNA损伤,对TopoⅡ活性有抑制作用,可抑制TopoⅡ介导的质粒DNA超螺旋的解旋。结论:SSCN对BEL-7404细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能是:①阻滞细胞于G2/M期,最终导致细胞死亡。②损伤DNA,造成DNA双链断裂。③抑制Topo II的催化活性,使DNA超螺旋增加。

顺铂对肝癌细胞BEL-7404、BEL-7404/ADM中hTERT表达的研究

目的观察不同浓度及作用时间顺铂对BEL-7404、BEL-7404/ADM肝癌细胞hTERT-mRNA表达及影响。方法以不同浓度顺铂处理BEL-7404细胞24h、48h、72h后,RT-PCR检测hTERT-mRNA表达。结果不同浓度DDP处理48h、72h后,BEL-7404细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,与对照组比较有显著性差异,对比BEL-7404/ADM细胞,随着DDP剂量和作用时间的增加,hTERT活性也呈减弱趋势。结论顺铂可降低BEL-7404、BEL-7404/ADM细胞hTERT-mRNA表达,表现为明显的时间及浓度的依赖性。

两种儿茶素成分体外逆转人肝癌细胞BEL-7404/ADR多药耐药性

背景与目的:儿茶素具有多种抗肿瘤的活性,目前,国内外尚未见儿茶素用于肝癌多药耐药性的研究。本研究拟探讨两种儿茶素成分表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用及可能的机制。方法:MTT法检测ECG、EGCG的细胞毒作用;荧光分光光度法检测细胞内化疗药物的含量;RT-PCR法检测mdr1基因的表达。结果:ECG和EGCG在100mg/L以下剂量时对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADR的抑制率均小于10%,60mg/L的ECG和14mg/L的EGCG分别与0.8mg/L的阿霉素(adriamycin,ADM)合用能使ADM对BEL-7404/ADR的IC50由36mg/L分别下降至2.3mg/L和1.9mg/L,增敏倍数分别为15.8倍和19.2倍,联合用药可使细胞内ADM的浓度由(0.76±0.02)μg/108cells～(2.55±0.17)μg/108cells提高到(2.04±0.07)μg/108cells～(9.28±0.59)μg/108cells(P<0.01),并使mdr1表达与对照组相比分别下降了27.6%及41.3%,逆转肿瘤MDR作用以EGCG为强。结论:EGCG和ECG具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调mdr1表达、增加细胞内化疗药物的积累有关。

白英提取物诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用

目的 探讨中药白英提取物对肝癌BEL 74 0 4细胞系的凋亡作用。方法 用不同浓度的白英提取物处理肝癌BEL 74 0 4细胞 ,通过观察细胞形态、DNA凝胶电泳法研究白英提取物诱导肝癌BEL 74 0 4细胞产生凋亡现象。结果 光学显微镜下可见细胞呈凋亡特征性变化 ,凝胶电泳可见细胞DNA有规律断裂形成梯形图谱。结论 白英可诱导肝癌BEL 74 0

黄芪多糖协同顺铂对BEL-7404人肝癌细胞的杀伤作用

目的 探讨黄芪多糖对人肝癌细胞BEL- 740 4细胞株细胞周期的影响及与顺铂联合使用,对BEL- 740 4肝癌细胞的杀伤作用。方法 通过四氮甲唑蓝(MTT )实验检测细胞的增殖抑制率,以观察黄芪多糖对肝癌细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡率。结果 黄芪多糖可抑制肝癌BEL- 740 4细胞的生长、增殖;与顺铂联合应用对BEL 740 4肝癌细胞杀伤作用强于2种药物单独使用。黄芪多糖处理后的BEL- 740 4细胞出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,将细胞周期阻滞于G1期。结论 黄芪多糖对肝癌BEL -740 4细胞有杀伤作用;黄芪多糖与顺铂联合使用具有协同抗肿瘤作用。

40种香豆素类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞生长抑制活性的筛选

目的:寻找中药中抗肿瘤活性化合物和先导化合物,为开发新药奠定基础。方法:采用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402体外培养法,鉴定受试的40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:伞形花内酯刘寄奴酸酯、木桔素、环氧酸橙皮油素、酸橙皮油素、前胡酮、芸香苦素、牛防风素和异香柑内酯对人胃癌细胞株BGC细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、异虎耳草素、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系。结论:香豆素类化合物是潜在的抗肿瘤药物。

44种生物碱类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:伊波加因、哈尔明碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、马兜铃酸I、番茄碱苷、澳洲茄次碱、茄次碱、金鸡宁、罂粟碱和酒石酸麦角胺对人胃癌细胞株BGC细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为黄连碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱和金鸡宁,其次为伊波加因、哈尔明碱、小檗碱、马兜铃酸I、茄次碱、罂粟碱和酒石酸麦角胺。蛇根精、γ-崖椒碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、吐根碱、马兜铃酸I、茄次碱和喜树碱对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、小檗碱、延胡索碱和喜树碱,其次为黄连碱、马兜铃酸I和茄次碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

蝎毒对人肝癌Bel-7404细胞端粒酶活性的影响

目的 :观察蝎毒 (BMK)对人肝癌Bel 740 4细胞端粒酶活性的影响。方法 :不同浓度的BMK处理体外培养的人肝癌Bel 740 4细胞 72h ,聚合酶链反应 端粒重复扩增 (PCR TRAP)法测定端粒酶活性 ,四甲基偶氮唑盐比色 (MTT)法测定细胞增殖抑制。结果 :BMK可抑制Bel 740 4细胞端粒酶活性 ,随BMK浓度增大 ,端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示BMK抑制Bel 740 4细胞增殖且抑制有浓度依赖性。结论 :端粒酶活性的抑制可能是BMK发挥抗癌活性的作用机制之一 。

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭影响机制研究

目的:观察白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并研究其内在分子机制。方法:采用MTT法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对Bel-7404细胞凋亡的影响;Transwell法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞侵袭的影响。结果:白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞增殖,也可以诱导Bel-7404细胞凋亡,均呈浓度依赖性,与下调Procaspase3和PARP蛋白表达有关。白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞侵袭性,呈浓度依赖性,与下调MMP-9、VEGF蛋白表达有关。结论:白藜芦醇可以抑制肝癌Bel-7404细胞增殖,通过剪切Procaspase3、PARP蛋白而诱导凋亡,通过下调MMP-9和VEGF蛋白表达水平而抑制Bel-7404细胞侵袭性。

藤茶双氢杨梅树皮素对人肝癌BEL-7404细胞增殖的抑制作用

目的:探讨藤茶双氢杨梅树皮素(APS)的抗肿瘤作用。方法:以MTT法、生长曲线法、克隆形成法观察APS对人肝癌BEL-7404细胞的体外抑制作用。结果:MTT法中,APS对BEL-7404细胞的IC50为22.99μg/mL;细胞生长曲线法提示其对BEL-7404细胞生长有明显抑制作用;克隆形成法中,药物浓度在9.88μg/mL以上时抑制率为100%,药物浓度为6.58μg/mL时抑制率为69.65%。结论:APS对BEL-7404细胞的增殖有明显的抑制作用。

白藜芦醇联合放疗对肝癌Bel-7404细胞体外凋亡的影响

目的探讨不同剂量白藜芦醇联合不同剂量放疗对肝癌Bel-7404细胞凋亡的影响。方法用MTT法检测不同浓度白藜芦醇(0,25,50,100μmol/L)对肝癌Bel-7404细胞增殖的影响,用荧光显微镜检测不同浓度白藜芦醇细胞凋亡情况,寻找恰当的白藜芦醇的浓度进行下一步实验。按照不同的放射治疗剂量分组如下:A组予单纯白藜芦醇干预组;B组行放射治疗剂量2 Gy+白藜芦醇干预;C组行放射治疗剂量4 Gy+白藜芦醇干预;D组行放射治疗剂量6 Gy+白藜芦醇干预;检测肿瘤细胞的增殖、运动侵袭、细胞凋亡及各组细胞MMP-2、VEGF的表达情况。结果检测结果显示,白藜芦醇可以有效抑制肝癌Bel-7404细胞生长、促进肝癌Bel-7404细胞凋亡,呈浓度依赖关系。根据实验结果,选择25μmol/L白藜芦醇进行体外放疗的实验。与A组相比,B、C、D组对肝癌Bel-7404细胞的增殖凋亡作用均有显著性差异(P均<0.05);B组与C、D组有显著性差异(P均<0.05),C组与D组无显著性差异(P>0.05)。结论不同剂量放疗联合25μmol/L白藜芦醇均可提高放射治疗后肝癌Bel-7404细胞凋亡率,降低肿瘤侵袭性;白藜芦醇可能具有放疗增敏的作用。

芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖的影响

研究芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖的影响。方法:采用人肝癌细胞株Bel-7402和细胞药理学方法,对比观察3种措施(阴性无药对照、阳性阿霉素对照及芍药甙)对Bel-7402细胞增殖的影响。结果:芍药甙(2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml)对Bel-7402细胞增殖均有显著性抑制作用(均P<0.01),其抑制率分别为33.78％、22.22％和11.56％,增殖抑制作用随药物浓度增高而加强,呈显著的量效关系。结论:芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖有一定的抑制作用。

生长激素受体在Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株中的表达

目的了解Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与RT鄄PCR法检测GHR在Bel鄄7402与QGY-7701肝癌细胞株的表达。结果7402肝癌细胞可表达GHRmRNA,在蛋白表达水平放射性配体法发现GHR在此肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891,平衡解离常数为0.63±0.04583nmol/L;未发现7701肝癌细胞株表达GHR。结论7402肝癌细胞株表达GHR,可为将来研究rhGH与原发性肝癌的增殖关系奠定一些实验基础。

5-FU持续和间歇处理对Bel-7402肝癌细胞株的抑制作用

目的:评价体外5FU持续和间歇处理对Bel7402肝癌细胞株的生长抑制作用。方法:体外培养Bel7402肝癌细胞株,用一系列不同浓度的5FU对Bel7402肝癌细胞株分别进行每天24小时持续处理及2小时间歇处理,4天后进行MTT试验,检测肿瘤细胞的生长抑制率,对两组的IC50进行比较。结果:5FU处理浓度依次10.0μg/L、25.0μg/L、50.0μg/L、75.0μg/L、100.0μg/L、250.0μg/L、500.0μg/L、750.0μg/L、1000.0μg/L、2500.0μg/L、5000.0μg/L、7500.0μg/L、10000.0μg/L、20000.0μg/L持续处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1.34%、2.01%、7.21%、10.37%、18.64%、29.96%、35.06%、43.35%、50.66%、87.63%、93.63%、94.46%、99.27%、99.35%,IC50是991.7μg/L。5FU处理浓度依次120.0μg/L、300.0μg/L、600.0μg/L、900.0μg/L、1200.0μg/L、3000.0μg/L、6000.0μg/L、9000.0μg/L、12000.0μg/L、18000.0μg/L、60000.0μg/L、90000.0μg/L、120000.0μg/L、240000.0μg/L2小时间歇处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1.32%、1.78%、2.01%、2.89%、3.57%、5.94%、8.30%、10.36%、15.25%、17.27%、25.95%、32.63%、43.66%、67.81%,IC50为146600μg/L,为持续处理组的1478倍。

人肝癌细胞株HepG2和BEL-7402对放射敏感性的体外实验研究

目的 采用体外实验方法探讨人肝癌细胞株HepG 2和BEL -740 2对放射的敏感性。方法 对人肝癌细胞株HepG2和BEL -740 2进行体外培养 ,应用集落形成法和MTT法测定 6MVX线不同剂量照射后细胞的存活率 ,计算 2株细胞放射敏感性参数 (D0 )。结果 HepG 2的D0 值为 1.5 ,SF2 为 (0 .45± 0 .0 5 ) ;BEL -740 2的D0 值为 1.6,SF2 为 (0 .63± 0 .0 5 )。MTT法与集落形成法相关性较好 (γ =0 .946,P <0 .0 5 )。结论 HepG2具有较高的放射敏感性 ,BEL -740 2的放射敏感性较低 ;MTT法可替代集落形成法作细胞放射敏感性的快速测定。