山萘酚逆转肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的作用机制研究

目的探讨山萘酚(KAE)对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu功能的影响。方法采用KAE处理Bel-7402/5-Fu细胞,将细胞分为对照组和药物组(0.064、0.320、1.600、8、40、200μmol/L KAE);根据干扰DNA依赖性激酶催化亚基(DNA-PKcs)、加入蛋白酶体抑制剂MG132或加入自噬抑制剂CQ,将细胞分为si-NC组和DNA-PKcs干扰(siRNA-1664、siRNA-2142、siRNA-3785)组,对照组、KAE组和KAE+si-DNA-PKcs组,对照组、KAE+DMSO组、KAE+MG132组和KAE+CQ组。采用CCK-8检测细胞增殖,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测组蛋白H_(2)AX磷酸化(γ-H_(2)AX)、DNA-PKcs、DNA双链断裂修复/V(D)J重组蛋白(Artemis)和药泵基因(P-gp)mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,蛋白稳定性实验检测DNA-PKcs蛋白稳定性,免疫共沉淀检测DNA-PKcs蛋白泛素化。结果与对照组相比,8μmol/L KAE处理细胞24 h可抑制约50%的细胞增殖能力,选择此时间和浓度进行后续研究。与对照组相比,KAE组γ-H_(2)AX mRNA和蛋白表达水平升高,DNA-PKcs、Artemis和P-gp mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与对照组相比,KAE促进Bel-7402/5-Fu细胞周期阻滞于G2/M期,增加细胞凋亡;与si-NC组相比,siRNA-1664能显著下调DNA-PKcs mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);与KAE组相比,KAE+si-DNAPKcs组进一步促进了KAE对细胞的效应;与对照组相比,KAE+DMSO组DNA-PKcs蛋白表达水平降低(P<0.05);与KAE+DMSO组相比,KAE+MG132组DNA-PKcs蛋白表达水平升高(P<0.05),而KAE+CQ组DNA-PKcs蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与对照组相比,KAE+DMSO组促进DNA-PKcs蛋白的泛素化,而KAE+MG132组则可抑制其泛素化(P<0.05)。结论KAE能够诱导肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的细胞凋亡和细胞周期阻滞。

半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺递送siRNA对肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中MRE11表达的影响

背景:壳聚糖是一种常用的非病毒载体,具有良好生物相容性、生物可降解性、低毒等优点,但其基因递送能力相对较弱,常需要进行结构衍生修饰。目的:观察半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺(LA-CS-PEI)在肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中递送si RNA的能力及对减数分裂重组蛋白11(MRE11)表达的影响。方法:1将肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu或人肝细胞HL-7702分别与0,10,20,40,80,100 mg/L的LA-CS-PEI或壳聚糖-聚乙烯亚胺共培养24 h,检测细胞存活率;2将LA-CS-PEI与si RNA-FAM分别以0,2,4,8,16,32的质量比混合,制备复合转染颗粒。以复合转染颗粒转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu,48,72,96 h后,以转染效率筛选最佳质量比与转染时间,进行下步实验;3以复合转染颗粒、LA-CS-PEI、si RNA分别转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu 48 h后,以未转染的细胞为空白对照,检测MRE11基因及蛋白的表达。结果与结论:1与壳聚糖-聚乙烯亚胺相比,LA-CS-PEI毒性更低,且当LA-CS-PEI质量浓度高达100 mg/L时,仍表现出很低的细胞毒性;2LA-CS-PEI与si RNA-FAM质量比为4和8时转染效率均达95%以上,入胞效率极高,转染48 h转染效果最好,所以后续实验选择质量比为8,转染时间为48 h的复合转染颗粒;3复合转染颗粒组MRE11基因及蛋白表达低于LA-CS-PEI组、si RNA组、空白对照组(P<0.05);4结果表明,LA-CS-PEI能实现si RNA的有效递送,并能沉默肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中的MRE11基因。

MRE11沉默对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU增殖和凋亡的影响

目的:观察shMRE11对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU细胞增殖和凋亡的影响,初步探索MRE11与肝癌发生发展的关系。方法:采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞,Real-time PCR及Western blot检测沉默效率;MTT法检测转染前后BEL7402/5-FU细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染法检测MRE11基因沉默对BEL7402/5-FU细胞凋亡的影响。结果:Real-time PCR及Western blot检测结果显示MRE11 mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0%、56.1%。MTT结果显示,shMRE11转染BEL7402/5-FU细胞后,shMRE11实验组与对照组相比细胞增殖速度减慢(P<0.05)。AnnexinV-FITC/PI双染法检测结果显示shMRE11实验组的细胞凋亡指数增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:shMRE11干扰质粒能够抑制BEL7402/5-FU细胞增殖,促进细胞凋亡。

沉默DNA依赖蛋白激酶亚基对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu DNA损伤修复功能的影响

目的探讨DNA依赖蛋白激酶亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu DNA损伤修复功能的影响。方法采用阳离子脂质体法将sh DNA-PKcs干扰质粒转染Bel-7402/5-Fu细胞,根据荧光细胞数计算转染率,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot检测DNA-PKcs的沉默效率;Western blot检测TopoⅡ、γ-H2AX蛋白表达;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷法检测细胞DNA合成。结果质粒的转染效率为67%;q RT-PCR及Western blot检测结果显示,DNA-PKcs m RNA及蛋白水平的沉默效率分别为82.6%和71.8%;Western blot结果显示,实验组TopoⅡ蛋白表达水平比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05),γ-H2AX蛋白表达水平比对照组高,差异有统计学意义(P<0.01)。5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷法结果显示,实验组DNA合成率比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 sh DNA-PKcs干扰质粒能下调Bel-7402/5-Fu细胞中DNA-PKcs、TopoⅡ蛋白的表达,抑制Bel-7402/5-Fu细胞DNA合成。

shRNA沉默MRE11表达对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FUDNA损伤修复的影响

目的:观察shMRE11沉默MRE11基因对肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU DNA损伤修复功能的影响.方法:采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞,Real-time PCR及Western blot检测沉默效率;Western blot检测细胞-H2AX蛋白表达;EdU法检测细胞DNA合成;MTT法检测细胞增殖情况.结果:Real-time PCR及Western blot检测结果显示MRE11 mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0%、56.1%;Western blot检测-H2AX表达结果显示shMRE11实验组(1.04±0.056)较对照组(0.847±0.025)增加(P<0.05,t=10.78);EdU检测结果显示shMRE11实验组DNA合成率(38.819%±2.607%)较对照组(49.814%±1.227%)降低(P<0.05,t=-8.87);MTT细胞增殖检测结果显示转染72 h后shMRE11实验组(0.58±0.08)与对照组(0.87±0.09)相比细胞增殖速度减慢(P<0.05,t=-50.2).结论:shMRE11干扰质粒能够有效抑制B E L7402/5-F U细胞中M R E11表达,使细胞DNA损伤修复能力减弱、抑制细胞增殖.

shMRE11质粒转染对BEL7402/5-FU肝癌细胞耐药性的影响

目的研究减数分裂重组蛋白11(MRE11)基因沉默对5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的肝癌细胞株Bel7402/5-FU的化疗敏感性及耐药相关蛋白1(MRP1)表达的影响,探讨MRE11与肝癌耐药性的关系。方法采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测沉默效率;MTT法检测转染后BEL7402/5-FU细胞对化疗药物顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、5-FU的敏感性,qRT-PCR及Western blot法分别检测转染后BEL7402/5-FU细胞中耐药相关蛋白MRP1 mRNA水平及蛋白水平的变化。结果 qRT-PCR及Western blot法检测显示MRE11mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0%、56.1%。MTT结果显示,shMRE11转染BEL7402/5-FU细胞后,shMRE11实验组对DDP、MMC、ADM、5-FU的IC50均低于对照组(P<0.05)。qRT-PCR及Western blot法检测结果显示shMRE11实验组MRP1mRNA及蛋白水平的表达与对照组相比均有所降低(P<0.05)。结论 shMRE11能够提高肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU对化疗药物的敏感性,降低耐药相关蛋白MRP1的表达。

5-FU持续和间歇处理对Bel-7402肝癌细胞株的抑制作用

目的:评价体外5FU持续和间歇处理对Bel7402肝癌细胞株的生长抑制作用。方法:体外培养Bel7402肝癌细胞株,用一系列不同浓度的5FU对Bel7402肝癌细胞株分别进行每天24小时持续处理及2小时间歇处理,4天后进行MTT试验,检测肿瘤细胞的生长抑制率,对两组的IC50进行比较。结果:5FU处理浓度依次10.0μg/L、25.0μg/L、50.0μg/L、75.0μg/L、100.0μg/L、250.0μg/L、500.0μg/L、750.0μg/L、1000.0μg/L、2500.0μg/L、5000.0μg/L、7500.0μg/L、10000.0μg/L、20000.0μg/L持续处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1.34%、2.01%、7.21%、10.37%、18.64%、29.96%、35.06%、43.35%、50.66%、87.63%、93.63%、94.46%、99.27%、99.35%,IC50是991.7μg/L。5FU处理浓度依次120.0μg/L、300.0μg/L、600.0μg/L、900.0μg/L、1200.0μg/L、3000.0μg/L、6000.0μg/L、9000.0μg/L、12000.0μg/L、18000.0μg/L、60000.0μg/L、90000.0μg/L、120000.0μg/L、240000.0μg/L2小时间歇处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1.32%、1.78%、2.01%、2.89%、3.57%、5.94%、8.30%、10.36%、15.25%、17.27%、25.95%、32.63%、43.66%、67.81%,IC50为146600μg/L,为持续处理组的1478倍。

DNA-PKcs影响肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu增殖及机制的研究

目的检测DNA-PKcs对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu增殖的影响及其相关机制,探讨DNA-PKcs在肝癌多药耐药的发生发展中的作用。方法采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs转染Bel-7402/5-Fu细胞,cck-8法检测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期;Western blot检测DNA-PKcs、TS蛋白的表达情况。结果实验组与对照组比较,细胞增殖减少(P<0.05);实验组S期细胞与对照组比较,细胞数减少(P<0.05);DNA-PKcs、TS蛋白表达结果显示,实验组相比对照组蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DNA-PKcs的表达沉默能抑制肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的细胞增殖;其机制可能与沉默DNA-PKcs蛋白表达后,TS蛋白表达下调有关。

shRNA沉默DNA-PKcs表达对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU耐药性的影响

目的观察shDNA-PKcs沉默DNA-PKcs基因对肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU耐药性的影响。方法采用双酶切、测序分析鉴定shDNA-PKcs干扰质粒;用阳离子脂质体法将shDNA-PKcs质粒转染BEL7402/5-FU细胞,根据荧光细胞数计算转染率,Real-time PCR及Western blot检测沉默效率;MTT法检测细胞药物敏感性;Real-time PCR和Western blot检测P-gp mRNA和蛋白表达。结果双酶切鉴定结果显示质粒约为6300bp,测序结果显示插入序列为shDNA-PKcs序列。荧光细胞计数显示质粒的转染率为62.2%。Real time PCR及Western blot检测结果显示DNA-PKcs mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为82.6%、71.8%;MTT检测结果显示shDNA-PKcs实验组的ADM和5-FU的IC50值比对照组ADM、5-FU低(P<0.05),DDP和MMC的IC50值与对照组比无统计学意义(P>0.05)。Real time PCR和Western blot检测结果显示实验组P-gp mRNA、蛋白表达水平均比对照组低(P<0.01)。结论 shDNA-PKcs干扰质粒能够有效抑制BEL7402/5-FU细胞中DNA-PKcs表达,增加细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与P-gp蛋白的下调有关。

Artemis影响人肝癌细胞BEL-7402/5-FU化疗药物敏感性的研究（英文）

目的探讨Artemis对人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU化疗药物敏感性的影响及其可能机制。方法将p SGU6/GFP/Neo/sh Artemis干扰质粒转染人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU(sh Artemis组),通过Real-time PCR法检测P-gp基因表达水平变化;MTT法检测sh Artemis组细胞对5-氟尿嘧啶、丝裂霉素及索拉菲尼的IC50值和RI值;利用Western-blot法检测p-Artemis和ATM蛋白水平表达变化;使用ATM抑制剂KU55933联合丝裂霉素作用细胞48 h,Westernblot法观察ATM、γ-H2AX和Artemis蛋白水平表达变化。结果与对照组比较,sh Artemis组的P-gp mRNA表达水平下降(P<0.05),且对5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和索拉菲尼的敏感性增加,IC50值和RI值均降低(P<0.05)。sh Artemis组的pArtemis与ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);KU55933联合丝裂霉素作用细胞后,有效减少ATM蛋白的表达(P<0.05),同时γ-H2AX蛋白表达量增加(P<0.05),但Artemis蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论靶向干扰Artemis的表达能够增强细胞BEL-7402/5-FU对化疗药物的敏感性。此效应可能与Artemis作为BEL-7402/5-FU DNA损伤修复的分子开关,进而通过影响ATM参与DNA损伤修复有关。

低浓度5-Fu24-小时持续化疗对BEL-7402肝癌细胞株的细胞周期的影响

目的研究低浓度5-Fu24-小时持续化疗和高浓度5鄄Fu短时间化疗对BEL-7402肝癌细胞株的细胞周期的影响。方法用低浓度(1000.0μg/L)的5-Fu对BEL-7402肝癌细胞株进行持续24小时的培养(A组),用高浓度(50000.0μg/L)的5-Fu对BEL-l7402肝癌细胞株进行2小时培养(B组),在培养后的不同时间点用流式细胞技术检测细胞周期的变化。结果A组结果显示:0h、4h、8h、12h、16h、20h和24h的S期细胞的百分数分别为25.23%、32.35%、39.28%、41.05%、46.02%、47.00%及47.14%。B组结果显示:0h、4h、8h、12h、16h、20h和24h的S期细胞的百分数分别为24.68%、68.43%、46.67%、43.67%、35.42%、33.22%及32.96%。结论5-Fu引起的S期细胞周期阻滞不但和浓度相关,也和作用时间相关。低浓度(1000.0μg/L)的5-Fu持续化疗较高浓度(50000.0μg/L)的5-Fu短时间(2小时)化疗更容易引起BEL-7402肝癌细胞株S期阻滞。

肝靶向药物Gal-HSA-5-FU对Bel-7402肝癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的了解合成的肝靶向药物半乳糖化人血清白蛋白与5-氟尿嘧啶偶联物（galactosylated human serum albumin 5-fluorouracil conjugate，Gal-HSA-5-FU）对肝癌细胞Bel-7402细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法（噻唑蓝还原法）检测Gal-HSA-5-FU对细胞生长的抑制率和IC50，流式细胞术分析细胞周期变化，荧光染色法观察细胞凋亡。结果0．953-30．500mg·L^-1 Gal-HSA-5-FU分别处理Bel-7402细胞24、48、72h，细胞增殖被抑制，其增殖抑制率随药物质量浓度的增加和作用时间的延长而增高，其IC50值分别为（20．957±0．752）、（11．793±0．546）、（5．843±0．735）mg·L^-1，48、72h的IC50值明显低于24h的IC50值，差异均有统计学意义（P〈0．01）。相同质量浓度5-FU与Gal-HSA-5-FU作用24h，其IC50值差异无统计学意义（P〉0．05）。Gal-HSA-5-Fu作用Bel-7402 24h，S期细胞明显升高，G2／M期细胞明显下降。荧光染色偶见凋亡细胞。结论Gal-HSA-5-FU能抑制Bel-7402细胞增殖，且抑制作用具有剂量和时间依赖性；一定剂量的Gal-HSA-5-FU可能通过阻滞Bel-7402于S期而抑制其增殖。

木瓜凝乳蛋白酶与5-Fu或MTX对人肝癌细胞7402的细胞毒试验

目的 :测定木瓜凝乳蛋白酶及其与 5 氟尿嘧啶 (5 Fu)、氨甲喋呤 (MTX )单独或联合作用对人肝癌细胞740 2的细胞毒性。方法 :采用MTT法 ,不同浓度的酶和药物在不同的培养时间下 ,通过其细胞抑制率和半数抑制率 (IC50 )测定木瓜凝乳蛋白酶及联合药物的细胞毒性。结果 :木瓜凝乳蛋白酶对 740 2细胞的IC50 约为 12 5 μg/mL ,随浓度增加对细胞的抑制率增加。培养 3 6h时酶对细胞的毒性最大。酶与 5 Fu、MTX联合使用比单独使用效果更好。结论 :木瓜凝乳蛋白酶对人肝癌细胞 740 2具有细胞毒作用 ,酶在培养 3 6h时细胞毒作用最大 ;

MiRNA-122对5-氟尿嘧啶诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响

目的探讨微水RNA-122(miR-122)对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响。方法构建miR-122和阴性对照质粒瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-8,caspase-9和caspase-3蛋白表达水平。结果仅用miR-122处理BEL-7402/5-FU细胞时,与未转染组和转染对照组比较,miRNA-122转染组细胞凋亡率增加,用10μmol/m L 5-FU作用BEL-7402/5-FU细胞24 h后,与未转染组和转染对照组比较,miR-122转染组细胞凋亡率明显增加;与未转染组和转染对照组比较,转染了miRNA-122的BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达降低,活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达升高。结论 miR-122能够下调BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达,上调活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达,miR-122能促进5-FU诱导的BEL-7402/5-FU细胞凋亡。

miR-503下调Bcl-2增强BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的:探讨miR-503通过调控Bcl-2的表达介导肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU对5-氟尿嘧啶敏感性的影响.方法:microRNA(miRNA)芯片筛选BEL-7402与BEL-7402/5-FU细胞中表达差异的miR-503为候选的miRNA;脂质体转染法将miR-503模拟物瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测BEL-7402/5-FU及其亲本细胞中miR-503、Bcl-2 mRNA的表达水平;Western Blot观察肝癌细胞中Bcl-2蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞药物敏感性的改变.结果:相比于BEL-7402细胞,miR-503在BEL-7402/5-FU细胞中表达水平下调,而Bcl-2蛋白的表达水平上调;miR-503过表达后BEL-7402/5-FU细胞中的Bcl-2在mRNA和蛋白水平上表达降低;miR-503转染组的BEL-7402/5-FU细胞活力较miRNA阴性对照组显著降低.结论:miR-503可能通过下调Bcl-2的表达,进而增强BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性,抑制细胞增殖.

MiR-122上调野生p53蛋白增强BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶敏感性

目的探讨MiRNA-122对肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU的5-氟尿嘧啶敏感性的影响以及作用机制。方法构建miR-122及其阴性对照空载体稳定转染至BEL-7402/5-FU细胞中,Western blot检测未转染组,阴性载体转染组和miR-122转染组中与耐药相关的p53蛋白表达水平。用MTT法和流式细胞术检测三组细胞对5-氟尿嘧啶敏感性。结果 MiR-122转染组与未转染组,阴性载体转染组比较,野生型p53蛋白表达水平升高。流式细胞术检测,miR-122转染组的细胞凋亡率较未转染组和阴性载体转染组高。结论 miR-122能上调野生型p53蛋白表达,增加BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶敏感性,从而成为治疗肝癌耐药治疗的一个方法。

MiR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶耐药性的影响

目的探讨miR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶药物敏感性的影响。方法采用qRTPCR检测BEL-7402细胞与BEL-7402/5-FU细胞中miR-195的表达水平。将miR-195质粒载体瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;MTT检测细胞药物敏感性的改变。结果相比于BEL-7402细胞,miR-195在BEL-7402/5-FU细胞中表达水平下调;miR-195转染组的细胞增殖抑制率较miRNA阴性对照组及未转染组明显增高。结论MiR-195能够增加BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性,抑制细胞增殖。

Artemis对人肝癌细胞系BEL-7402/5FU DNA损伤的影响

目的探讨转染sh Artemis干扰质粒对人肝癌细胞BEL-7402/5FU DNA损伤的影响。方法将人肝癌细胞分为正常对照组、脂质体对照组、空质粒对照组和转染sh Artemis干扰质粒实验组(sh Artemis实验组);建立DNA损伤模型,分别用0.625、1.25、2.5、5.0和10.0μg/m L的丝裂霉素C作用BEL-7402/5FU细胞24和48 h,MTT法检测细胞活性,Western blot观察磷酸化组蛋白H_2AX(γ-H_2AX)的表达;转染Artemis干扰质粒,检测Artemis、γ-H_2AX表达;彗星实验检测DNA的损伤。结果 0.625、1.25、2.5、5.0和10.0μg/m L的丝裂霉素C作用48h后肝癌细胞活力明显下降(P<0.05);丝裂霉素C刺激细胞48 h后,γ-H_2AX的表达量随着药物浓度的增加而增加;转染sh Artemis干扰质粒后,γ-H_2AX的表达量较正常对照组增加(P<0.05);sh Artemis实验组较正常对照组拖尾DNA量增加(P<0.05)。结论丝裂霉素C能够诱导肝癌细胞损伤;转染sh Artemis干扰质粒促进丝裂霉素C诱导的人肝癌细胞BEL-7402/5FU DNA损伤。

三种蟾毒单体对SMMC-7721和BEL-7402人肝癌细胞生长的抑制作用

目的:探讨蟾蜍中主要蟾毒内酯类成分蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的抗肝癌作用及机制。方法:以SMMC-7721、BEL-7402人肝癌细胞为靶细胞,以丝裂霉素为阳性对照药物,应用四甲基偶氮唑盐比色法、锥虫蓝染色和DNA染色分析法观察这3种蟾毒单体对肝癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果:蟾毒灵和华蟾酥毒基对上述肝癌细胞具有明显生长抑制作用,华蟾酥毒基较蟾毒灵作用略弱,但两者达到相同生长抑制效果所需浓度均低于丝裂霉素,酯蟾毒配基只有在较高浓度下才显示对肝癌细胞的生长抑制作用;不同浓度蟾毒灵、华蟾酥毒基对人肝癌细胞细胞膜具有破坏作用;可使人肝癌细胞阻止于G2/M期,使处于S期的细胞比例降低,并有明显诱导肝癌细胞凋亡作用。结论:蟾毒灵、华蟾酥毒基对上述人肝癌细胞具有明显生长抑制作用,具有对肝癌细胞膜的直接破坏作用和诱导凋亡作用;酯蟾毒配基抗肿瘤作用较弱。

力达霉素增强顺铂诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡作用及机制研究

目的 研究抗肿瘤抗生素力达霉素与顺铂的体外协同抗肿瘤作用及其机制。方法 采用克隆形成法、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst3 3 3 42和PI双荧光染色法、Westernblot等方法。结果 力达霉素与顺铂联合对人肝癌BEL 740 2细胞有很强的协同杀伤作用 ;可以使BEL 740 2细胞的DNA出现明显的梯状断裂 ;可以使阻滞于S期的BEL 740 2细胞减少而使凋亡细胞比例明显增多 ;联合用药后BEL 740 2细胞核出现明显的凋亡形态变化 ;使BEL 740 2细胞内Bcl 2的表达显著降低。结论 力达霉素可以增强顺铂的抗肿瘤作用 。