芒柄花黄素联合下调miR-4326对肝癌细胞HCCLM3生长和侵袭的影响

目的研究芒柄花黄素联合下调miR-4326对肝癌细胞HCCLM3生长和侵袭的影响和机制。方法RT-qPCR检测各种肝癌细胞中miR-4326表达变化;MTT检测芒柄花黄素对HCCLM3细胞增殖影响;在HCCLM3细胞中转染miR-4326抑制物,并给予芒柄花黄素处理,MTT检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测E-cadherin、Vimentin、β-catenin、c-Myc蛋白表达;用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理转染miR-4326抑制物后的HCCLM3细胞,检测细胞增殖、迁移、侵袭变化。结果miR-4326在HCCLM3肝癌细胞中表达较高;芒柄花黄素处理后的HCCLM3细胞增殖能力降低;转染miR-4326抑制物和芒柄花黄素处理能够协同抑制肝癌细胞增殖、侵袭和迁移,提高细胞中E-cadherin蛋白表达,降低细胞中Vimentin、β-catenin、c-Myc蛋白表达;Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转芒柄花黄素联合下调miR-4326对HCCLM3细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论芒柄花黄素联合下调miR-4326抑制肝癌细胞HCCLM3生长和侵袭,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

过表达Glypican-3对高转移性肝癌细胞HCCLM3生物学行为的影响

旨在构建s GPC3/GPC3基因重组真核表达载体,研究过表达s GPC3/GPC3对HCCLM3人高转移性肝癌细胞生物学行为的影响。采用PCR法获得编码s GPC3/GPC3的基因片段并克隆到真核表达载体pc DNA3.0-GFP中,经脂质体介导转染HCCLM3肝癌细胞,RT-PCR和Western blot检测GPC3的表达情况;CCK-8法、克隆平板形成实验、细胞划痕实验、流式细胞术分别检测s GPC3/GPC3对HCCLM3生物学行为的影响。酶切分析、测序鉴定结果表明s GPC3/GPC3基因重组真核表达载体构建成功;RT-PCR和Western blot结果显示s GPC3/GPC3在HCCLM3中成功过表达。与正常组和转染空载体相比,过表达s GPC3/GPC3后,HCCLM3的增殖能力和克隆形成能力均受到明显抑制(P<0.05),迁移率显著下降,细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率增加。同时,过表达s GPC3对细胞的影响显著优于GPC3(P<0.05)。s GPC3/GPC3表达上调抑制高转移性肝癌细胞HCCLM3生长和迁移,促进细胞凋亡以及周期再分布,在高转移性肝癌发生发展过程中起重要作用。

PPTA抑制肝癌细胞HCCLM3的增殖、周期和迁移

目的初步研究PPTA对肝癌细胞HCCLM3增殖、周期和迁移的作用及机制.方法分别采用四甲基偶氦唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、流式细胞术、细胞划痕实验,观察PPTA对肝癌细胞HCCLM3增殖、周期和迁移的影响;采用细胞免疫荧光实验法观察PPTA对HCCLM3细胞肌动蛋白纤维的分布、丝状和片状伪足形成等的影响;采用Western blot法检测肝癌细胞HCCLM3中蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的表达.结果PPTA对HCCLM3细胞有抑制作用,抑制HCCLM3细胞增殖的IC_(50)在50μmol/L以下.当PPTA浓度为40μmol/L时,对HCCLM3细胞周期有抑制作用.PPTA对HCCLM3细胞划痕的相对愈合速度有抑制作用,随着浓度的升高抑制作用显著增强.细胞免疫荧光显示,HCCLM3细胞中丝状伪足增多,片状伪足减少,细胞排列更为紧密,当PPTA浓度为40μmol/L,作用显著;Western blot显示,当PPTA浓度为20、40μmol/L时,上调HCCLM3细胞的AKT表达,下调pAKT表达.结论PPTA抑制肝癌细胞HCCLM3的增殖、周期、迁移,其作用机制可能是调控AKT和ERK相关的信号通路.

ATP6L对人肝癌细胞HCCLM3侵袭能力的影响及其机制

目的观察ATP6L表达变化对人肝癌细胞HCCLM3侵袭能力等肿瘤生物学特性的影响，并探讨其作用机制。方法构建ATP6L-RNAi真核表达载体ATP6L-sh与阴性对照载体Con-sh，并分别转染至HCCLM3细胞，建立稳定干扰ATP6L的细胞株和阴性对照细胞株，通过细胞侵袭实验（Transwell）检测人肝癌细胞HCCLM3的体外侵袭能力变化，通过Westernblot实验、明胶酶谱测定、原位荧光酶谱测定等实验技术，检测ATP6L—sh和Con—sh两株细胞ATP6L蛋白表达水平、上清液基质金属蛋白酶（MMP）-2的活性以及胞内组织蛋白酶B（CathepsinB）活性的变化。结果与阴性对照细胞株比较，稳定干扰ATP6L表达的ATP6L-sh细胞株ATP6L蛋白表达水平明显下调，体外侵袭能力明显减弱。ATP6L—sh细胞与对照细胞分泌上清液中MMP-2活性分别为1．81±0．18、18．40±1．26（P〈0．05）；细胞内CathepsinB活性分别为228．6±21．1、471．7±21．4（P〈0．05），活性均明显降低。结论ATP6L在肿瘤侵袭过程中发挥重要作用，抑制ATP6L蛋白表达可有效降低肝癌细胞HCCLM3的侵袭能力，ATP6L蛋白对肿瘤细胞侵袭能力的影响可能与调控MMP-2和CathepsinB活性有关。

虫草素通过MEX3A抑制肝癌细胞增殖的机制研究

[目的]探讨虫草素通过肌肉增生蛋白3A(muscle excess 3A,MEX3A)抑制肝癌细胞增殖的分子机制。[方法]以0、50、100、150、200及250μmol·L^(-1)浓度的虫草素分别处理Huh-7肝癌细胞24、48及72 h,采用细胞增殖检测(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,筛选出虫草素最佳干预浓度及时间。使用最佳干预浓度虫草素对Huh-7肝癌细胞进行干预,并进行高通量转录组测序,对测序结果进行生物信息学分析,筛选差异基因。设立空白对照组、MEX3A沉默组、MEX3A过表达组、虫草素组、虫草素+MEX3A沉默组和虫草素+MEX3A过表达组,以CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率及S期细胞比例,集落形成实验检测各组细胞的增殖情况。最后采用免疫印迹法检测各组细胞周期信号通路的关键蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、细胞周期蛋白依赖性激酶6(cyclin-dependent kinase 6,CDK6)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)及细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)表达的变化情况。[结果]虫草素最佳干预浓度为200μmol·L^(-1),干预时间为48 h。高通量测序后转录组基因差异分析显示,虫草素组与空白对照组共存在564个差异基因,下调明显的基因集包括MEX3A基因。京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析发现,明显下调的基因高度富集在细胞周期等促肝癌细胞增殖的信号通路。与空白对照组比较,虫草素可明显抑制Huh-7细胞中MEX3A的mRNA及蛋白表达(P<0.001)。虫草素干预后Huh-7细胞活力降低、克隆数减少、凋亡增加、S期细胞比例减少(P<0.01)。回复实验显示,虫草素+si-MEX3A使肝癌细胞的活力和克隆数进一步减少,凋亡率进一步增加(P<0.01),而S期细胞比例进一步减少(P<0.01)。免疫印迹结果显示,虫草素干预组的CDK4、CDK6、Cyclin D1、CDK2和Cyclin E1蛋白表达明显降低(P<0.01),虫草素+MEX3A沉默组上述蛋白表达进一步降低(P<0.01)。[结论]虫草素通过降低MEX3A表达调控细胞周期相关蛋白,从而抑制肝癌细胞的增殖。

CT动脉增强分数、甲胎蛋白异质体3、中性粒细胞与淋巴细胞比值联合检测对肝癌患者介入化疗疗效的评估价值

目的 探讨CT动脉增强分数(AEF)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)联合检测对肝癌患者介入化疗疗效的评估价值。方法 选取94例肝癌介入化疗患者,所有患者均于术前1天、术后30天行CT增强扫描,并检测AFP-L3、中性粒细胞计数和淋巴细胞计数。根据临床疗效将患者分为治疗有效组[完全缓解(CR)+部分缓解(PR)]和治疗无效组[疾病稳定(SD)+疾病进展(PD)],比较两组患者的临床资料,采用Logistic回归模型分析肝癌患者介入化疗疗效的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析AEF、AFP-L3、NLR单独及联合检测对肝癌患者介入化疗疗效的评估价值。结果 94例肝癌患者中,治疗有效组37例(CR 10例,PR 27例),治疗无效组57例(SD 34例,PD 23例)。治疗有效组中肿瘤直径﹤5 cm、肿瘤数目为单发、TNM分期为Ⅱb期的患者比例均高于治疗无效组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);治疗有效组患者术后30天AEF、AFP-L3、NLR均明显低于治疗无效组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,术后30天AEF、AFP-L3、NLR较高均是肝癌患者介入化疗疗效的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,AEF、AFP-L3、NLR联合检测评估肝癌患者介入化疗疗效的AUC为0.963,灵敏度为92.98%,均高于各指标单独检测。结论 术后30天AEF、AFP-L3、NLR较高均是肝癌患者介入化疗疗效的独立危险因素,三者联合检测可有效评估肝癌患者介入化疗疗效,为后续治疗提供参考。

低表达sFRP4通过PI3K/AKT信号通路作用于肝癌细胞的机制研究

文章研究低表达s FRP4通过PI3K/AKT信号通路对肝癌细胞的具体作用机制,从而指导肝癌防治。实验选取肝细胞L-02、肝癌Huh7、Hep3B、Hep G2和MHCC97-H细胞进行细胞培养,以检测肝癌细胞和肝细胞内sFRP4蛋白表达、sFRP4m RNA表达、sFRP4沉默后HepG2细胞的增殖活性、各组细胞内PI3K、AKT、p21、Bcl-2、c-Myc蛋白与m RNA的表达情况,并对各项检测数据进行统计学分析。研究发现,肝癌细胞内s FRP4的表达情况高于肝细胞;sFRP4沉默后肝癌细胞的增殖、侵袭、转移能力增强,细胞凋亡减少;sFRP4沉默后PI3K/AKT信号通路相关因子的表达明显增强;肝癌中存在PI3K、p-AKT的异常表达,PI3K、AKT信号通路激活会增强肝癌细胞的增殖性、侵袭性、转移性。结果表明,低表达sFRP4通过PI3K/AKT信号通路可以促进肝癌细胞的增殖和侵袭,降低细胞凋亡率。

猫爪草皂苷对高转移肝癌细胞株HCCLM3及MHCC97-H增殖的影响

目的观察猫爪草皂苷(RRTS)对人高转移肝癌细胞株HCCLM3、MHCC97-H增殖的影响。方法将对数生长期HCCLM3、MHCC97-H细胞分为两组。RRTS组分别采用50、100、200、400μg/m L浓度的RRTS干预,每浓度5个复孔;5-FU组采用50μg/m L的5-FU干预,作用后72 h采用MTT法测定两组细胞增殖情况,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果 RRTS组各浓度对HCCLM3、MHCC97-H肿瘤细胞株的生长均有不同程度的抑制作用,随RRTS浓度增加,抑制作用明显增强,呈量—效依赖关系(P均<0.05);400μg/m L对两种细胞的生长抑制率与5-FU组比较差异无统计学意义。倒置显微镜下观察,两种细胞株经RRTS处理后,细胞密度降低,细胞相互分离,贴壁脱落,出现片状无细胞生长区,并见细胞碎片,细胞变圆,体积减小,核固缩,核颜色加深,折光性增强,随着RRTS剂量增加,这种变化更加明显。400μg/m L浓度的RRTS对肿瘤细胞的生长抑制作用与5-FU组相似。结论RRTS对HCCLM3、MHCC97-H细胞生长均有抑制作用。

高转移潜能肝癌HCCLM3细胞中侧群细胞的分离及其干细胞特性鉴定

目的:检测高转移潜能肝癌HCCLM3细胞株中侧群(side population,SP)细胞比例,分选SP细胞并探讨其生物学特性。方法:4种肝癌细胞株的转移潜能大小依次为HCCLM3>MHCC97H>MHCC97L>Huh7,分别予以荧光染料Hoechst33342染色,以加入维拉帕米的拮抗组为对照,流式细胞术检测SP细胞比例;从HCCLM3细胞中分选SP细胞和主群(main population,MP)细胞,采用悬浮球培养、Transwell侵袭实验及裸鼠成瘤实验判断HCCLM3 SP细胞是否具备肿瘤干细胞生物学特性;RT-PCR检测SP及MP细胞中干细胞相关基因的表达。结果:HCCLM3细胞中SP细胞比例为(16.9±1.8)%,显著多于MHCC97H、MHCC97L、Huh7中SP细胞比例[(8.4±0.7)%、(4.6±0.5)%、(1.0±0.2)%,均P<0.05]。HCCLM3细胞中,SP细胞悬浮球形成明显高于MP细胞[(25.3±5.1)%vs(11.2±2.6)%,P<0.05],SP细胞的侵袭能力显著高于MP细胞(P<0.05),SP细胞的裸鼠皮下成瘤能力也明显高于MP细胞。HCCLM3细胞的SP细胞中干细胞相关基因ABCG2、CD13、CD44、Nanog、Sox2及Klf4 mRNA平均表达水平分别是MP细胞的5.64、2.26、2.10、3.78、2.37、2.92倍(均P<0.05)。结论:肝癌HCCLM3细胞的SP细胞中富集了肝癌干细胞,这可能与其较高的转移潜能有关。

α干扰素对人高转移肝癌细胞系HCCLM3血管形成因子表达的影响

目的:研究IFN-a对高转移潜能的人肝癌细胞系HCCLM3 细胞血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和白介素-8(IL-8)表达的影响,探索IFN-a抗肿瘤血管形成的机制. 方法:将HCCLM3细胞在高糖DMEM培养液(Dulbecco’S modified Eagle medium)和加入了不同剂量(30,300或3 000 kU/L)IFN-α的DMEM培养液中孵育72 h.ELISA法检测IFN-α干预组与对照组(未加入IFN-α)中VEGF, bFGF,MMP-2,MMP-9和IL-8的表达情况. 结果:HCCLM3细胞空白对照组中VEGF,MMP-2, bFGF和IL-8的表达浓度分别为2556±122.6,4400±1000, 28.05±5.1和1 160±69.4 ng/L.同时IFN-α为300 kU/L时, VEGF,MMP-2,bFGF和IL-8的浓度分别为2 476.5±125.7 (P<0.05),2 400±600(P<0.01),25.8±1.6和1 0791±5 ng/L; IFN-α为3 000 kU/L时,VEGF,MMP-2,bFGF和IL- 8的浓度分别为2 289.5+119.5(P<0.01),2 000±500 (P<0.01),25.1±2.9和1 087.9±83.9 ng/L.各组中均未检测到MMP-9的表达. 结论:IFN-α对HCCLM3细胞VEGF和MMP-2蛋白的表达均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性.bFGF,IL- 8和MMP-9的表达浓度在IFN-α各剂量组与对照组间无显著性差别.IFN-α对肝癌细胞中VEGF租MMP-2表达水平的下调在其抗肝癌血管形成机制中发挥重要作用.

let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响

目的探讨let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响。方法将HCCLM3细胞分为常氧组、缺氧组和缺氧let-7a组,分别给予不同的处理。各组设6个平行孔,培养72 h。采用吖啶橙染液法测定HCCLM3细胞自噬率,采用MTT法检测HCCLM3细胞活力,使用流式细胞仪分析HCCLM3细胞周期G1,采用酶联免疫吸附法测定培养上清let-7a、细胞周期D1蛋白(cyc D1)和血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果缺氧let-7a组细胞存活率为(49.7±9.5)%,显著低于常氧组或缺氧组的(100.0±0.0)%或(119.1±13.1)%(P<0.05),缺氧组细胞存活率显著高于常氧组(P<0.05);缺氧let-7a组细胞周期G1期和细胞自噬率分别为(89.6±16.1)%和(49.3±7.4)%,显著高于常氧组或缺氧组的(56.3±11.0)%和(13.2±8.1)%或(69.7±14.1)%和(23.5±5.5)%(P<0.05),缺氧组细胞周期G1期和自噬率显著高于常氧组(P<0.05);缺氧let-7a组细胞let-7a蛋白水平为(96.1±9.3)μmol/L,显著高于常氧组或缺氧组的(33.4±7.1)μmol/L或(65.3±5.2)μmol/L(P<0.05),cyc D1和VEGF水平分别为(72.3±8.8)μmol/L和(56.3±6.3)μmol/L,显著低于常氧组或缺氧组的(124.1±7.2)μmol/L和(114.1±5.2)μmol/L或(98.2±6.7)μmol/L和(85.2±8.1)μmol/L(P<0.05),缺氧组let-7a蛋白显著低于常氧组(P<0.05),cyc D1和VEGF显著高于常氧组(P<0.05)。结论上调let-7a在肝癌HCCLM3细胞的表达能诱发细胞自噬,使得细胞在G1期往S期的分化过程发生障碍,抑制细胞在缺氧环境中的增殖,其机制可能与细胞CYC D1和VEGF表达下调有关。

凝血酶敏感蛋白-1对人肝癌细胞株HCCLM3生长增殖的作用

目的:研究凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)及受体CD36、CD47对人肝癌细胞株HCCLM3生长及细胞周期的作用,初步探讨TSP-1可能的作用途径。方法:根据处理因素将细胞株分为:TSP-1组(加入TSP-1蛋白,40mg/L)、空白对照组、CD36阻断组、CD47阻断组。阻断组细胞接种后先加入5mg/L对应的单抗,待单抗与细胞充分结合后再加入40mg/LTSP-1。用四唑盐比色法(MTT)、流式细胞术和ELISA法分别观察TSP-1及CD36、CD47单抗对细胞生长、细胞周期、增殖指数(PI)及TGF-β1分泌的影响。结果:TSP-1组、CD36阻断组、CD47阻断组细胞生长受抑,且CD36阻断组的细胞生长抑制率低于CD47阻断组。TSP-1组G0/G1期细胞数增加,S期和G2/M期细胞数减少,与对照组和CD36阻断组相比差异有统计学意义。对照组、TSP-1组、CD36阻断组及CD47阻断组PI分别为:(42.70±2.09)%、(27.85±0.71)%、(38.04±1.35)%和(31.78±0.43)%,各组之间两两比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。各组TGF-β1的含量差异无统计学意义。结论:TSP-1主要通过与受体CD36的结合对人肝癌细胞株HCCLM3的生长增殖有抑制作用。TSP-1对HCCLM3的抑制可能不是通过调节TGF-β1的分泌而发挥作用。

肿瘤外周酸性微环境促进肝癌HCCLM3细胞的转移

目的:探讨肿瘤外周酸性微环境对肝癌HCCLM3细胞转移的影响。方法:将肝癌细胞HCCLM3分别培养在不同pH值(pH7.4、pH7.0和pH6.6)的细胞培养液中,通过细胞体外迁移实验和体外侵袭实验分析HCCLM3细胞在迁移和侵袭能力方面的改变,通过Western印迹、明胶酶谱及原位酶谱法分析HCCLM3细胞在基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase-2,MMP-2)合成、分泌和激活方面的变化。结果:当细胞外周微环境向酸性变化时,HCCLM3细胞的迁移及侵袭能力均明显增强(P<0.01),虽然细胞内MMP-2的合成未发生明显改变,但细胞分泌的MMP-2及MMP-2的激活均明显增强(P<0.01)。结论:细胞外周酸性微环境可以上调细胞MMP-2的分泌及激活,并促进肝癌细胞HCCLM3的体外侵袭和迁移能力,提示肿瘤外周酸性微环境对肝癌细胞HCCLM3的转移具有促进作用。

雷公藤红素通过调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡

目的探究雷公藤红素(tripterine,TRI)抑制肝癌细胞(hepatocellular carcinoma,HCC)进展的新机制。方法利用不同浓度(0、0.5、2和8μmol·L-1)TRI作用于肝癌细胞,然后利用CCK-8、细胞克隆、Transwell和蛋白免疫印迹等实验方法评估细胞表型和可能机制;再利用siRNA将靶基因GSDME进行干扰,确定GSDME的作用;最后使用移植肿瘤模型验证TRI在体内抑制HCC细胞的生长的机制。结果TRI可抑制HCC细胞增殖、克隆和侵袭,促进细胞焦亡。免疫印迹结果显示,TRI处理后肝细胞癌HepG2或Hepa1-6中GSDME表达均上调,同时cleaved caspase-3和PARP也明显升高。敲除GSDME后可部分逆转TRI诱导的细胞焦亡。同时GSDME敲低后的细胞具有更强的克隆和迁移能力,且与单独的TRI治疗组相比,细胞凋亡率降低。在体内实验中,TRI抑制可HCC肿瘤生长,TRI+siGSDME组小鼠肿瘤生长速度比单独TRI治疗组快。此外,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中p-eIF2a、ATF4均升高。免疫荧光结果显示,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中ATF4阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论TRI抑制肝癌细胞生长和侵袭可能与其调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡有关。

凝血酶敏感蛋白1对人肝癌细胞株HCCLM3生长和黏附的作用

目的:观察凝血酶敏感蛋白1对人肝癌细胞株HCCLM3的生长抑制和黏附的作用。方法:实验于2006-05/2007-01在河南省高等学校省级开放实验室完成。①采用浓度为2×107L-1的HCCLM3对数生长期单细胞悬液接种培养后,采用MTT法检测凝血酶敏感蛋白1对HCCLM3的生长抑制作用。②对数生长期的HCCLM3细胞株接种于纤黏连蛋白覆盖的96孔板后,按照处理因素分组:空白对照组、凝血酶敏感蛋白1组(加入凝血酶敏感蛋白1蛋白40mg/L)、CD36阻断组和CD47阻断组[先加入对应的单抗(浓度5mg/L),在体积分数为0.05CO2,37℃温箱孵育30min使单抗与细胞充分结合后再加入凝血酶敏感蛋白1]。培养72h后MTT方法检测凝血酶敏感蛋白1对细胞黏附力的作用,染色后直接计数黏附细胞。结果:①凝血酶敏感蛋白1对HCCLM3细胞的生长抑制率随着浓度的提高而增加,40mg/L与50mg/L相比抑制作用差异无显著性。抑制率随着时间的延长而增加,在72h抑制作用最明显。②黏附力的检测显示:凝血酶敏感蛋白1组,CD36阻断组,CD47阻断组细胞黏附力均显著低于对照组(P<0.05),但凝血酶敏感蛋白1组,CD36阻断组,CD47阻断组细胞黏附力差异无显著性(P>0.05)。结论:凝血酶敏感蛋白1对HCCLM3的生长有抑制作用,在一定范围内呈剂量依赖性和时间依赖性。凝血酶敏感蛋白1可抑制人肝癌细胞株HCCLM3与细胞外基质的黏附能力,作用途径可能与受体CD36,CD47无关。

ME3对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的:分析苹果酸酶3(malic enzyme 3,ME3)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织以及HCC细胞系中的表达水平,并研究ME3对HCC细胞增殖、迁移和侵袭等方面的影响及其可能机制。方法:使用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析ME3在HCC组织中的表达;使用RT-qPCR和Western blot技术检测HCC细胞系中ME3的mRNA以及蛋白的表达水平;在下调或者上调HCC细胞系中ME3后,借助CCK-8、平板克隆法、Transwell、侵袭实验研究ME3在肝癌细胞增殖、迁移和侵袭方面的作用;运用Western blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与癌旁正常组织和正常肝细胞相比,ME3在人类HCC组织和HCC细胞系中表达显著升高,降低ME3表达能减弱HCC细胞的增殖、迁移及侵袭,过表达ME3则会导致相反结果;此外,ME3可以激活PI3K/AKT信号通路。结论:ME3在HCC组织中呈高表达,促进HCC细胞增殖、迁移以及侵袭,并可能通过启动PI3K/AKT信号通路在HCC中发挥其促癌基因的作用。

α-干扰素联合索拉菲尼对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对STAT3通路的影响

目的:探讨α-干扰素(IFN-α)联合索拉菲尼对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对转录激活因子3(STAT3)的影响。方法:选取人肝癌细胞株HepG2,分为空白对照组(未经任何处理的HL-60细胞)、IFN-α组(加入4000 U/ml IFN-α)、索拉菲尼组(加入2μmol/L索拉菲尼)、IFN-α+索拉菲尼组(加入4000 U/ml和2μmol/L索拉菲尼),取经药物处理后的各组细胞混悬液,继续培养24、48、72 h,采用CCK8检测HepG2细胞存活率,MTT法检测HepG2细胞增殖抑制率,行蛋白质免疫印迹(Western blot)、实时定量PCR(qRT-PCR)测HepG2细胞中STAT3、Survivin mRNA和蛋白表达,并进行细胞形态学观察。结果:空白对照组细胞形态完整,轮廓清晰,呈梭形,贴壁状态良好,IFN-α组、索拉菲尼组部分胞浆肿胀、胞膜破裂、细胞形态、胞膜界限模糊不清,IFN-α+索拉菲尼组,细胞核缩小、染色质固缩、部分细胞碎裂、死亡。IFN-α+索拉菲尼组细胞增殖抑制率高于IFN-α组、索拉菲尼组(均P<0.05)。与空白对照组、IFN-α组、索拉菲尼组比较,IFN-α+索拉菲尼组细胞G 1期细胞器增多,S、G 2期细胞减少(均P<0.05)。与空白对照组比较,IFN-α组、索拉菲尼组、IFN-α+索拉菲尼组细胞中STAT3、Survivin mRNA和蛋白表达均降低,但IFN-α组和索拉菲尼组比较无统计学差异(均P<0.05),IFN-α+索拉菲尼组低于其余三组(均P<0.05)。结论:α-干扰素联合索拉菲尼可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能是通过调节STAT3通路发挥作用。

卡瑞利珠单抗联合TACE治疗晚期原发性肝癌的疗效及其对血清T淋巴细胞、AFP-L3等的影响

目的探讨卡瑞利珠单抗联合经肝动脉化疗栓塞(TACE)治疗晚期原发性肝癌的临床效果及其对血清T淋巴细胞、甲胎蛋白异质体-L3(AFP-L3)等的影响。方法前瞻性选取2019年8月至2022年12月在安徽医科大学附属宿州医院治疗的晚期HCC患者108例,按照信封法将患者分为观察组(n=54)和对照组(n=54)。观察组给予卡瑞利珠单抗联合TACE治疗,对照组给予TACE治疗,观察两组治疗疗效、治疗前后血清T淋巴细胞、AFP-L3、甲胎蛋白(AFP),以及不良反应、无进展生存时间和总生存时间。结果观察组治疗后3个月客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)分别为44.44%和88.89%,均明显高于对照组(25.93%、72.22%),差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后3个月CD3^(+)和CD4^(+)T淋巴细胞分别为(68.82±6.40)%和(41.22±5.53)%,均明显高于对照组[(62.24±6.15)%、(37.73±6.00)%],而CD8^(+)T淋巴细胞为(25.53±2.43)%,明显低于对照组[(27.05±2.28)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后3个月AFP-L3、AFP水平分别为(63.34±15.52)、(11.54±3.32)ng/mL,均明显低于对照组[(30.11±5.00)、(110.20±23.34)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组和对照组不良反应发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组无进展生存时间和总生存时间分别为8个月(95%CI:7.284~8.726)和15个月(95%CI:14.511~15.489),明显长于对照组(P<0.05)。结论卡瑞利珠单抗联合TACE治疗晚期HCC有较好的效果,明显改善患者免疫功能,降低血清AFP-L3等指标水平,延长患者生存期。

双硫仑联合二价铜离子诱导铜死亡抑制肝癌细胞Hep3B增殖、迁移和侵袭

目的探讨双硫仑(disulfiram,DSF)联合二价铜离子(Cu^(2+))对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养肝癌Hep3B细胞,分别采用DSF(30 nmol/L)溶液、Cu^(2+)(1μmol/L)溶液和铜螯合剂四硫代钼酸铵(ammonium tetrathiomolybdateⅥ,ATTM)(30 nmol/L)溶液单独或联合干预,以二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)(30 nmol/L)作用的细胞为对照组。分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力;采用免疫荧光实验检测细胞中铜死亡相关蛋白二氢硫辛酰胺-S-乙酰转移酶(dihydrolipoamide S-acetyltransferase,DLAT)和铁氧还蛋白1(ferredoxin 1,FDX1)的表达。结果与对照组相比,DSF、Cu^(2+)单独或联合干预后Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭能力均下降(均P<0.05),其中DSF+Cu^(2+)联合干预的细胞增殖、迁移和侵袭能力下降更加显著(均P<0.0001)。在DSF联合Cu^(2+)的基础上加入ATTM后逆转了DSF联合Cu^(2+)对Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,其增殖、迁移以及侵袭能力较DSF+Cu^(2+)组增强(均P<0.05)。与对照组相比,DSF、Cu^(2+)单独干预后铜死亡相关蛋白DLAT和FDX1的荧光强度改变并不明显,但Cu^(2+)联合DSF后DLAT蛋白的荧光强度增加而FDX1蛋白的荧光强度减弱,加入ATTM后则逆转了DLAT和FDX1蛋白的表达趋势。结论DSF联合Cu^(2+)能抑制肝癌细胞Hep3B增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能是通过诱导铜死亡的发生实现。

小檗碱干预高糖环境下人肝癌细胞株HCCLM3细胞的作用研究

目的观察小檗碱对高糖环境下人肝癌细胞株HCCLM3细胞增殖的抑制、自噬作用。方法将传至3—4代HCCLM3细胞随机分为空白对照组和低糖组、中糖组、高糖组(各组分别加入含有1000、2000、4000、8000 mg·L^-1的葡萄糖培养液)及小檗碱A组、小檗碱B组、小檗碱C组、二甲双胍(MET)组(高糖组不给予任何干预措施,小檗碱A、B、C 3组分别加入小檗碱含药培养液5、10、20 μmol·L^-1,MET组加入MET含药培养液 10 μmol·L^-1)。CCK-8检测HCCLM3细胞的增殖率、增殖抑制率,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测HCCLM3细胞上清液IL-6、TNF-α的水平,实时荧光定量PCR (qPCR)检测HCCLM3细胞NF-κB mRNA、Beclin1 mRNA的表达水平。结果中糖、高糖2组24 h时HCCLM3细胞增殖率均高于空白对照组(均 P <0.05)。小檗碱A、B、C 3组和MET组24、48、72 h时HCCLM3细胞增殖抑制率均高于高糖组(均 P <0.05),小檗碱A、B、C 3组24、48、72 h时HCCLM3细胞增殖抑制率均高于MET组(均 P <0.05)。小檗碱A、B、C 3组和MET组HCCLM3细胞上清液IL-6、TNF-α水平及HCCLM3细胞NF-κB mRNA表达水平均低于高糖组(均 P <0.01),小檗碱A、B 2组HCCLM3细胞上清液IL-6、TNF-α水平均高于MET组(均 P <0.05),小檗碱A组HCCLM3细胞NF-κB mRNA表达水平高于MET组、Beclin1 mRNA表达水平低于MET组(均 P <0.01),小檗碱B、C 2组HCCLM3细胞Beclin1 mRNA表达水平均低于MET组、小檗碱C组 HCCLM3细胞上清液TNF-α水平低于MET组( P <0.05或 P <0.01)。结论 BBR对高糖环境下HCCLM3细胞增殖具有抑制作用,它可能是通过调控核因子NF-κB降低IL-6、TNF-α的表达,进而上调Beclin1基因表达水平,促进自噬产生抗肿瘤作用。