LncRNA HULC在乳头状甲状腺癌组织中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)在乳头状甲状腺癌组织中的表达及意义。方法选取90例乳头状甲状腺癌(PTC)患者作为研究对象,手术过程中采集PTC组织和距肿瘤边缘2 cm以上的癌旁组织,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HULC相对表达量。将不同序列转染TPC-1细胞,依据转染序列分为Si-HULC组、Si-Con组、空白组,分别对三组的HULC表达量、细胞增殖活性和侵袭能力进行检测。结果PTC组织的HULC相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.05)。肿瘤直径≤2 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移的PTC癌组织HULC相对表达量明显高于肿瘤直径>2 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移者(P<0.05)。与Si-HULC组比较,Si-Con组和空白组24、48、72、96 h的A值明显更高(P<0.05)。与Si-HULC组比较,Si-Con组和空白组HULC相对表达量明显更高,侵袭细胞数量明显更多(P<0.05)。结论HULC在PTC组织中相对表达量较高,且与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移存在密切关联,只有尽早调节HULC,才能有效降低TOC-1细胞的增殖活性和侵袭能力。

肝癌患者血清lncRNA HULC表达水平与肿瘤分期、淋巴结转移的关系

目的:探究肝癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)与肿瘤分期、淋巴结转移的关系。方法:选取肝癌患者92例作为研究组,另选取体检健康人员50例作为对照组,比较分析两组血清lncRNA HULC表达水平。结果:研究组的lncRNA HULC相对表达水平显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);研究组的肝癌不同分期、不同淋巴结转移程度患者lnRNA HULC相对表达水平差异均有统计学意义(P<0.05),且伴随着肝癌恶性分期程度的增加、转移范围的扩大,lnRNA HULC相对表达增加。结论:肝癌患者高水平lncRNA HULC表达提示较为严重的恶性变程度以及广泛的淋巴结转移。

癌症高表达蛋白在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的:研究癌症高表达蛋白(Hec1)在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达和意义。方法:采用免疫组化SP法检测27例正常肝组织、30例癌旁组织及62例HCC组织中Hec1的表达;用Westernblot检测上述组织中Hec1蛋白的表达。结果:在正常肝、癌旁组织及HCC组织中,Hec1蛋白的阳性表达率分别为0%、20.8%、62.9%,各组织中Hec1蛋白的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。Hec1蛋白的表达与HCC的Edmondson分级、侵袭转移显著相关。Westernblot结果表明,在正常肝、癌旁组织及HCC组织中,Hec1蛋白的平均表达量的分别为0、0.12±0.03、0.89±0.16,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Hec1蛋白的过度表达可能在HCC的发生和发展中起重要作用。

人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达克隆SMMC7721-TNF体外抗瘤活性及其可能机制的初步研究

应用逆转录病毒载体介导人TNFα基因感染人肝癌细胞株SMMC7721，经G418筛选获得一稳定高表达SMMC7721-TNF，观察SMMC7721-TNF细胞及其培养液上清对SMMC7721和BEL7404肝癌细胞的抗瘤效应，结果表明SMMC7721-TNFα细胞本身对两种细胞均无明显的杀伤作用，但其培养液上清对这两种细胞均具有明显的抑制作用，

lncRNA PCAT6在肝癌组织中的表达及其预后价值

目的 探究lncRNA PCAT6在肝细胞癌(HCC)组织及癌旁组织中的表达水平及临床意义。方法收集2015年1月至2016年3月于延安大学附属医院行外科手术治疗74例HCC患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定lncRNA PCAT6的表达,在患者术后进行5年随访,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果 lncRNA PCAT6在HCC组织中的表达水平(3.87±0.29)显著高于癌旁组织(1.06±0.11)(P<0.05);lncRNA PCAT6高表达的患者Edmondson高分级、TNM高分级、有乙肝病史及有淋巴结转移情况的比例较高(P<0.05);lncRNA PCAT6高表达组患者的五年生存率为35%(14例),显著低于低表达组(64.71%,22例)(P<0.05);Edmondson高分级、TNM高分级、乙肝病史、淋巴结转移及高lncRNA PCAT6表达是影响HCC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 lncRNA PCAT6在HCC组织中高表达,且与患者的预后显著相关。

环氧合酶-2高表达与肝癌临床病理特征的关系

目的探讨COX2在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学方法(SP法)检测COX2在34例肝癌中的表达。结果COX2在肝癌中的表达率为82.4%(28/34),主要为肝癌组织的表达,而在癌旁正常组织中无表达。20例阳性表达COX2的肝癌中,分化良好的22例COX2表达水平为8.25±0.86,分化中等和分化差的6例COX2表达水平为6.11±1.02,比较差异显著(P<0.05),COX2的高表达水平与肝癌细胞分化程度有关,而与AFP高低、来源细胞及有无肝内转移无关。结论肝癌中COX2的高度表达与肝癌分化程度有关,COX-2可能是肝癌发生的早期事件之一。

人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达细胞克隆SMMC7721-TNF的建立及其部分生物学特性的初步观察

用重组逆转录病毒载体L-tnfSN的包装病毒颗粒感染人肝癌细胞SMMC7721，G418筛选后，随机挑选10个细胞克隆，扩大培养，检测细胞培养液上清中TNFα的水平，将其中表达TNF最高细胞克隆命名为SMMC7721-TNF。观察SMMC7721-TNF的分子生物学特性。Southern Blot证明TNFα基因完整地整合在细胞基因组中，

肝细胞肝癌复发前后CD3高表达T淋巴细胞的变化

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)复发前后CD3高表达(CD3bright)T细胞的变化特点。方法选取有完整住院病历资料的HCC患者69例(17例5年内未复发,52例复发),采用流式细胞术检测其外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD3bright T细胞占总T细胞的百分比(CD3%、CD4%、CD8%、CD3bright%),计算CD4/CD8比值,同时检测甲胎蛋白(AFP)。采用Pearson相关分析评估CD3bright%与其他指标的相关性。采用Logistic回归分析评估各项指标对HCC复发的提示作用。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标判断HCC复发的价值。结果复发组AFP、CD4%、CD8%高于未复发组(P<0.01),CD3bright%低于未复发组(P<0.01)。CD3%和CD4/CD8比值2个组之间差异无统计学意义(P>0.05)。与术后比较,HCC患者复发后血清AFP水平明显升高(P<0.01)、CD3bright%降低(P=0.04),其他指标2个组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。AFP、CD3bright%与HCC复发独立相关[比值比(OR)分别为1.012、0.841,95%可信区间(CI)分别为1.001~1.023、0.783~0.902]。结论较低的CD3bright T细胞水平与HCC较差的预后及较高的复发率有关。

肝癌高表达长链非编码RNA在肝癌中的表达及其对自噬水平的影响

目的探讨肝癌高表达(HULC)长链非编码RNA在肝癌中的表达及其与自噬的关系。方法采用实时定量PCR检测60例肝癌组织以及相应正常肝组织中HULC的表达水平,并检测HULC在肝癌细胞系及正常肝细胞系中的表达情况。通过pcDNA3.1-HULC转染肝癌细胞系HepG2、Bel-7402过表达HULC;分别采用CCK-8试剂盒、Western blotting和免疫荧光检测细胞增殖改变情况、自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和自噬相关蛋白Atg3的表达变化以及LC3斑点数目的变化情况。结果 HULC在肝癌组织中的表达高于正常肝组织,差异有统计学意义(P <0.05)。过表达HULC能促进肝癌细胞增殖,并且过表达HULC的肝癌细胞中LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化和Atg3的表达均显著增加(P <0.05)。免疫荧光可见,过表达HULC后LC3荧光斑点明显增多。结论肝癌组织中HULC的表达高于正常肝组织,HULC促进肝癌细胞增殖,并且能够提高肝癌细胞自噬水平,有望成为肝癌治疗的潜在靶点。

lncRNA HULC对肝癌细胞miRNA差异表达谱及ceRNA调控网络的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)对肝癌细胞微小RNA(miRNA)差异表达谱及竞争内源性RNA(ceRNA)调控网络的影响。方法选取人肝癌细胞系BEL-7402,瞬时转染HULC siRNA以降低lncRNA HULC的表达。通过高通量测序选取表达具有差异的miRNA,并通过实时荧光定量PCR进行验证。基于参考基因组,预测新miRNA。通过基因富集分析及ceRNA调控网络,研究这些基因的潜在功能。结果经敲低lncRNA HULC表达后,通过高通量测序挑选出了9个表达差异显著的miRNA。5个miRNA表达下调,4个miRNA表达上调。通过miRDeep2打分,挑选出了15个分值较高的新miRNA。基因富集分析结果显示,表达下调的miRNA的靶基因的分子功能与丝氨酸tRNA连接酶活性、蛋白激酶活性、阳离子通道活性、钙转运ATP酶活性等有关;表达上调的miRNA的靶基因与硒代半胱氨酸裂解酶活性、过氧化物酶体机制靶向信号1结合、过氧化物酶体靶向序列结合、蛋白质N-末端结合、肿瘤坏死因子受体超家族结合等有关。miRNA-靶基因互作网络、显著富集功能-功能互作网络揭示靶基因与miRNA的关联性以及功能间的相关性。结论在肝癌细胞系BEL-7402中lncRNA HULC具有调节多个表达差异的miRNA的作用,通过ceRNA调控网络模式,影响肝癌的发生、发展。

长链非编码RNA肝癌高表达转录本促进人骨髓间充质干细胞向肝样细胞的分化

背景:骨髓间充质干细胞在体外可以被诱导分化为肝样细胞,但是细胞功能不成熟。研究表明,长链非编码RNA可以影响间充质干细胞的分化,但是关于长链非编码RNA肝癌高表达转录本是否能够参与骨髓间充质干细胞向肝细胞分化还未有报道。目的:探讨长链非编码RNA肝癌高表达转录本在人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化中的作用。方法:体外添加细胞因子诱导人骨髓间充质干细胞(购自上海中科院细胞库)向肝样细胞分化,诱导4周后倒置显微镜观察细胞的形态学变化,免疫荧光技术检测肝细胞特异性蛋白的表达,qRT-PCR检测分化过程中肝癌高表达转录本的表达;然后通过慢病毒转染构建稳定表达肝癌高表达转录本的人骨髓间充质干细胞株,以转染阴性对照病毒作为对照组,两组同时添加细胞因子进行肝向细胞诱导分化,qRT-PCR、Western blot检测过表达组与对照组肝细胞特异性基因、蛋白表达的差异。结果与结论:①人骨髓间充质干细胞在体外添加细胞因子下可以成功被诱导分化为肝样细胞,在分化过程中肝癌高表达转录本的表达逐渐增高;②过表达肝癌高表达转录本后促进了人骨髓间充质干细胞诱导分化后肝细胞特异性基因及蛋白的表达;③结果表明,肝癌高表达转录本在人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化中发挥着至关重要的作用,将为细胞治疗肝脏疾病奠定坚实的理论基础。

β-榄香烯调节HULC表达对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨肝癌高表达转录本(HULC)在β-榄香烯调控肝癌细胞恶性生物学行为中的作用。方法生物信息学分析TCGA数据库肝癌组织中HULC的表达,采用实时定量PCR检测肝癌细胞中HULC的表达,SMMC-7721细胞转染HULC过表达质粒pcDNA3.1-HULC或小干扰RNA si-HULC,利用CCK-8法评估β-榄香烯和HULC对肝癌细胞增殖的影响,划痕和Transwell实验分析细胞迁移和侵袭能力的变化情况,Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关因子的表达。结果肝癌组织和细胞中HULC表达上调。β-榄香烯处理或敲低HULC均可抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移侵袭和EMT过程。此外,β-榄香烯处理可降低HULC表达,而HULC过表达可部分阻断β-榄香烯对细胞增殖、迁移侵袭和EMT过程的抑制作用。结论β-榄香烯可能通过下调HULC表达来调节肝癌细胞的恶性生物学行为,为β-榄香烯靶向HULC作为肝癌治疗的潜在应用提供了新见解。

长链非编码RNA肝癌高表达转录本通过微小RNA-134-5p促进宫颈癌细胞恶性生物学行为的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)通过抑制微小RNA-134-5p促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移,促进凋亡的作用及其作用机制。方法2019年10月至2020年5月,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测体外培养的人正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞中HULC的表达情况,在宫颈癌C-33A细胞中转染特异性HULC siRNA,qRT-PCR检测转染效果,细胞计数试剂盒(CCK-8)法分析C-33A细胞增殖情况,采用流式细胞术分析C-33A细胞凋亡情况,Transwell实验分析C-33A细胞侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因实验检测HULC与miR-134-5p的相互作用。在抑制HULC表达的C-33A细胞中转染miR-134-5p抑制剂,以同样的方法检测对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果HULC在宫颈癌细胞(HeLa、Cas‐ki、SiHa、C-33A)中的表达水平为(1.95±0.24、2.26±0.21、1.77±0.19、3.49±0.40),显著高于正常宫颈上皮细胞1.00±0.11,HULC在C-33A细胞中的表达量最高(P<0.05)。转染特异性HULC siRNA能够抑制C-33A细胞中HULC的表达(0.94±0.08比0.18±0.02)。抑制HULC表达后,C-33A细胞OD值降低(0.59±0.08比0.38±0.05),凋亡率明显升高[(3.01±0.34)%比(18.54±2.16)%],侵袭[112.54±13.86比46.28±10.16]和迁移(158.65±18.66比78.18±10.80)能力减弱。HULC能够与miR-134-5p特异性结合,负向调控miR-134-5p的表达。抑制miR-134-5p的表达能够逆转抑制HULC导致的C-33A细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的抑制作用。结论HULC通过抑制miR-134-5p的表达促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡。

过表达Glypican-3对高转移性肝癌细胞HCCLM3生物学行为的影响

旨在构建s GPC3/GPC3基因重组真核表达载体,研究过表达s GPC3/GPC3对HCCLM3人高转移性肝癌细胞生物学行为的影响。采用PCR法获得编码s GPC3/GPC3的基因片段并克隆到真核表达载体pc DNA3.0-GFP中,经脂质体介导转染HCCLM3肝癌细胞,RT-PCR和Western blot检测GPC3的表达情况;CCK-8法、克隆平板形成实验、细胞划痕实验、流式细胞术分别检测s GPC3/GPC3对HCCLM3生物学行为的影响。酶切分析、测序鉴定结果表明s GPC3/GPC3基因重组真核表达载体构建成功;RT-PCR和Western blot结果显示s GPC3/GPC3在HCCLM3中成功过表达。与正常组和转染空载体相比,过表达s GPC3/GPC3后,HCCLM3的增殖能力和克隆形成能力均受到明显抑制(P<0.05),迁移率显著下降,细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率增加。同时,过表达s GPC3对细胞的影响显著优于GPC3(P<0.05)。s GPC3/GPC3表达上调抑制高转移性肝癌细胞HCCLM3生长和迁移,促进细胞凋亡以及周期再分布,在高转移性肝癌发生发展过程中起重要作用。

白藜芦醇苷通过抑制长链非编码RNA HULC表达抑制肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的增殖和侵袭

原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,目前仍在寻找有效的治疗手段。我们之前的研究证实白藜芦醇苷能够抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,但其具体的分子生物学机制仍不清楚。本文主要探讨白藜芦醇苷调控肝癌细胞系SMMC-7721和Hep G2肝癌细胞系增殖能力的分子生物学机制。首先,我们构建大鼠原发性肝癌模型,发现模型组肝组织中长链非编码RNA HULC的表达较正常组明显升高;同时检测白藜芦醇苷预防组(分为低剂量组,中剂量组和高剂量组)肝组织中肝癌细胞中出现异常的高表达(HULC)的表达情况。结果显示,在中、高剂量组中HULC的表达明显降低。在体外实验中,SMMC7721和Hep G2中HULC的表达明显较正常肝组织显著增高,然而白藜芦醇苷高剂量组中HULC的表达发生明显降低,同时在SMMC7721和Hep G2中加入白藜芦醇苷后,高剂量组中细胞增殖能力明显下降。为了进一步探究HULC在白藜芦醇苷预防肝癌中的功能,我们构建了HULC过表达质粒以及针对HULC的siRNA片段,并验证了过表达和敲低的效率。在使用高剂量白藜芦醇苷处理SMMC7721和Hep G2的同时,过表达HULC能够逆转白藜芦醇苷引起的对细胞增殖的抑制,然而敲低HULC则能够更加有效地降低白藜芦醇苷对细胞增殖的抑制效果。这提示我们白藜芦醇苷能够可能通过调控HULC的表达抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,二者具有协同作用。本文结果为预防原发性肝癌提供了新的理论依据但其临床疗效还需要进一步验证。

高迁移率族蛋白B1在肝细胞癌组织中的表达改变

目的高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)参与炎症免疫反应及细胞的增殖、分化、迁移等,但肝癌组织HMGB1的表达情况研究甚少。文中旨在观察HMGB1在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中基因和蛋白表达水平的改变。方法使用实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测13例HCC组织及其癌旁组织中HMGB1mRNA和蛋白表达水平,组织免疫荧光定位分析肝组织细胞内HMGB1分布的变化。结果 HCC组织中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平[(4.01±0.81)和(1.37±0.34)]均显著高于癌旁组织[(5.76±1.28)和(0.52±0.12)],差异有统计学意义(P<0.01),肝癌细胞显示HMGB1核浆转位。结论 HCC组织HMGB1表达增强,HMGB1参与肝细胞癌的发生发展过程。

长链非编码RNA SchLAH在肝癌患者中的表达及与预后的关系

目的探讨lncRNA SchLAH在肝癌患者中的表达及与预后的关系。方法选取2016年6月至2019年6月在新疆医科大学第一附属医院行肝切除术的96例患者的肝癌组织和癌旁组织的标本,并收集患者的病历资料。采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组织中SchLAH的表达水平,并分析其在肝癌组织中的表达水平与临床病理特征的关系。结果SchLAH在肝癌组织中的相对表达量为3.13±0.63,显著低于癌旁组织(5.32±0.42),差异有统计学意义(P<0.05)。SchLAH的表达水平与患者的性别、年龄、甲胎蛋白水平、肿瘤大小无关(P>0.05),而与临床分期、淋巴结转移、远处转移有关(P<0.05)。临床分期为Ⅲ期、合并淋巴结转移及远处转移者的SchLAH相对表达量低于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移及远处转移者,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论lncRNA SchLAH在肝癌组织中相对低表达,且其表达水平与临床分期、淋巴结转移、远处转移有关,其低表达可促进肝癌的进展和转移,提示预后不良。

肝癌组织中MAGE-A1表达及其临床意义

目的检测黑色素瘤抗原A1(MAGEA1)在肝癌组织中表达,探讨MAGEA1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床病理指标的关系。方法应用RTPCR法检测31例HCC组织及相应癌旁组织中MAGEA1基因的表达。应用组织芯片和免疫组化技术分析178例HCC组织及相应癌旁组织中MAGEA1抗原表达。结果31例HCC组织标本中有21例(67.74%)表达MAGEA1基因,而相应的癌旁组织MAGEA1基因均不表达。178例HCC组织中95例表达MAGEA1抗原(53.37%),相应的癌旁组织MAGEA1抗原均不表达。结论MAGEA1基因在HCC组织中有较高表达,其阳性率与HCC患者的临床病理指标无相关关系。

lncRNA HULC在乳头状甲状腺癌组织中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)在乳头状甲状腺癌(PTC)组织中的表达,以及干扰其表达后对细胞增殖活性和侵袭能力的影响。方法选取行手术治疗的PTC患者105例,收集术中切除的PTC组织及距离肿瘤边缘2 cm以上的癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HULC的相对表达量。将不同序列分别转染TPC-1细胞,根据转染序列分为si-HULC组(转染HULC的小分子干扰序列)、si-Con组(转染阴性对照序列)、空白组(不作任何处理),检测各组HULC的表达及细胞的增殖活性、侵袭能力。结果PTC组织中HULC的相对表达量显著高于癌旁组织(P<0.001)。不同肿瘤直径、不同TNM分期、有无淋巴结转移PTC患者癌组织HULC相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05),不同年龄、性别、病灶数量和局部侵犯类型PTC患者癌组织HULC相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。si-HULC组HULC相对表达量、细胞增殖活性及侵袭细胞数均低于si-Con组和空白组(P<0.05),si-Con组与空白组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论PTC组织中HULC表达升高,且与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移有关。干扰HULC表达可抑制TPC-1细胞的增殖活性和侵袭能力。