转录共激活子TAZ对肝癌细胞株MHCC97H增殖能力的影响

目的观察转录共激活子TAZ对肝癌细胞株MHCC97H的增殖能力的影响,以期对阐明原发性肝细胞癌(HCC)的发生发展机制提供1个新的研究思路。方法应用细胞转染、RNA干扰(RNAi)以及过表达技术,在肝癌细胞株MHCC97H中干预TAZ的表达。在转染后提取细胞RNA和总蛋白,应用qRT-PCR和Western blot等方法检测TAZ、Nek7的表达。选用细胞计数kit-8(CCK-8)法检测细胞活性和增殖能力。结果与NC组相比,转染了TAZ特异性靶向干扰片段之后,TAZ的mRNA与蛋白表达水平均出现下调,差异具有统计学意义(P<0.0001);Nek7表达也出现下降,差异具有统计学意义(P<0.0001);功能实验(CKK8)发现MHCC97H细胞活性和增殖能力也降低,差异具有统计学意义(P<0.001)。另一方面,过表达了TAZ之后,Nek7表达水平也相应上调了,差异具有统计学意义(P<0.0001);MHCC97H细胞活性和增殖能力也提高,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论转录共激活子TAZ能通过调控Nek7的表达对肝癌细胞MHCC97H的增殖能力产生影响,该发现对于阐明TAZ在肝癌发生发展过程中的作用提供一定的实验基础。

TGF-β1通过EMT促进肝癌细胞株MHCC97L的转移

目的构建TGF-β1真核表达载体,转染低转移MHCC97L肝癌细胞株,检测该肿瘤细胞的迁移、增殖能力,为阐明TGF-β1在肝癌细胞迁移中的作用奠定基础。方法构建真核表达质粒,转染MHCC97L肝癌细胞株,荧光定量PCR和Western blot检测其上皮-间充质转化(EMT)标志因子的表达,细胞划线和MTT增殖检测细胞的迁移和增殖。结果 MHCC97L-TGF-β1细胞比MHCC97L细胞E-cadherin的表达水平下降,而N-cadherin、Fibronectin和Vimentin的表达水平显著升高;MHCC97L-TGF-β1细胞的迁移能力增强,但细胞的增殖能力下降。结论 TGF-β1在低转移的肿瘤细胞株MHCC97L的表达,增强了细胞的迁移能力,为进一步体外和动物实验奠定了基础,也为肝癌转移的临床治疗提供了借鉴。

紫花牡荆素通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路抑制肝癌MHCC97H细胞的迁移和侵袭

目的用紫花牡荆素(casticin,CAS)处理MHCC97H细胞,观察其迁移和侵袭能力的变化,并初步探讨CAS的分子作用机制。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度CAS对MHCC97H细胞活力的影响;分组开展细胞迁移和侵袭实验,评估MHCC97H细胞的迁移和侵袭能力;逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CAS处理后,MHCC97H细胞的miR-148a-3p和Wnt1 mRNA表达变化;迁移侵袭相关蛋白(MMP2、MMP9)和Wnt1蛋白表达量采用Western blot检测;Dual-Luciferase报告基因检测miR-148a-3p与Wnt13′-UTR的结合情况。结果CAS明显抑制MHCC97H细胞的生存活力,其对这种细胞的IC_(50)约为10.0μmol·L^(-1),亚细胞毒浓度的CAS(3.0μmol·L^(-1))可减弱这种细胞的迁移和侵袭能力;miR-148a-3p mimic或CAS均能抑制MHCC97H细胞迁移和侵袭能力,且两者联合处理后的抑制作用强于单独使用;过表达Wnt1能有效减弱CAS的抑制作用;CAS能明显上调MHCC97H细胞miR-148a-3p表达,同时Wnt1、MMP2和MMP9的表达呈现下降;Dual-Luciferase报告基因发现,miR-148a-3p可以直接靶向Wnt13′-UTR。结论CAS可通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路减弱肝癌细胞的迁移和侵袭。

大蒜素抑制肝癌MHCC97H细胞的迁移、侵袭

目的:观察大蒜素对肝癌MHCC97H细胞株体外增殖、迁移、侵袭及对MMP-2、MMP-9、CD24 mRNA表达的影响并初步探讨其机制.方法:以肝癌MHCC97H细胞株为研究对象,MTT法、Transwell小室实验检测不同浓度大蒜素对肝癌MHCC97H细胞株迁移、侵袭能力的影响.实时定量PCR检测(realtime quantitative PCR,qRT-PCR)法检测不同浓度大蒜素对MHCC97H细胞株MMP-2、MMP-9、CD24 mRNA表达的影响.结果:MTT显示大蒜素抑制MHCC97H细胞增殖(P<0.01),呈现剂量依赖性.Transwell小室实验显示大蒜素抑制MHCC97H细胞的迁移(P<0.01),一定范围内呈现剂量依赖性,大蒜素组侵袭细胞较阴性对照组显著减少(P<0.01).qRT-PCR检测发现不同浓度大蒜素可以下调MHCC97H细胞MMP-2、MMP-9、CD24的表达,且呈现一定程度剂量依赖性(P<0.01).结论:大蒜素对肝癌MHCC97H细胞株的增殖、迁移、侵袭有抑制作用,且在一定范围内呈现出剂量依赖性.其机制可能与抑制其MMP-2、MMP-9、CD24 mRAN的表达有关.

菌株HYR-08色素提取物对肝癌细胞株MHCC97-H的影响

目的探讨不同浓度的菌株HYR-08的色素提取物对人肝癌细胞株MHCC97-H生长繁殖的影响。方法取对数生长其的肝癌细胞MHCC97-H,用不同浓度的色素干预培养物,用显微计数法计数,观察其生长曲线的变化。用MTT比色分析法检测不同浓度的色素提取物对MHCC97-H细胞的增殖抑制作用。结果不同浓度的色素干预后对肝癌细胞MHCC97-H的生长均表现出一定程度的抑制或促凋亡效果。这种效应存在剂量依赖性(P<0.05)。肝癌MHCC97-H细胞的抑制率与色素浓度相关(r=0.928,P<0.001)。结论在一定剂量范围内。菌株HYR-08的色素提取物对肝癌细胞株MHCC97-H存在抑制和促凋亡或死亡的作用,且这种效应随培养时间的延长和色素浓度的增加而增强。

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α表达的影响

目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法采用ELISA方法检测不同浓度sv-cystatin重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α分泌的影响;实时定量PCR和Western blot法分别分析不同浓度sv-cystatin重组蛋白体外处理人肝癌MHCC97H细胞后TGF-β2、TNF-α的mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,5种浓度的sv-cystatin重组蛋白对MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α的分泌具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);25、50、100、200 mg·L-14种浓度的重组蛋白能够抑制TGF-β2的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);而50、100、200 mg·L-13种浓度的重组蛋白能够抑制TNF-α的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 sv-cystatin重组蛋白可能通过抑制TGF-β2和TNF-α的表达来发挥多方面的抗肿瘤作用。

肝癌MHCC97H细胞中CD133^+和CD133^-亚群分选及其生物学特性

目的分选肝癌MHCC97H细胞中的CD133+和CD133-细胞亚群,并初步探讨CD133+细胞亚群的干细胞特性。方法用磁珠分选技术分选MHCC97H细胞株中的CD133+和CD133-细胞亚群,用流式细胞仪检测分选前后CD133的表达,用MTT法检测其增殖能力,比较其体内成瘤能力,用Western印迹法检测其干细胞相关基因蛋白的表达。结果分选前后MHCC97H细胞中CD133表达分别为(1.09±0.43)vs(86.65±6.49)%(P<0.01)。与CD133-亚群相比,CD133+亚群的体外增殖能力较强,成瘤能力高,高表达干细胞相关基因蛋白(P<0.05,P<0.01)。结论肝癌细胞株MHCC97H中的CD133+细胞亚群具有肿瘤干细胞的特性;CD133是人肝癌MHCC97H细胞株的肿瘤干细胞的表型之一。

脂肪酸酰胺水解酶抑制剂URB597诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡的作用及其机制研究

目的:观察脂肪酸酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase,FAAH)抑制剂URB597诱导人肝癌高转移细胞MHCC97H凋亡的作用,并探讨其机制。方法:给予不同浓度(1、5、10μmol/L)URB597与MHCC97H孵育,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用蛋白质印迹技术检测凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)在细胞核中的水平,及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。采用caspase 3试剂盒检测caspase 3的活性变化。结果:(1)不同浓度(1、5、10μmol/L)URB597作用细胞1、4、7d后,凋亡细胞数目明显增加,呈时间-剂量依赖性;(2)不同浓度URB597作用96h后细胞内caspase3活性明显升高,且细胞核中AIF水平显著增加;(3)10μmol/L URB597作用细胞96h后,与对照组相比,Bcl-2水平明显下调,Bax水平明显上调,Bcl-2/Bax比值显著下降。PI3K抑制剂LY294002亦可显著降低Bcl-2/Bax比值,但与10μmol/L URB597作用相比,对Bcl-2/Bax比值的影响程度较低。结论:URB597可通过促进人肝癌细胞凋亡抑制其增殖,该作用与其下调Bcl-2/Bax比值,影响线粒体通透性,诱导caspase依赖和非caspase依赖的细胞凋亡有关,且部分依赖于PI3K/Akt通路。

MST4表达对MHCC97H肝癌细胞细胞因子、ERK蛋白、p-ERK蛋白表达的影响及其意义

目的:探讨MHCC97H肝癌细胞中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4/(MST4)的表达与细胞因子、ERK蛋白、p-ERK蛋白表达的关系及其意义。方法:将MHCC97H肝癌细胞培养至对数生长期后,接种于96孔板上培养,分为空白组、高表达组(MST4转染高表达)、低表达组(MST4转染siRNA),采用Western-blot法检测各组共培养24 h后的MST4蛋白表达水平,采用ELISA法检测各组培养24 h后上清液中白细胞介素-2(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、趋化因子-2(CCL2),采用Western-blot法检测各组的细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白的表达,采用MTT实验检测3组肿瘤细胞的增殖能力,采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭迁移能力。结果:高表达组的MST4蛋白表达显著高于空白组和低表达组(P<0.05);空白组和低表达组的MST4蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);高表达组的上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α、CCL2水平均显著高于空白组和低表达组(P<0.05);空白组和低表达组的上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α、CCL2水平差异无统计学意义(P>0.05);空白组、高表达组和低表达组的ERK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);高表达组的pERK蛋白显著高于空白组和低表达组(P<0.05);空白组和低表达组的p-ERK蛋白差异无统计学意义(P>0.05);高表达组的MTT实验吸光度值、Transwell实验MHCC97H肝癌细胞迁移数目高于空白组和低表达组(P<0.05);空白组和低表达组的MTT实验吸光度值、Transwell实验MHCC97H肝癌细胞迁移数目差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MHCC97H肝癌细胞中MST4高表达,将会激活p-ERK蛋白表达,从而提高细胞因子的表达,提高MHCC97H肝癌细胞的增殖、侵袭能力。

DAPT对人肝癌细胞MHCC97H裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨DAPT对人肝癌细胞MHCC97H裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法人肝癌细胞株MHCC97H接种于3~4周鼠龄的雄性裸鼠BALB/C-nu背部1周,建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录裸鼠体质量。24只成瘤裸鼠随机分为4组,高剂量DAPT组（10 mg/kg,0.03 ml/只）、低剂量DAPT组（5 mg/kg,0.03 ml/只）、DAPT溶剂二甲基亚砜（DMSO）对照组（0.05%,0.03 ml/只）、空白对照组（生理盐水,0.03 ml/只）,腹腔注射给药。间隔2 d给药1次,共6次。观察裸鼠肿瘤生长情况及生存状态。于末次给药48 h后采用颈椎脱臼法处死全部裸鼠,称量裸鼠体质量,解剖瘤体,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。结果药物干预前,4组移植瘤模型的裸鼠体质量差异无统计学意义（P〉0.05）;药物干预后,高剂量DAPT组与低剂量DAPT组较其他两组生存状态佳,高剂量DAPT组裸鼠体质量明显高于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;相比于其他3组,高剂量DAPT组移植瘤体积最小,差异有统计学意义（P〈0.05）;高剂量DAPT组及低剂量DAPT组的抑瘤率分别与DMSO对照组及空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 DAPT抑制人肝癌细胞MHCC97H裸鼠皮下移植瘤生长,改善人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠的生存状态。

miR-199-3p通过对FGF2的调控抑制肝癌细胞MHCC97H的增殖、迁移作用及机制

目的:探讨miR-199-3p通过靶向调控抑制靶基因FGF2从而抑制肝癌MHCC97H细胞的增殖和迁移及机制。方法:qRT-PCR检测癌旁正常组织及肝癌肿瘤组织中miR-199-3p的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测肝癌细胞株Huh7、MHCC-97L、SMMC7721、HepG2和MHCC97H株其侵袭能力;qRT-PCR检测miR-199-3p在5株肝癌细胞系中的表达量;通过生物信息软件预测靶基因FGF2mRNA3'UTR的碱基存在miR-199-3p可能互补结合的位点并用荧光报告基因法及WB进行验证;通过qRT-PCR、免疫组化及Western blot检测FGF2在肝癌肿瘤组织和癌旁正常组织及各类肝癌细胞株表达的影响;Transwell、划痕、CCK8及流式细胞法检测miR-199-3p与FGF2对肝癌MHCC97H细胞增殖、侵袭、迁移及周期S期聚集能力的调控;采用MHCC97H细胞构建肝癌肿瘤异种移植小鼠模型进行肿瘤观测及免疫组化实验验证miR-199-3p对肝癌的调控作用。结果:miR-199-3p的表达水平与肝癌细胞侵袭转移能力相关;miR-199-3p能够通过抑制FGF2的mRNA翻译,抑制FGF2蛋白水平表达;FGF2与肝癌细胞侵袭转移能力相关;miR-199-3p可以负调控FGF2抑制肝癌MHCC97H细胞的生物行为;miR-199-3p可抑制肝癌细胞中阳性信号,细胞增殖水平显著降低。结论:miR-199-3p通过抑制FGF2抑制肝癌细胞MHCC97H的增殖和迁移。

红景天苷对97H细胞自噬的影响

目的:探讨红景天苷对人高转移性肝癌细胞株97H自噬的影响。方法:97H细胞经红景天苷处理后,采用透射电镜、MDC染色和吖啶橙AO染色观察自噬现象;采用qRT-PCR方法检测自噬相关基因的mRNA水平;用Western blot方法检测自噬相关蛋白的表达。结果:红景天苷可诱导97H细胞发生自噬,且上调Beclin-1基因mRNA水平,下调p62基因mRNA水平(P<0.05),上调Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达,下调p62蛋白的表达(P<0.05)。结论:红景天苷可以诱导97H细胞的自噬作用。

全反式维甲酸对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H表达基质金属蛋白酶的影响

目的 研究全反式维甲酸 (ATRA)对人肝癌高转移细胞株MHCC97 H表达基质金属蛋白酶 (MMPs)的影响。方法 应用明胶酶谱法检测ATRA对体外培养MHCC97 H细胞分泌MMPs酶谱的影响 ;细胞免疫荧光法检测ATRA对MHCC97 H细胞表达MMP 9的影响 ;利用侵袭小室模型 ,检测ATRA对MHCC97 H细胞体外侵袭能力的影响。结果 MHCC97 H在体外培养时可分泌大量的MMPs ,其中以MMP 9和其活性形式为主。ATRA在体外可显著地抑制MHCC97 H细胞MMPs的表达 ,降低肿瘤细胞穿透人工重组基底膜的能力 ,且在一定的浓度范围内 ,抑制作用与药物浓度呈正相关。结论 抑制肿瘤细胞分泌MMPs的能力 。

MEK1表达载体的构建及其对肝癌细胞ERK通路活性的影响

目的构建pcDNA3.1(+)-MEK1真核表达载体,体外转染人肝癌MHCC97H细胞,观察MEK1在肝癌细胞中的表达及其对ERK通路活性的影响。方法应用RT-PCR扩增出MEK1基因插入pcDNA3.1(+)中,形成重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1。经测序确认后,利用LipofectamineTM 2000将重组载体转染MHCC97H肝癌细胞,使用含G418的培养基进行筛选;将肝癌细胞分为不转染组、转染空载体组和转染重组载体组,运用Western-blot方法检测MEK1、p-MEK1、ERK1/2、p-ERK1/2在各组细胞中的表达并绘制各组细胞的生长曲线对比其增殖能力。结果重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1酶切鉴定电泳条带大小正确,测序结果经Blast比对与人MEK1基因开放性读码框100%吻合;重组载体载体转染肝癌细胞后MEK1表达水平较不转染及转染空载体载体组细胞显著升高,且磷酸化的MEK1及ERK1/2水平也明显升高,转染重组载体载体的肝癌细胞增殖能力得到显著增强。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-MEK1,过表达MEK1蛋白可提高肝癌细胞MAPK/ERK通路活性。

同源异型盒基因HOXA5抑制肝癌的侵袭和迁移通过调控UBC9的表达

目的:检测人肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达情况,观察稳定高表达HOXA5基因的肝癌细胞MHCC97H迁移和侵袭能力的变化,探讨HOXA5调控肝癌侵袭迁移的机制,为肝癌的分子靶向治疗提供新的靶点。方法:通过实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blot以及免疫组织化学等技术检测肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达。构建稳定高表达HOXA5的肝癌细胞MHCC97H,利用划痕和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化。应用CHIP-Seq筛选出HOXA5潜在的靶基因,在稳定高表达HOXA5基因细胞中应用qRT-PCR、Western blot验证HOXA5与靶基因的关系。结果:新鲜的肝癌组织以及相对应的癌旁组织中,免疫组织化学显示相比于癌旁组织的表达情况,肝癌组织中HOXA5的表达低于癌旁;qRT-PCR、Western blot检测发现相对于癌旁组织,肝癌组织中HOXA5的表达水平显著下调。过表达了HOXA5基因的MHCC97H细胞的侵袭能力下降。CHIP-Seq的结果发现,HOXA5结合在UBC9的上游启动子区域。在稳定高表达HOXA5的MHCC97H细胞中,UBC9的mRNA和蛋白表达均下调。当在稳定高表达HOXA5的同时过表达UBC9时,肝癌细胞的侵袭和迁移能力部分回复。结论:在肝癌组织中HOXA5的表达下调;UBC9介导了HOXA5抑制肝癌细胞侵袭迁移的作用,这为进一步阐明肝癌发生侵袭转移过程中的分子机制提供一个新的思路,为精准治疗肝癌提供一个可能的靶点。

穿心莲内酯对人肝癌细胞MHCC97H增殖的影响及其机制研究

【目的】观察穿心莲内酯(Andro)对人肝癌细胞MHCC97H增殖的影响及作用机制,探讨其体外抗肝癌作用。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Andro不同浓度(5、10、20、30、40、50μmol/L)及不同处理时间(24、48、72 h)对MHCC97H细胞增殖的影响;采用Annexin V—碘化丙啶(PI)双染法、Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测凋亡相关蛋白如Bax、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、裂解型胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、剪切型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PAPR),周期相关蛋白如周期素B1(cyclin B1)、周期素依赖性激酶1(CDK1)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白如m TOR、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)的表达。【结果】穿心莲内酯5、10、20、30、40、50μmol/L组24、48、72 h MHCC97H细胞增殖率下降,且随着Andro浓度、处理时间的增加而逐渐降低。Andro 25、50μmol/L组12、24、48 h MHCC97H细胞凋亡率均升高,呈浓度和时间依赖性。Andro 50μmol/L组48 h MHCC97H细胞发生G2/M期阻滞。与溶剂对照组比较,Andro 50μmol/L组中促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP表达升高(P<0.05或P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P<0.01),周期蛋白cyclin B1和CDK1表达及mTOR信号通路蛋白mTOR、p70S6K的磷酸化水平均下降(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。【结论】Andro可能通过调控MHCC97H细胞凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP、Bcl-2及周期相关蛋白cyclin B1、CDK1的表达及抑制mTOR-p70S6K信号通路的激活,促进细胞凋亡及细胞周期阻滞,从而发挥体外抗肝癌作用。

雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的影响及机制研究

目的:探讨雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的抑制作用及相关机制。方法:应用Transwell技术观察不同浓度(2.5μmol·L-1、5.0μmol·L-1、10.0μmol·L-1)雷公藤红素对MHCC97H细胞侵袭力和迁移力的影响。Westernblot法检测雷公藤红素处理后对C-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及NF-κB/p65核浆分布变化的影响。结果:雷公藤红素处理后24 h,迁移实验及侵袭实验结果显示,加药组透膜细胞数较对照组明显减少(P<0.05)。Westerblot结果显示磷酸化JNK表达上调,NF-κB/p65入核减少。结论:雷公藤红素体外具有抑制人肝癌细胞侵袭和转移的作用,其机制可能与活化JNK通路、抑制NF-κBp65入核有关。

SRPX2对肝癌细胞侵袭与迁移能力的影响及作用机制

目的探讨sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)对人肝癌细胞MHCC97H侵袭与迁移能力的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌细胞MHCC97H,用Lipofectamine法将阴性对照和SRPX2特异性siRNA转染到人肝细胞癌MHCC97H,继续培养48 h收获细胞,用Transwell检测细胞体外侵袭和迁移能力;实时荧光RT-PCR法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和基质金属蛋白酶(MMP2)mRNA表达的影响;Western Blot法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和MMP2蛋白水平的影响。结果与阴性对照组比较,干扰SRPX2组人肝癌细胞MHCC97H侵袭、迁移能力、SRPX2 mRNA、MMP-2 mRNA、SRPX2蛋白和MMP-2蛋白降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SRPX2可能通过调节MMP2而影响人肝癌细胞MHCC97H侵袭和迁移。

siRNA沉默Livin基因表达在抑制裸鼠肝癌生长中的作用研究

目的目的应用RNA干扰技术抑制人肝癌细胞株MHCC97H中凋亡抑制因子Livin的表达,研究Livin基因在抑制裸鼠肝癌细胞移植瘤生长中的作用。方法设计针对Livin基因目标序列的siRNA,将其经脂质体Lipofectamine^(TM)2000转染至肝癌细胞株MHCC97H细胞,采用RT-PCR、Westernblot方法检测转染后的MHCC97H细胞中Livin基因的mRNA和蛋白质表达。通过建立裸鼠的荧光素酶(Luciferase)标记的MHCC97H肝癌细胞移植瘤模型,监测肿瘤体积、重量,通过活体成像技术观察siRNA注射治疗移植瘤的效果。结果在Livin-siRNA转染后的MHCC97H细胞中,Livin基因的mRNA和蛋白质表达显著下降(P<0.05),siRNA注射治疗移植瘤后,肿瘤重量、体积及荧光素酶信号均显著性下降(P<0.05)。结论通过RNA干扰技术阻断MHCC97H细胞中Livin的表达,可抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长,提示Livin基因在肝癌的发生、发展过程中起重要作用。