力学因素调控肝血窦内皮细胞去窗孔化的生物力学机制

目的肝血窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSEC)是肝内特化的内皮细胞,其独特的窗孔结构是肝脏稳态维持的必要条件。LSEC去窗孔化是促进肝纤维化发展的重要因素,而基质硬度和膜张力等力学因素能否直接调控LSEC去窗孔化目前尚不清楚。方法构建小鼠肝纤维化模型及硬度可调的水凝胶,并采用原子力显微镜量化窗孔的数量和大小,分析基质硬度调控LSEC去窗孔化的力学转导机制;通过改变溶液渗透压调节细胞膜张力,使用Flipper-TR探针量化膜张力的变化,并利用超分辨成像观测活细胞窗孔动态变化,探究膜张力对窗孔形成的调控作用。结果随着基质硬度的增加,LSEC窗孔的数量显著下降。硬基底可促进FAK、p38及下游信号分子的磷酸化,诱导F-actin骨架重组,促进LSEC去窗孔化。随肝纤维化的发展,LSEC窗孔减少,而抑制FAK或p38可促进肝纤维化早期LSEC的窗孔恢复。高渗或抑制F-actin聚合可使LSEC的细胞膜张力减小,窗孔数量增加。结论基质硬度可通过FAK、p38调控LSEC的骨架重组及去窗孔化,而膜张力的减小可促进LSCE窗孔形成。以上研究为肝纤维化的早期治疗提供了新靶点和新思路。

肝窦内皮细胞在非酒精性脂肪性肝炎中的作用

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是世界上最常见肝病之一,超过10%的NAFLD患者会发展成炎症和纤维化形式的非酒精性脂肪性肝炎(NASH),从而导致终末期肝病。肝窦内皮细胞(LSEC)是位于流动血液和其他肝细胞类型之间的高度特化的内皮细胞。作为肝脏的重要生理结构,LSEC在NASH的发生和发展过程中发挥着重要作用。本文总结了LSEC在生理条件下和NAFLD病理条件下发挥的抗炎和促炎作用。

肝纤维化中肝窦内皮细胞信号通路的研究进展

慢性肝损伤进展至肝纤维化是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)累积所致,并与肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)密切相关[1]。LSECs位于肝窦腔与肝细胞之间,正常的LSECs具有窗孔和细胞间的松散连接,内皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性,达到快速交换各种大小分子的目的。此外,LSECs具有大量的内吞囊泡,可与枯否细胞结合,降解和再利用免疫复合物及溶酶体酶等大分子物质,构成了体内最强大的清道夫系统。经过门静脉系统以及肠道吸收的各种物质首先作用于第一道防线—LSECs,使其产生持续的损伤和炎症反应,导致LSECs出现窗孔的缺失和内皮下基底膜的形成,这种被称为肝窦毛细血管化的现象是肝纤维化重要的始发因素[2]。ECM由肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)合成,并被LSECs降解。在肝纤维化的早期阶段,受损的LSECs失去其降解能力,并分泌多种细胞因子如转化生长因子(transforming growth factor-beta,TGF-β)和血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF),进一步刺激造血干细胞的活化,导致ECM生成和降解失衡并在组织内沉积,促进肝纤维化进展[3]。此外,当肝窦毛细血管化时其通透性降低,各种代谢产物不易进入血液循环,肝细胞缺氧,最终致肝细胞损伤和窦性塌陷,促进肝纤维化的发展[4]。本文就LSECs相关的信号通路在肝纤维化形成过程中的机制研究进行综述,以期为肝纤维化的治疗提供新的策略及方向。

基于“玄府”与“肝窦内皮细胞”表达论治原发性肝癌

原发性肝癌(PLC)起病隐匿,症状不典型,发现时大多都处于中晚期,治疗手段有限且预后差。PLC可归属于中医学“积聚”“肝积”等疾病范畴,其病机以气郁为先,导致痰瘀胶结,伏毒不出,阻滞肝络。玄府是气血津液升降出入之门户、调和脏腑阴阳之孔窍。肝窦内皮细胞(LSECs)的失窗孔化及基底膜的形成与PLC密切相关,且与肝玄府在结构和功能上相吻合。因此,玄府郁闭是LSECs表达失常的重要原因,开玄法为PLC的主要治则,治疗上有内服开玄法、外敷开玄法、针灸开玄法。

肝窦内皮细胞在NAFLD疾病中的作用

非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一种发病率较高的常见慢性肝病,其发病机制较为复杂,为药物研发带来困难。肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells, LSECs)位于肝血窦表面,是肝脏与血液接触的第一道防线,也是肝脏中含量最多的非实质细胞。LSECs作为肝脏内高度特化的内皮细胞,由于其独特的结构以及功能在NAFLD的发生与进展中都扮演了重要的角色,并且可以为NAFLD药物研发带来新思路。本文主要针对LSECs及其功能障碍在NAFLD中参与到的发病机制进行综述,并对以改善LSECs功能障碍为靶点的药物进行介绍。

Journal of Hepatology|内皮细胞POFUT1通过抑制纤维蛋白原合成控制损伤诱导的肝纤维化

肝窦内皮细胞(LSEC)中的NOTCH信号调节肝纤维化,POFUT1是NOTCH信号的重要调节因子。来自西安交通大学基础医学院的He等研究了LSEC表达的POFUT1在肝纤维化中的作用。研究者用产生内皮特异性POFUT1敲除小鼠,并通过慢性四氯化碳暴露或胆总管结扎诱导实验性肝纤维化。肝脏样本通过ELISA、组织学、电子显微镜、免疫染色和RNA原位杂交进行评估。分离LSEC和肝星状细胞(HSC),通过RNA测序、qPCR和蛋白质印迹进行基因表达分析。采用来自LSEC培养物的上清液处理HSC,研究LSEC和HSC之间的信号传导串扰。分析来自肝硬化患者和健康个体的肝脏单细胞RNA测序数据集,以评估在小鼠研究中观察到的基因表达变化的临床相关性。

紫檀芪减轻小鼠肝窦内皮细胞氧化损伤的机制

目的探索天然的酚类化合物紫檀芪(pterostilbene,PTE)减轻小鼠肝窦内皮细胞氧化损伤的机制。方法40只C57小鼠分为对照组、模型组、治疗组建立70%肝脏缺血/再灌注(缺血60 min)模型,并通过灌注和消化法分离原代肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)。通过HE染色观察肝脏结构;透射电镜(TEM)观察肝窦内皮细胞超微结构;扫描电镜(SEM)观察LSECs窗孔的结构;Western blot检测LSECs内血红素氧化酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)表达水平。结果HE染色显示,PTE能够改善肝脏缺血性损伤;TEM观察到PTE对肝窦内皮细胞具有保护作用;扫描电镜观察发现,空白对照组LSECs窗孔数量较多,模型组窗孔数量减少;与模型组比较,治疗组LSECs窗孔数量有所增加。Western blot结果显示,PTE能够诱导LSECs中HO-1表达。结论PTE通过诱导血红素氧化酶-1表达减轻小鼠肝窦内皮细胞氧化损伤,保护肝脏免受缺血/再灌注损伤。

肝窦内皮细胞与肝纤维化的关系

生理情况下,肝窦内皮细胞(LSEC)对肝脏稳态的维持起重要作用。而在肝脏病理损伤条件下,LSEC可通过改变其自身结构即毛细血管化对损伤做出反应,并加重肝损伤。此外,LSEC与肝脏中其他细胞的相互作用对肝纤维化的发生发展也有一定作用,其中与肝纤维化的主要效应细胞——肝星状细胞的交互作用占主体地位。本文主要阐述慢性肝损伤时LSEC在肝纤维化发生发展中的作用。

从肝窦内皮细胞探索“肝主疏泄”科学内涵

“肝主疏泄”理论作为中医藏象理论的主要内容之一,强调“肝”在调节机体周身气机运行中的关键作用。现代医学普遍认为,肝纤维化时肝血窦内皮细胞的结构形态及其功能变化与中医学“肝主疏泄”理论具有一定的相关性。因此,本文综述了近年来中医学关于“肝主疏泄”理论与肝血窦内皮细胞微观机理的现代研究成果,从中医理论“肝主疏泄”的科学内涵、肝血窦内皮细胞的结构基础及功能、肝血窦内皮细胞与“肝主疏泄”在生理上的理论对应性、肝血窦内皮功能障碍与“肝失疏泄”在病理上的理论同一性及中医药在逆转肝血窦内皮功能障碍对“肝失疏泄”功能恢复等方面,论述“肝主疏泄”和肝血窦内皮细胞在理论层面的对应关系,以期为中医“肝主疏泄”理论指导下的“疏肝理气”法治疗肝纤维化提供新思路和理论依据。

肝窦内皮细胞在肝脏疾病中的作用

肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)作为肝脏中比例最高的非实质细胞,其窗孔结构和高内吞清除能力在肝脏生理病理过程中发挥不可或缺的作用。LSECs主要通过发挥抗炎、内吞、分泌促血管生成信号分子和维持HSCs表型等作用,参与调控非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)、酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver,AFL)、肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)、肝再生、肝纤维化等肝脏病理过程。该文就LSECs正常生理功能及其在各种病理状态下发挥的不同作用作一综述,旨在通过靶向LSECs为治疗肝脏疾病提供新的观点。

四氯化碳诱导肝纤维化早期大鼠肝窦内皮细胞及基底膜形态改变的动态研究

目的:探讨四氯化碳诱导肝纤维化早期大鼠肝窦毛细血管化的形成过程。方法:清洁级雄性SD大鼠采用随机数字表法随机分为2组:正常对照组(N组,6只)和肝纤维化模型组(M组,32只)。M组大鼠腹腔注射50%四氯化碳蓖麻油混合液,N组大鼠腹腔注射生理盐水,剂量为2 mL/kg,每周2次,共4周。分别于造模第3天、1周、2周和4周处死大鼠,HE染色和Masson染色观察肝脏组织炎症及纤维化的改变,透射电镜观察肝窦内皮细胞(LSECs)窗孔与基底膜(BM)的改变,免疫组织化学检测LSECs表面标志物CD31及基底膜成分IV型胶原(Col IV)和层黏连蛋白(LN)的改变。结果:HE及Masson染色显示四氯化碳造模4周早期肝纤维化已形成。肝组织透射电镜显示四氯化碳造模第3天后开始出现LSECs窗孔直径变小及数目减少,随着造模时间的延长,LSECs失窗孔现象逐步严重,至第4周时局部内皮下可见连续的基底膜。免疫组化染色显示LSECs表面标志物CD31表达随着LSECs窗孔数目的减少而逐渐增强;基底膜成分Col IV于造模第2周时表达开始显著增强并随着造模时间延长表达逐渐增强,LN于造模第4周时表达开始显著增强。结论:肝纤维化早期大鼠局部肝组织可见典型的肝窦毛细血管化形成;肝窦壁内LN沉积是肝窦毛细血管化时形成连续基底膜的关键因素。

大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞和肝窦内皮细胞的同步分离与培养

目的探索和建立同步分离大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞和肝窦内皮细胞,并进一步鉴定和培养的方法。方法联合应用原位灌注、离体灌注、梯度密度离心和差速贴壁等分离方法,获取4种大鼠肝内原代细胞,采用形态学观察、免疫荧光染色和墨汁吞噬实验等方法对所分离的各种原代细胞进行纯度鉴定。结果通过原位灌注结合离体灌注、密度梯度离心结合差速贴壁等分离手段,成功实现了大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞以及肝窦内皮细胞的同步分离,且所得原代细胞得率、活力及纯度等指标均符合后续细胞实验要求。结论通过简易方法同步分离大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞以及肝窦内皮细胞是可行的。

平足蛋白(PDPN)在肝星状细胞活化以及肝纤维化中的作用分析

目的探究平足蛋白(PDPN)在肝星状细胞活化以及肝纤维化中的作用,并对其机制进行初步探讨。方法收集2019年9月—2022年6月首次就诊于上海中医药大学附属普陀医院感染科的75例慢性乙型肝炎患者肝活检组织样本,实时定量PCR(RT-PCR)和免疫组化检测PDPN在不同肝纤维化分期患者肝组织中的表达。12只雄性C57/BL6小鼠随机分为正常组和模型组,每组各6只。模型组腹腔注射含10%CCl_4,对照组注射等体积橄榄油共6周,HE染色、天狼星红染色观察肝组织病理学变化,分离小鼠肝脏原代细胞,检测PDPN mRNA在各类型细胞中表达;使用PDPN蛋白处理小鼠原代肝星状细胞,并使用NF-κB抑制剂BAY11-7082处理,分析PDPN诱导肝星状细胞炎症因子表达情况。计量资料2组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。两组数据相关性分析采用Spearman相关性分析法。结果慢性乙型肝炎患者肝活检样本中,PDPN mRNA在正常肝脏中表达较低,S3、S4期肝组织中表达显著升高,与正常肝组织比较差异均有统计学意义(P值均<0.001);免疫组化染色结果显示,PDPN阳性表达主要集中在纤维间隔及肝窦,S4期肝组织PDPN阳性面积比S0期表达显著升高(t=8.892,P=0.001)。正常组小鼠中PDPN主要在肝窦表达少许,在CCl_4模型小鼠中PDPN表达显著升高(t=0.95,P<0.001),主要在纤维间隔表达;RT-PCR结果显示,PDPN mRNA在CCl_4模型小鼠中显著升高(t=11.25,P=0.002)。与肝细胞、肝星状细胞、Kupffer细胞和肝内胆管细胞相比,PDPN在肝窦内皮细胞中明显高表达(F=20.56,P<0.001);PDPN蛋白处理小鼠原代肝星状细胞15 min,炎症相关因子TNF-α、CCL3、CXCL1和CXCR1的m RNA表达,与对照组相比均显著升高(P值均<0.05),BAY11-7082(NF-κB信号抑制剂)处理后,上述炎症指标水平均明显下降(P值均<0.05)。结论在肝纤维化中主要表达在肝窦内皮细胞的PDPN增加,其通过NF-κB信号调节肝星状细胞活化,促进肝纤维化进展。

人肝细胞、窦状间隙内皮细胞的分离、培养

从创伤意外死亡的病人中获取肝组织，应用离体胶原酶Ⅳ灌注和消化的方法获得肝组织细胞悬液。根据差速离心将肝细胞和其它细胞进行分离，并根据枯否氏细胞和内皮细胞贴附时间的不同，分离出肝窦间隙内皮细胞，其存活率可达９０％以上。肝细胞纯度可达９５％。肝窦间隙内皮细胞经一周培养纯度可达９０％以上。同时描述了人肝组织中肝细胞和肝窦间隙内皮细胞原代培养过程的形态特征，并对肝窦间隙内皮细胞进行了鉴定。

扶正化瘀方增加毛细血管化肝窦内皮细胞窗孔结构

目的:体外实验探讨扶正化瘀方对毛细血管化肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)窗孔变化的影响。方法:扶正化瘀方药物粉末以0.46 g/kg大鼠体质量的剂量配制成悬液,给予10只Sprague Dawley(SD)大鼠灌胃,采取二次重复给药方式,1 h后心脏采血提取扶正化瘀方药物血清(扶正化瘀方组,n=10),同法以三蒸水灌胃10只SD大鼠,提取血清作为对照血清(对照组,n=10)。两组血清均以10%的浓度配成培养基,以其培养体外传代的LSECs,观察不同条件下体外传代的LSECs v WF和CD31的蛋白表达情况,并用电镜观察LSECs窗孔结构的变化。结果:1)免疫细胞化学及Western印迹结果均显示:扶正化瘀方组体外传代的LSECs表达v WF和CD31蛋白均较对照组明显下调,扶正化瘀方组v WF和CD31的灰度值分别为0.548±0.020和0.262±0.010,对照组分别为0.845±0.090和0.383±0.010,两组比较差异均有统计学意义(分别t=5.18,9.61,均P<0.05)。2)扫描电镜显示:对照组LSECs大部分窗孔处于闭塞甚至消失状态,而扶正化瘀方组LSECs表面窗孔的数目明显增多、增大。结论:扶正化瘀方可抑制肝窦内皮细胞v WF和CD31的表达,增加细胞表面的窗孔结构,具有潜在的逆转肝窦毛细血管化的作用。

低氧预适应对移植肝脏肝窦内皮细胞损伤的影响

目的探讨低氧预适应对肝脏移植大鼠术后早期SEC结构和肝功能改变的影响。方法用“二袖套法”建立大鼠原位肝脏移植模型,A组:原位肝移植对照组,B组:低氧预适应组,C组:正常大鼠对照组,测定HA、ET-1、SEC显微和超微结构改变及一周存活率。结果术后B组比A组HA水平明显降低,SEC结构得到更好的保存、一周生存率显著提高(P<0.05)。结论低氧预适应可减轻SEC的损伤,避免术后的无复流及进一步的肝实质损伤,减少术后PGF的发生,提高了存活率。

肝窦内皮细胞条件培养基对肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响

肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝纤维化时细胞外基质(extracellular matrix,ECM)异常增生的主要细胞来源,其调控机制复杂,许多因素参与.其中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的研究引起关注.CTGF 对细胞分化、增殖及 ECM 具有很强的调控作用。

肝窦内皮细胞与肝纤维化形成的研究概况

肝窦内皮细胞(sinusoidal endothelial cell,SEC)是数量最多的肝脏非实质细胞,占非实质细胞总数的44%～60%。近年来在肝纤维化的研究过程中肝窦内皮细胞越来越被重视,相关研究也日渐增多,肝窦内皮细胞特殊的窗孔结构及生理特性决定其在肝纤维化形成中具有重要作用。

裸鼠肝窦内皮细胞的分离、培养及鉴定

背景:建立裸鼠肝窦内皮细胞的原代分离培养方法,进一步研究其生长特点及生物学特性。目的:建立裸鼠肝窦内皮细胞的原代分离、培养方法,并鉴定其纯度及观察其生物学特性。方法:无菌下摘除裸鼠肝脏,剪成1mm3大小,Ⅳ型胶原酶在37℃恒温下消化,应用CD146免疫磁珠分选肝窦内皮细胞,在倒置显微镜观察内皮细胞形态及生长特性,用von-Willebrand因子免疫细胞化学验证分选细胞的表面蛋白表达,鉴定肝窦内皮细胞的纯度,Hochest33342测定凋亡。结果与结论:分离的肝窦内皮细胞纯度达95%以上,活力好,光镜下可以看到典型的铺路石样形态,von-Willebrand因子免疫细胞化学染色阳性。肝窦内皮细胞在体外培养3周后凋亡。提示Ⅳ型胶原酶消化加CD146免疫磁珠分选肝窦内皮细胞纯度高,方法可靠。

肝窦内皮细胞生理功能及病理过程的分子机制

肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cell,LSEC)是肝非实质细胞的主要细胞群,具有物质转运、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能.肝在遭到多种病原侵袭时,肝窦内皮细胞窗孔逐渐减少或消失,内皮下基膜形成,产生类似于连续型毛细血管的结构,这一过程称为肝窦毛细血管化.它由多种因素引起,其过程极复杂,在多种肝病的发病前期阶段均有出现,近年来受到广泛关注.而目前关于肝窦内皮细胞的生理功能及病理机制研究方面的系统总结仍少有报道.本文对肝窦内皮细胞的生理功能及肝窦病理机制作一较为全面的综述.除了阐述肝窦毛细血管化自身分子机制的研究进展外,还重点介绍了肝窦毛细血管化参与肝多种疾病发病过程的作用机制.此外,对肝窦内皮细胞相关的研究方法也作了详细的介绍,为全面了解肝窦内皮细胞生理功能及肝窦毛细血管化的分子机理提供参考.