肝素黄杆菌肝素酶Ⅲ基因hepC的可溶表达体系构建及酶学性质研究

肝素酶III(HepC)是肝素结构分析及酶法制备低分子量肝素的重要生物催化剂。为实现HepC在大肠杆菌中的可溶表达,通过PCR方法从肝素黄杆菌(Flavobacterium heparinum)的基因组中扩增得到HepC基因,采用融合蛋白方法构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)与HepC融合的表达载体和体系,并在低温(15℃)下诱导重组大肠杆菌,显著提高了MBP-HepC重组表达的可溶性。通过摇瓶培养发酵液的HepC比酶活达到46.41 IU/mg,超过目前报道的最高水平。通过MBP与直链淀粉的亲和吸附实现了MBP-HepC的亲和分离和纯化,一步亲和纯化后蛋白的纯度即可达95%以上。该融合酶基本特性研究表明,融合肝素酶III(MBP-HepC)的最适作用pH7.3,最适作用温度为42℃-48℃。热稳定性较好,其30℃时的稳定性高于融合肝素酶I(MBP-HepA)。