肝纤维化炎症微环境对间充质干细胞Hedgehog信号通路调控的研究

目的探索脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)的Hedgehog信号通路在肝纤维化炎症微环境中的活化情况。方法 ADMSCs原代提取及培养,流式鉴定Sca-1、CD44、CD34、CD45。利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α),干扰素-γ(IFN-γ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的协同作用方式构建模拟肝纤维化炎症微环境,将ADMSCs分为对照组(PBS组)、试验组(TNF-α+IFN-γ+TGF-β1协同刺激组)。将12只雄性C57BL/6小鼠随机分为两组,对照组(橄榄油,n=6)和试验组(四氯化碳,CCl4,n=6),ADMSCs转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)慢病毒,用于细胞的体内示踪,稳转细胞通过小鼠尾静脉注射,3d后安乐死,取脾脏及肝脏,制作组织冰冻切片。通过qRT-PCR、Western blot、免疫荧光方法检测Hedgehog通路中Smo和Gli1的表达情况。结果实验组的Smo和Gli1mRNA和蛋白表达量高于对照组(P<0.05);肝纤维化小鼠肝脏中ADMSCs数量多于对照小鼠(P<0.05),而两组小鼠的脾脏中ADMSCs数量差异无统计学意义(P>0.05)。组织免疫荧光实验发现,肝纤维化小鼠肝脏中的ADMSCs的Smo和Gli1蛋白表达高于对照小鼠。结论肝纤维化炎症微环境能够促进ADMSCs的Gli1、Smo分子表达,激活Hedgehog信号通路。