Semi-Pre-HPLC与HPLC-MS联用的二维色谱分析系统对代谢相关脂肪性肝病肝线粒体中滇黄精药源成分的检测

目的检测代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)肝线粒体中滇黄精药源成分的分布情况。方法24只6周龄雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组和滇黄精水提物组,每组8只。正常组以普通饲料喂养,其他组以高脂饲料喂养。建立模型同时滇黄精水提物组按照8 g/(kg·d)灌胃滇黄精水提物,正常组与模型组灌胃等体积的生理盐水,连续14周。最后一次给药1 h后,取各组大鼠肝组织,分离得到线粒体,采用Semi-Pre-HPLC联合HPLC-MS二维色谱分析系统分析各组肝线粒体药源成分。结果MAFLD大鼠肝线粒体中检测到10种药源成分,其中7种已报道脂代谢调节活性,分别为薯蓣皂苷元、薯蓣皂苷、菝葜皂苷元、Pratioside D1、异甘草素、β-谷甾醇、常春藤皂苷元。结论检测到的10种药源成分可能是滇黄精调节线粒体缓解MAFLD的主要活性物质。

激素型肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组与能量代谢相关性

应用凝胶内差异显示电泳技术研究肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组,并从肝线粒体蛋白质组角度阐述肾阳虚与能量代谢的关系.8个分别来自于肾阳虚大鼠和正常大鼠的肝线粒体蛋白质样品(各4个)分别用荧光染料Cy3、Cy5标记,以及8个样品等量混合物用Cy2标记作为内标,每一Cy3、Cy5标记样品与Cy2标记的内标等量混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder软件结合内标分析,以肾阳虚组动物与正常组动物肝线粒体蛋白质相差1.2倍以上的蛋白作为差异蛋白,实验共获得16个差异蛋白质,经质谱测定和与蛋白质文库比对,鉴定11个蛋白质.其中,肾阳虚动物热休克蛋白60和70、肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶、亚硫酸盐氧化酶、ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶表达量增加,而丙酮酸脱氢酶、α酮戊二酸脱氢酶、脂酰辅酶A脱氢酶和鸟氨酸氨基转移酶表达量降低.实验表明,肾阳虚动物能量代谢相关酶的变化与肾阳虚的临床虚寒症状有关.

运动性疲劳状态下线粒体膜生物学特征的研究-Ⅲ:递增负荷力竭性运动后大鼠肝线粒体膜NADH-CoQ还原酶及肝组织NAD^(+)的变化

以５０大鼠三级递增负荷跑台跑为力竭性运动模型，分别测定了运动后即刻肝线粒体内膜ＭＭＤＨ－ＣｏＱ还原酶（复合体１）活性的变化；肝组织内ＮＡＤ含量及线粒体膜脂质过氧化水平（ＭＤＡ含量）的变化。发现：一次力竭性运动后，大鼠肝线粒体膜复合体１活性及肝组织当中ＭＤ”含量显著性下降，ＭＤＡ含量显著增加。研究提示，递增负荷力竭性运动中线粒体内膜复合体１损害，肝组织呼吸链底物堆积，线粒体氧利用能力下降，可能是运动性线粒体膜损害及疲劳的重要膜分子机制之一。

内南五味子木脂素戈米辛J对肝线粒体膜脂质过氧化和超氧阴离子自由基的作用

目的 研究来自内南五味子的戈米辛J对脂质过氧化的影响和清除超氧阴离子自由基 (O·2 )的能力。方法 采用离体大鼠肝线粒体膜的脂质过氧化模型和黄嘌呤氧化酶 鲁米诺化学发光法。结果 戈米辛J象VitE一样能剂量依赖性抑制Fe2 + VitC和ADP/NADPH所致的脂质过氧化 ;戈米辛J的IC50 分别为 5 75 ( 95 %可信限 :5 42～ 6 11)和0 95 ( 0 14～ 6 5 4) μmol·L-1。VitE的IC50 分别为 74 8( 30 2～ 185 3)和 6 5 1( 0 13～ 319) μmol·L-1。戈米辛J抑制Fe2 + VitC和ADP/NADPH所致的脂质过氧化的作用比VitE的作用分别强 13倍和 6 8倍。戈米辛J也剂量依赖地抑制黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶 鲁米诺化学发光 ,其抑制发光强度 5 0 %的浓度 (IC50 )为 2 18 2 2 μmol·L-1。结论 戈米辛J具有抑制OH·诱导的脂质过氧化和清除O·2

菟丝子醇提液对衰老模型小鼠肝线粒体保护作用的实验研究

目的探讨菟丝子醇提液对衰老模型小鼠肝脏线粒体的保护作用及机制。方法将纯系昆明种小鼠50只,随机分为青年组、衰老模型组、给药15d组、给药30d组和给药45d组。D-半乳糖制作衰老模型,经胃灌服菟丝子醇提液。采用比色分析法测定呼吸链复合体Ⅳ活性,PCR法检测线粒体DNA缺失,RT-PCR法检测COⅠmRNA的表达水平;同时观察不同给药天数对上述指标的影响。结果D-半乳糖可诱导小鼠肝线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性降低(P<0.01),肝mtDNA的缺失增加,呼吸链复合体ⅣCOⅠ亚基mRNA的表达水平增高。菟丝子醇提液可提高呼吸链复合体Ⅳ活性,减少mtDNA缺失,降低呼吸链复合体ⅣCOⅠ亚基mRNA的表达。结论菟丝子醇提液可提高衰老模型小鼠呼吸链复合体Ⅳ活性,降低COⅠ亚基mRNA表达,减少mtDNA缺失,而发挥保护肝脏线粒体的作用,并随给药时间的延长作用更显著。

解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝线粒体膜电位的影响

目的:观察解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝线粒体膜电位(△Ψm)的影响。方法:用硫代乙酰胺(TAA)皮下注射构建急性肝衰竭大鼠模型,将84只大鼠随机分为7组:空白组、阳性对照组、解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组(9·1g/kg、28·76g/kg、57·55g/kg)、乳果糖组、安宫牛黄丸组。通过机械法分离肝细胞,阳离子染料JC-1染色后分别使用倒置荧光显微镜(Fluorescence Microscopy,FM)、流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)观察各组大鼠△Ψm的稳定性。结果:FM检测发现空白组主要呈现点状的红色荧光,阳性组镜下呈现大量弥散性的云雾状绿色荧光,解毒化瘀Ⅱ方组、乳果糖组、安宫牛黄丸组红色荧光量明显多于阳性组;FCM定量分析显示阳性对照组绿色荧光强度为28·4±2·92,解毒化瘀Ⅱ方高剂量组为16·21±2·89,两组比较差异有显著性意义(P<0·01)。结论:解毒化瘀Ⅱ方可能是通过稳定肝线粒体膜电位,抑制肝细胞发生异常凋亡来实现其保护肝细胞的作用。

米糠抗氧化肽对D-半乳糖致衰小鼠肝线粒体的保护

目的:观察米糠抗氧化肽对D-半乳糖(D-gal)致衰小鼠肝线粒体的保护作用,并初步探讨其机制。方法:昆明小鼠60只随机分成对照组、衰老模型组、米糠抗氧化肽低、中、高剂量治疗组。衰老模型组每日颈背部皮下注射D-gal100mg/kg·bw;米糠抗氧化肽各组除注射D-gal外,分别灌胃抗氧化肽100、200、500mg/kg·bw;对照组每日皮下注射等量生理盐水,连续6w。利用试剂盒分别检测各组小鼠肝线粒体锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性、总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量。结果:与衰老模型组相比,米糠抗氧化肽可明显增强小鼠肝线粒体Mn-SOD、GSH-Px、CAT及T-AOC活性,显著抑制MDA含量的上升(P<0.05或P<0.01),并呈量-效关系。结论:米糠抗氧化肽能够显著提高致衰小鼠的抗氧化能力,减轻肝线粒体损伤,其机制可能与该肽直接清除体内自由基、提高机体抗氧化酶活性以及对抗脂质过氧化反应有关。

防己黄芪汤对复合造模肝纤维化小鼠肝线粒体过氧化损伤的影响

目的研究防己黄芪汤对内毒素脂多糖(LPS)与二甲基亚硝胺(DMN)联合造模的肝纤维化小鼠肝线粒体过氧化损伤的影响。方法以ELISA法检测用药后肝纤维化小鼠肝线粒体三磷酸腺苷酶(ATPase)、丙二醛(MDA)以及超氧化物歧化酶(SOD)的变化,观察防己黄芪汤对肝纤维化小鼠肝组织线粒体过氧化损伤的影响。结果防己黄芪汤能有效降低肝纤维化小鼠肝线粒体中MDA水平,并提高ATPase及SOD的含量,其效果呈剂量依赖关系。结论防己黄芪汤能有效清除肝纤维化小鼠体内的氧自由基水平,从而减轻肝纤维化过程中的过氧化损伤。

不同来源日粮铜水平对肉鸡肝线粒体H_2O_2生成变化的研究

本研究旨在探讨不同来源日粮铜水平对肉鸡肝线粒体H2O2生成变化的影响。选用硫酸铜、蛋氨酸铜作为源铜,每种源铜均设4个浓度梯度。288只1日龄科宝商品代肉鸡随机分为8组,每组36只,分别喂以对照日粮(Cu 11 mg.kg-1,Ⅰ组)和高铜日粮(Cu 110 mg.kg-1,Ⅱ组;Cu 220 mg.kg-1,Ⅲ组;Cu 330 mg.kg-1,Ⅳ组)60 d,并于12、36和60日龄取样,观察肉鸡肝线粒体H2O2生成速率变化。结果:与对照组相比,2种来源的高铜Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组肉鸡肝线粒体H2O2生成速率显著加快(P<0.05或P<0.01);试验第36和60天时,蛋氨酸铜各组肉鸡肝线粒体过氧化氢生成速率均高于相应的硫酸铜各组(P<0.05或P<0.01),并且,高铜日粮饲喂的肉鸡肝线粒体H2O2生成部位主要集中在线粒体呼吸链复合体Ⅳ。结果表明:高铜日粮可诱导肝脏的氧化应激损伤;同剂量的有机铜螯合物比无机铜更易加快肝脏线粒体H2O2生成速率,并可推测,线粒体呼吸链复合体Ⅳ是机体在高铜刺激下攻击的靶部位之一。

褪黑素拮抗鼠肝线粒体自由基产生的实验研究

目的观察褪黑素拮抗氧自由基和对膜脂质过氧化损伤的保护作用。方法用电子自旋共振技术，以ＤＭＰＯ和４－ＰＯＢＮ为捕集剂，捕集Ｆｅｎｔｏｎ反应产生的羟自由基和Ｆｅ２＋启动的鼠肝线粒体膜脂质过氧化产生的脂类自由基，以脂肪酸自旋标记物５－Ｄｏｘｙｌ和１６－Ｄｏｘｙｌ标记线粒体膜，研究脂质过氧化损伤后膜流动性的变化。结果褪黑素对羟自由基和脂类自由基有良好的清除作用，５０％清除浓度分别为１８６μｍｏｌ·Ｌ－１和４５０μｍｏｌ·Ｌ－１，而且在５００μｍｏｌ·Ｌ－１浓度范围内能防止脂质过氧化引起的线粒体膜流动性降低。结论褪黑素是一个有效的抗氧化剂，能防止生物膜的脂质过氧化损伤。

黄曲霉毒素B_1对肉鸡肝线粒体自由基代谢的影响

为观察黄曲霉毒素B1(AFTB1)对肉鸡肝线粒体自由基代谢的影响,并研究亚硒酸钠(Na2SeO3)与复方中药对AFTB1的颉颃效应。10日龄120只试验肉鸡随机分为4组,每组30只,分别为第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,第Ⅰ组为空白对照组;每天以0.2 mg/kg剂量给第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鸡灌胃投用AFTB11次,并在第Ⅲ组肉鸡基础日粮中添加2%复方中药,在第Ⅳ组肉鸡基础日粮中添加无机硒2 mg/kg(亚硒酸钠),试验期共28 d。并于处理后第17、24、31、38日龄时,检测肉鸡肝线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性、总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量变化。结果显示,第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鸡肝线粒体SOD、CAT活性及T-AOC均显著降低(P<0.05),线粒体MDA含量显著增高(P<0.05);当投用亚硒酸钠或复方中药后,与第Ⅱ组试验结果比较,第Ⅲ、Ⅳ组肉鸡肝线粒体SOD、CAT活性及T-AOC均显著增强,而线粒体MDA含量明显降低。试验结果表明,在肉鸡日粮中添加亚硒酸钠或复方中药,均能明显缓解AFTB1所致肉鸡肝线粒体抗氧化功能下降的影响,且亚硒酸钠的效果明显优于复方中药。

褪黑素对内毒素血症山羊肝线粒体自由基代谢的影响

为探讨褪黑素对内毒素血症山羊肝线粒体自由基代谢的影响,将48只山羊随机分为4组,生理盐水组(NS组)、内毒素组(LPS组,1 mg/kg)、褪黑素组(MT组,1 mg/kg)和褪黑素保护组(MT+LPS组),每组分别在处理后第3和6 h各宰杀6只羊,取肝组织,提取肝线粒体,检测肝线粒体中超氧化物歧化酶(T-SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性及丙二醛(MDA)含量的变化。结果显示,内毒素血症时山羊肝线粒体中抗氧化酶的SOD、GSH-Px、GR和CAT活性降低,T-AOC活力下降,MDA含量明显增加,而褪黑素保护组肝线粒体抗氧化酶活性普遍回升,MDA含量明显下降。提示,褪黑素能减轻内毒素血症山羊因脂质过氧化造成的肝线粒体损伤,保护肝线粒体功能。

红花黄色素对衰老模型小鼠肝线粒体膜磷脂影响的实验研究

目的 :探讨小鼠肝线粒体膜磷脂组成的随龄变化及红花黄色素对其的影响。方法 :采用HPLC法测定线粒体膜PC、PE、CL的含量 ,陈思峰法测定PLA2 活性。结果 :衰老模型组PC、PE、CL均明显降低 ;PLA2 活性随增龄而升高。SYP可升高衰老模型组PC、PE、CL含量 ;显著降低衰老模型组PLA2 活性。结论 :D -半乳糖模型出现拟衰老时线粒体膜磷脂改变特征 ,SYP可显著改善肝线粒体膜磷脂的组成。

“双固一通”电针法对老年阳虚证模型大鼠肝线粒体结构及ATP酶活性的影响

目的探讨"双固一通"电针法对老年阳虚证模型大鼠肝线粒体形态结构及ATP酶活性的影响。方法选用5月龄SD雄性大鼠40只,随机分为A组、B组、C组和D组,每组10只。A组为正常对照组,其余3组大鼠均皮下注射D-半乳糖40 d后再肌肉注射氢化可的松7 d制作老年阳虚证大鼠模型。C组采用"双固一通"电针法,电针关元、足三里、百会穴;D组采用电针中极、阴陵泉、印堂穴治疗。每星期治疗6次,共治疗4星期。治疗后以游泳力竭时间判定各组大鼠抗疲劳能力,并采用透射电镜观察肝线粒体结构、比色法检测各组大鼠肝组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果与A组比较,B组和D组大鼠平均游泳力竭时间明显缩短(均P<0.01),肝线粒体内外膜模糊不清,嵴变形、断裂或消失,肝线粒体出现肿胀等改变,Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均下降(P<0.01,P<0.05)。C组比B组游泳力竭时间明显延长(P<0.01),肝线粒体形态结构得到明显改善,Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均明显提高(P<0.01,P<0.05);D组与B组比较,大鼠平均游泳力竭时间缩短(P<0.05),肝粗面内质网有脱颗粒,肝Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性降低(P<0.05)。结论 "双固一通"电针法可改善老年阳虚证模型大鼠阳虚抗疲劳能力,改善肝线粒体超微结构,提高肝Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,促进肝脏能量代谢。

牛磺酸在大鼠缺血再灌注过程中对肝线粒体的保护作用

目的:观察缺血再灌注过程中线粒体的变化和牛磺酸的保护作用。方法:实验动物分为3组:假处理组(对照组),阻断组,阻断+牛磺酸组(保护组)。线粒体分离后测定呼吸功能、琥珀酸氧化酶、NADH氧化酶、细胞色素C氧化酶活性、MDA、GSH含量、钙、镁含量和游离钙的浓度。结果:肝缺血再灌注以后,线粒体呼吸功能和氧化磷酸化功能显著降低,引起线粒体脂质过氧化损伤,并可造成线粒体内GSH下降,使线粒体抗氧化系统活性下降;同时可引起线粒体内钙积聚、游离钙浓度明显升高以及镁的丢失。这些结果说明线粒体能量代谢障碍是缺血再灌注损伤的始动环节,而氧自由基是造成损伤的主要因素。牛磺酸对缺血再灌注损伤过程中线粒体损伤的各个环节均起保护作用。结论;研究表明牛磺酸作为自由基清除剂在体内可能具有非常重要的生理学作用。

急性重复缺氧对小鼠肝线粒体和微粒体中丙二醛含量的影响

急性重复缺氧是一种多次急性缺氧复氧的过程。研究急性重复性缺氧对于临床医学、运动医学及航天医学均有理论和实际意义。近几年，对小鼠在急性重复性缺氧过程中脑组织Ｃａ２＋ＡＴＰ酶、游离脂肪酶（ＦＦＡ）、磷脂的含量变化已有很多研究报道［１～４］。丙二醛（Ｍ...

辅酶Q_(10)补充对青少年运动员肝线粒体功能和有氧运动能力的影响

目的:观察CoQ10补充对青少年运动员肝线粒体功能和有氧运动能力的影响。方法:18名进行耐力训练的男性青少年游泳运动员单盲随机分为Q组及P组,分别补充CoQ10100mg/d或安慰剂28d。结果:①补充后Q组血浆CoQ10浓度显著增高,且显著高于P组;②补充后Q组安静状态的血浆MDA水平无显著改变,且显著低于P组;③首次恒定负荷运动后总体血浆CoQ10浓度较安静状态显著降低;④总体血浆CoQ10基础浓度与首次递增负荷运动中测定的V.O2max显著正相关;⑤补充前后在1h耐力运动中动脉血酮体比的改变程度Q组与P组无组间差异;⑥Q组与P组.VO2max、个体乳酸阈和运动节省化的改变程度无组间差异。结论:尽管急性耐力运动中机体对CoQ10的需求增加,CoQ10补充也可降低血浆脂质过氧化水平,外源性CoQ10不能改善青少年运动员的肝线粒体功能和有氧运动能力。

解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠肝线粒体的保护作用

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠肝线粒体的保护作用,并从抗脂质过氧化探讨其作用机制。方法:采用皮下注射硫代乙酰胺(TAA)法复制暴发性肝衰竭大鼠模型,SPF级Wistar大鼠84只,随机分为空白组,模型组,解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组,安宫牛黄丸组,乳果糖组。造模前3天开始灌胃给药,2次/天,间隔12h,共给药5天12h;测定各组大鼠肝线粒的肿胀度、肝脏坏死面积及肝线粒体内MDA、SOD、GSH、NO。结果:模型组肝线粒体对外源性钙离子引发肿胀的敏感性下降、肝细胞大量坏死,肝线粒体内MDA含量急剧升高,SOD活性及GSH、NO含量显著下降,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);解毒化瘀Ⅱ方各组能提高肝线粒体对外源性钙离子引发肿胀的敏感性、减少肝脏坏死面积,抑制肝线粒体内脂质过氧化物MDA的生成,恢复SOD的活力及GSH、NO含量,并呈现量效关系。结论:在暴发性肝衰竭致病过程中,肝线粒体内的NO主要起保护性作用;解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭肝线粒体具有较强的保护作用,可能是通过拮抗脂质过氧化来实现。

谷胱甘肽对铜孵育的肉鸡肝线粒体膜电势及膜通透性的保护作用

线粒体是细胞内主要的能量形成场所,也是各种损伤最为敏感的细胞器之一,所以无论在生理上或病理上都具有十分重要的意义。大量的研究表明,细胞凋亡的最早期阶段在细胞核病理改变出现之前,线粒体膜电位就已下降,膜电位消失亦是线粒体损伤的一个重要标志。线粒体跨膜电位一旦崩溃,则细胞凋亡不可逆转;线粒体膜内外的各种物质进出线粒体的通道被称之为线粒体膜通透性转变孔（mitochondrialpermeability transition pore,MPTP）,是线粒体内外信息交流的中心枢纽,其开放状态指示着线粒体正常功能的发挥与否;

大豆异黄酮对去卵巢大鼠肝线粒体的抗氧化作用

目的:探讨大豆异黄酮(soybean isoflavones,SI)对去卵巢大鼠肝线粒体抗氧化能力的影响。方法:3月龄SD雌性大鼠随机分为3组,每组10只,假手术对照组和模型组给予去离子水,干预组给予SI提取物,灌胃。于第13w末处死大鼠,电镜观察肝线粒体形态结构变化,氧电极法测定肝线粒体呼吸功能,并测定肝线粒体、胞浆及肝组织匀浆MDA的含量,肝组织匀浆GSH-Px活性。结果:与对照组比较,模型组和干预组大鼠肝线粒体结构和抗氧化功能均有显著下降,与模型组比较,干预组肝线粒体结构较完整,肝线粒体琥珀酸和NADH氧化呼吸链Ⅳ态呼吸速度(R4)显著下降,呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)和氧化磷酸化效率(OPR)有明显增加;干预组肝脏线粒体、胞浆及肝组织匀浆MDA含量明显下降或有下降趋势;干预组肝组织匀浆GSH-Px活性明显增强。结论:大豆异黄酮能够提高去卵巢大鼠肝组织的抗氧化能力。