两种肝组织匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的比较

背景:前期研究证明正常大鼠肝组织匀浆上清液可诱导人脐带间充质干细胞定向分化为具有部分肝细胞功能的肝样细胞,而肝纤维化大鼠肝组织匀浆上清液的诱导可行性及与前者诱导效果的比较尚不明确。目的:比较正常肝组织及纤维化肝组织微环境诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的能力。方法:采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理盐水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)的方法制备SD大鼠肝纤维化模型,取肝纤维化大鼠及正常大鼠肝脏制备肝组织匀浆上清。将第3代人脐带间充质干细胞进行分组诱导培养:1标准对照组:加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。2纤维化肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及50 g/L纤维化肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。3正常肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及100 g/L正常肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。诱导开始后于倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化;取标准对照组及诱导7 d的匀浆组细胞采用Western Blot法检测CK18、AFP、CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2的表达情况,采用ELISA法测定各组细胞培养液中白蛋白水平。结果与结论:与标准对照组长梭形成纤维样细胞相比,诱导7 d时,肝纤维化匀浆组及正常匀浆组细胞形态变化明显,呈类圆形,胞体丰满。与标准对照组相比,两匀浆组细胞均可表达肝细胞标志物CK18和AFP。标准对照组细胞可表达少量CYP2E1,两匀浆组细胞表达CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2等肝细胞功能蛋白,且CYP2E1的表达量较标准对照组明显增加(P<0.01),而两匀浆组间上述蛋白的相对表达量差异无显著性意义(P>0.05)。同时,两匀浆组细胞分泌白蛋白的能力较标准对照组亦明显增强(P<0.01),两匀浆组相比差异无显著性意义(P>0.05)。实验结果显示正常肝组织和纤维化肝组织微环境均可诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化,在达到相同诱导效果时,纤维化肝组织所需组织液浓度更低,提示纤维化肝组织微环境可能更有利于人脐带间充质干细胞向肝细胞分化。

肝匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞分化为肝样细胞

背景:前期实验证明大鼠肝组织匀浆上清液能诱导人脐带间充质干细胞发生形态学变化,但诱导后细胞是否具有肝细胞的表型和功能特征尚不清楚。目的:以人脐带间充质干细胞为研究对象,对肝组织匀浆上清液定向诱导分化后细胞是否具有肝细胞的表型和功能特性进行初步验证。方法:选取第3代人脐带间充质干细胞,采用肝组织匀浆上清液作为诱导培养基,进行如下分组:单纯肝组织匀浆上清液作为阴性对照组,QSG-7701人肝细胞株作为阳性对照组,基础培养的人脐带间充质干细胞作为标准对照组;肝组织匀浆上清液处理3,5,7 d诱导组;在蛋白水平和转录水平对肝细胞特异性标志物甲胎蛋白、角蛋白18和色氨酸2,3-加双氧酶进行检测。结果与结论:经肝组织匀浆上清液诱导后,细胞形态发生了显著变化,随诱导时间延长梭形干细胞逐渐减少,细胞呈三角形,多角形或不规则形。肝组织匀浆上清液诱导干细胞3,5,7 d后肝细胞标志物甲胎蛋白、人细胞角蛋白18和色氨酸2,3-加双氧酶在蛋白和mRNA水平均显著高于标准对照组(P<0.01)。实验结果提示在体外经肝组织匀浆上清液诱导后,人脐带间充质干细胞能够分化为具有肝细胞特异性标记的肝样细胞,并具有部分肝细胞功能。

体外诱导人脐带间充质干细胞定向分化为肝细胞的研究

目的对肝组织勻浆上清液（LHS）体外诱导人脐带间充质干细胞（hUCMSC）定向分化为肝细胞的功能特性进行检测.方法选取第3代hUCMSC,采用LHS作为诱导培养基,实验分为对照组和LHS处理诱导组,每组有3、5、7d三个时间点;诱导后对细胞进行AFP、CK18、TPH2、CYP3A4、Alb、HGF的免疫荧光细胞化学染色;并测定诱导前后CYP3A酶活性、Alb、HGF和尿素的分泌量.结果LHS诱导3d后细胞表达肝特异性蛋白AFP、CK18、TPH2、CYP3A4、Alb和HGF;对照组hUCMSC不同时间点CYP3A酶特异性代谢底物咪达唑仑的代谢量为0.026-0.030ng/mg,LHS诱导3、5和7d后细胞代谢量分别为（30.14±1.19）、（50.20±6.24）和（120.85±15.52）ng/mg,与对照组相比显著升高（P〈0.01）;对照组细胞3、5和7dHGF的分泌量分别为（0.24±0.14）、（0.42±0.20）和（0.18±0.15）ng/mg,LHS诱导后细胞HGF的分泌量分别为（4.06±1.35）、（3.35±0.17）和（3.83±0.42）ng/mg,与对照组相比显著升高（P〈0.01）;LHS诱导后各组细胞尿素分泌量增加14倍以上,与对照组相比显著升高（P〈0.01）;对照组3、5和7dAlb的分泌量分别为（22.66±2.99）、（16.99±2.90）和（15.37±1.86）ng/mg,诱导3、5和7d后Alb的分泌量分别为（36.40±3.53）、（46.66±2.50）和（54.82±4.28）ng/mg,与对照组相比显著升高（P〈0.05或P〈0.01）.结论在体外经LHS诱导后,hUCMSC能够分化为具有成熟肝细胞功能的肝细胞.