高淋巴系统转移能力小鼠肝癌细胞株差异表达基因的筛选

目的 筛选高淋巴系统转移能力小鼠肝癌细胞株差异性表达基因。方法 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术 ,构建高淋巴系统转移能力小鼠肝癌细胞株Hca F及其同源低转移细胞系Hca P的cDNA消减杂交文库 ,筛选阳性克隆进行测序 ,并在GenBank数据库中进行同源性比较。结果 成功克隆 10个差异基因片段 ,其中 2个为新基因。结论 SSH技术是克隆差异表达基因及发现新基因的有效方法。

两种不同方式介导IL-12真核表达载体抑制肝移植瘤生长的研究

目的 :比较两种不同方式介导IL 12真核表达载体抑制肝移植瘤生长的效果。方法 :利用鼠肝癌细胞系H2 2建立肝移植瘤模型 ,以脂质体介导IL 12质粒腹腔注射或直接瘤内注射给荷瘤鼠 ,每周 1次 ,共 2次。治疗后每周两次测量瘤体大小 ,取血利用ELISA法检测血清中IL 12及IL 2的含量变化 ;MTT法检测NK细胞杀伤活性。结果 :直接瘤内注射组瘤体积明显小于腹腔注射组 (P <0 .0 5 ) ,直接瘤内注射组血清IL 12、IL 2浓度有明显的周期变化 ,但二者NK细胞杀伤率无明显差异。结论 :脂质体介导直接瘤内注射IL 12真核表达载体可有效抑制肝移植瘤的生长。

腺病毒介导Tum5重组基因对高糖刺激下恒河猴视网膜血管内皮细胞增生、迁移及管腔形成的影响

目的观察腺病毒介导Turn5重组基因对高糖刺激下恒河猴视网膜血管内皮细胞（RF／6A细胞）增生、迁移及管腔形成的影响。方法构建空载体病毒rAd-绿色荧光蛋白（GFP）和携带Tum5基因的重组腺病毒表达载体（rAd—Tum5）。分别感染RF／6A细胞，流式细胞仪检测感染效率。细胞感染48h后，采用蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测Tum5重组基因体外表达。将RF／6A细胞分为正常对照组、高糖刺激对照组（HG组），空载体对照组（HG＋rAd—GFP组），Tum5基因组（HG＋rAd—Tum5组）。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）、侵袭小室（Transwell）实验及基质胶（Matrigel）实验分析Tum5重组基因对高糖刺激下RF／6A细胞增生、迁移及管腔形成的影响。结果流式细胞仪检测结果显示，tAd—GFP、rA＆Tum5感染细胞的效率分别为55．13％、50．31％。Westernblot检测结果显示，HG＋rA＆Tum5组在相对分子质量14×10^3左右处可见Tum5蛋白表达条带；正常对照组、HG组、HG＋rAd—GFP组均未见Tum5蛋白表达条带。CCK-8、Transwell实验及Matrigel实验结果显示，正常组、HG组、HG＋rAd-GFP组、HG＋rAd-Tum5组4组间细胞增生数量、迁移数量及成形管腔数量比较，差异均有统计学意义（F-44．484、772．666、137．696，P（0．05）。组间细胞增生数量、迁移数量及成形管腔数量两两比较结果显示，HG组较正常对照组增加，差异有统计学意义（P〈0．05）；HG组与HG＋rAd—Tum5组之间无明显差异（P〉0．05）；HG＋rAd—Tum5组较HG组、HG＋rAd—GFP组明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论腺病毒介导Tum5重组基因可抑制高糖刺激下RF／6A细胞的增生、迁移及管腔形成。