咖啡因清除试验检测肝细胞代谢功能的临床意义及评价

目的 :评价唾液咖啡因清除试验检测肝细胞代谢功能的临床应用价值。方法 :用反相高效液相色谱测定 86例正常成人 ,86例各类肝病患者唾液咖啡因清除率 (CACL) ,获得肝细胞代谢功能的定量指标。结果 :各型肝病组间CACL值差别显著 (P值 <0 0 5 )。按CACL值从小到大依次为 :活动性肝硬化 <慢性活动性肝炎 <静止期肝硬化 <慢性迁延性肝炎 ,但各组间的谷丙转氨酶无明显差别。提示CACL值与肝损害程度密切相关。此外 ,从追踪病例CACL值发现 ,无论肝功恢复与否 ,其CACL值提高者 ,预后良好。反之 ,即使肝功能恢复良好 ,若CACL值仍呈下降 ,其预后明显恶化。结论 :CACL值可作为定量肝损害程度 ,推测病情发展与转归重要指标。

唾液咖啡因清除试验检测肝细胞代谢功能正常值范围的研究及应用

目的：建立临床定量检测肝代谢功能的方法及指标。方法：用反相高效液相色谱测定259例正常成人、169例各类肝病患者、15例HBsAg“健康”携带者（HHC）、10例高血脂及12例饮酒者，共465例唾液咖啡因清除率（CL），以定量检测肝代谢功能．结果：正常人CL值呈正态分布（D检验，P＞0．2），故以正态分布法确定正常值。定CL值大于1．37ml／min／kg（－2s）为正常值范围。其诊断肝病的敏感性为85％（143／169），特异性为98％（4／209）．另外可定患者CL值与正常人重叠部分，即1．37～1．86ml／min／kg（－2s～－s）为可疑范围。此外，发现肝病患者CL与肝功能的改变呈明显的伴随关系，但15例HHC、15例脂肪肝、10例高血脂及12例饮酒者肝功能未见异常，而CL值仍低于正常值或在可疑范围内．结论：CL值有早期诊断及预后价值。19例静止期肝硬化（CR）患者，肝功能正常，无明确肝病史，于腹部其他手术时作肝活检而确诊，作CL检测提示CL值能反映肝损害程度的敏感性高于目前常规肝功能试验，有潜在诊断CR的价值。

多参数系统生物传感器Neurotrend-7监测移植早期肝细胞的代谢

背景:目前,各种监测设备已经用于移植肝的早期监测,但没有一种方法能够持续不断的监测移植肝细胞的代谢变化来反映移植肝内部环境的变化情况。目的:探讨应用多参数系统生物传感器Neurotrend-7持续监测肝细胞代谢,为早期发现移植后肝脏功能不良提供依据。方法:健康成年雄性日本大耳白兔24只分为3组,对照组(n=4):开腹仅行肝组织埋入氧代谢监测传感器及标本取材后关腹。两个实验组完成兔肝移植后肝内置入多参数监测仪传感器探针,实验1组(n=10)供肝保存时间<2h;实验2组(n=4)供肝保存时间>4h。移植前及移植后1,3,5d连续监测肝组织的pH、氧分压、二氧化碳分压变化并测量动脉血PaO2、PaCO2、动脉血气pH值。同时,切取同位点的肝组织行光镜和电镜检查。结果与结论:实验2组肝组织氧分压显著低于实验1组(P<0.05),且随时间逐渐下降;肝组织二氧化碳分压各时段高于实验1组(P<0.05),并且随时间逐渐增高;肝组织pH值较实验1组各时间段更低(P<0.05),提示肝功能严重不良或移植肝无功能。肝组织氧分压与动脉血PaO2呈正相关,肝组织二氧化碳分压与动脉血PaCO2无明显相关性;肝组织pH与动脉血气pH值也无明显相关性。变化与组织学检查相似。提示,多参数系统生物传感器Neurotrend-7可为早期发现移植后肝脏功能不良,观察其演变规律,指导临床早期预防和治疗,为其在肝脏外科和器官移植领域临床应用提供准确的数据支持。

氯胺酮对脓毒症大鼠肝细胞能量代谢的影响及其机制

目的:探讨氯胺酮对脓毒症大鼠肝线粒体的保护机制。方法:采用盲肠结扎穿孔(CLP)制作脓毒症模型,将大鼠随机分为假手术组(C组)、盐水组(NS组)、氯胺酮组(K组),模型制作12h开始分别给予盐水和氯胺酮,在给药前和给药4h后分别取静脉血,并在给药4h后制备肝线粒体和组织匀浆,分别采用Clark氧电极技术测定线粒体呼吸功能,ELISA法检测IL-1β和IL-6,分光光度法测定NO水平。结果:尽管K组的RCR和ADP/O明显低于C组,NO、给药前后IL-1β和IL-6水平明显皆高于C组;但与NS组比较,K组RCR和ADP/O升高,NO、给药4h后的IL-1β和IL-6水平降低。结论:氯胺酮能通过降低IL-1β和IL-6水平,减少肝组织NO的产生,保护线粒体呼吸功能。

细胞水化状态与肝细胞功能

众多的研究表明，肝细胞水化状态(hepatocellular hydration state)，即肝细胞容积，是控制肝细胞代谢和基因表达的重要机制和决定因索，也是一种动力学参数。在诸如激素、氧化应激(oxidative stress)等生理调节因索和营养供给、毒索等外界多种致病因子的影响下，肝细胞容积仅需几分钟就发生改变，这一变化作为一种触发信号，直接调节细胞代谢和基因的表达。

免疫磁珠分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^+lin^-

目的:利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-。方法:实验于2006-07/08在南方医科大学实验动物中心完成。6～8周龄的SPF级纯系BALB/C雄性小鼠10只,体质量18～20g。收集小鼠股骨骨髓细胞,利用免疫磁性细胞分选系统,通过两步法分选纯化c-Kit+lin-:将获取的lin-细胞悬液8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按80μL/107加入Buffer重悬细胞。按20μL/107加生物素抗体磁珠,混匀,4℃冰箱孵育15min,按1mL/107加入Buffer洗细胞1次,8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按500μL/108加入Buffer重悬细胞。Buffer500μL润MS柱,悬液过柱后,Buffer500μL/次洗柱3次,柱子脱离磁场,加1mLBuffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit+lin-细胞,收集到c-kit+lin-细胞,细胞计数。取2.0×106个细胞分成10等份,流式细胞仪分析c-Kit+lin-细胞纯度,计算回收率,评估纯化效率,苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力。计算活细胞的百分率。细胞纯度和细胞回收率的计算:细胞纯度=分离产物中的阳性细胞数/分离细胞的总细胞数×100%,细胞回收率=分离产物中的阳性细胞数/起始标本阳性细胞总数×100%。结果:10只小鼠均进入结果分析。利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-细胞纯度和回收率分别为(77.98±2.34)%,75.40%,纯化前后细胞活力不受影响。结论:免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-,纯度和回收率高,且不影响细胞活力。

亚砷酸对人肝癌细胞凋亡及ERK-1蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸对人肝癌细胞BEL-7402凋亡及ERK-1蛋白表达的影响.方法通过体外细胞培养,用流式细胞术观察BEL-7402细胞周期及凋亡率变化;HE染色法、荧光显微镜观察细胞的凋亡形态变化;并用免疫组化法检测细胞ERK-1蛋白的表达.结果亚砷酸(1.0～8.0 μmol/L)能诱导BEL-7402细胞凋亡并阻滞细胞周期于S、G2/M期,呈剂量依赖性;亚砷酸(8.0 μmol/L)作用BEL-7402细胞48 h后, HE染色、荧光显微镜观察可见BEL-7402细胞呈现明显的凋亡形态改变;免疫组化法检测发现8.0 μmol/L的亚砷酸作用48 h 后BEL-7402细胞的ERK-1蛋白表达明显减弱. 结论亚砷酸体外有诱导人肝癌细胞凋亡及降低ERK-1蛋白表达的作用.

肝细胞癌组织上皮性钙黏蛋白表达及其临床意义的研究

目的:研究上皮性钙黏蛋白(E-Cad-herin)在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况,探讨其与肝癌侵袭转移的关系。方法:选择56例有完整随访资料的HCC及相应癌旁组织标本、20例正常肝组织标本,用RT-PCR方法检测E-Cadherin mRNA的表达。结果:E-Cadherin在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织和正常组织,P分别为0.016和0.003,而在癌旁组织和正常组织中的表达差异无统计学意义,P分别为0.076和0.082;E-Cadherin在肝癌组织中的表达与术后复发时间呈正相关,R2=0.887,P<0.05,与病理分级呈负相关,R2=0.823,P<0.05;癌组织中E-Cadherin表达与肝外转移呈负相关,R2=0.839,P<0.05。结论:E-Cadherin表达与肝癌的分化程度,侵袭转移能力,复发倾向相关,通过检测E-Cadherin表达将对肝癌临床转归的评估有一定指导意义。

Cx43基因修饰对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨Cx43基因对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、细胞周期及细胞迁移等方面的作用。方法采用LipofectamineTM2000转染的方法将重组表达质粒p Bud CE4.1-Cx43转染人肝癌SMMC-7721细胞(实验组),对照组细胞仅转染空载质粒p Bud CE4.1,空白组为未转染的SMMC-7721细胞。通过RT-PCR、Western blot检测转染后Cx43的mRNA和蛋白的表达情况,划痕荷载染料传输实验检测细胞间通讯功能,流式细胞仪检测细胞周期并通过CCK-8增殖实验、细胞划痕损伤实验、小室侵袭实验评价转染Cx43基因对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。结果实验组Cx43 mRNA和蛋白表达高于对照组和空白组,差异有统计学意义(均P<0.05)。实验组细胞传递的荧光强度高于对照组和空白组(P<0.05),实验组细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少(P<0.05)。实验组与对照组和空白组比较,SMMC-7721细胞的增殖受到抑制(P<0.05),尤以72小时为著。实验组迁移能力下降,细胞侵袭能力下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论转染Cx43基因能够抑制人肝癌SMMC-7721细胞迁移的能力,并可以抑制肿瘤细胞增殖。

survivin与HIF-1α在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨凋亡抑制蛋白生存素(survivin)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人肝细胞癌组织中的表达及相关性,分析其与肝细胞癌转移复发的关系。方法应用免疫组化S-P法检测80例肝细胞癌组织和癌旁组织中survivivn和HIF-1α蛋白的表达情况。结果80例肝细胞癌组织中survivivn和HIF-1α蛋白表达的阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05),两者的表达与门脉癌栓、术后复发、肝外转移、肿瘤大小、肿瘤分化程度表达密切相关,HIF-1α的表达还与临床分期有关(P<0.05)。survivivn和HIF-1α的表达有显著相关性(r=0.349,P=0.001)。结论survivivn和HIF-1α与肝细胞癌侵袭转移的发生有密切关系。

IGF-1、HIF-1a在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学SABC法检测54例HCC及14例正常肝组织中IGF-1和HIF-1α的表达情况,研究其与HCC生物学行为的关系。结果:54例HCC中IGF-1、HIF-1α的表达均较正常肝组织高,差异具有显著性(χ2=9.112,13.369;P<0.05)。HCC中IGF-1与HIF-1α的表达呈正相关(rs=0.539,P<0.05)。HIF-1α的表达与肿瘤的侵袭转移密切相关(P<0.05),IGF-1在AFP≥400μg/ml的HCC组织中表达明显高于AFP<400μg/ml者,差异具有显著性(P<0.05)。结论:HCC中IGF-1和HIF-1α表达反映HCC的生物学行为,可作为预测肝癌浸润转移的一项重要指标。

OPN和uPA mRNA在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)mRNA及尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)mRNA在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法:应用RT-PCR方法检测60例HCC癌组织、20例正常对照肝组织中OPN和uPA mRNA的相对表达量。结果:HCC癌组织中OPN和uPA mRNA的阳性表达率均分别高于对照正常肝组织(P均<0.05);癌组织中OPN mRNA的表达量在有门静脉癌栓形成组及在有早期复发转移组均高于无门静脉癌栓形成组和无早期复发转移组(分别P<0.05和P<0.01),uPA mRNA的表达水平在有包膜浸润和有门静脉癌栓形成组中均高于无包膜浸润和无门静脉癌栓形成组(分别P<0.05和P<0.01);OPN mRNA的高表达和uPA mRNA的高表达呈正相关(P<0.05)。结论:HCC癌组织中OPN的表达水平可以作为判断肝癌细胞转移能力和预示肝癌早期复发的重要指标。阻断OPN的表达可能可以降低uPA的分泌,从而减少肿瘤的浸润和转移。

胰升血糖素样肽-1对肝切除后肝细胞胞浆游离钙影响的实验研究

目的探讨胰升血糖素样肽-1(GLP-1)对肝切除后肝细胞胞浆游离钙的影响。方法将大鼠随机分2组,A组不切肝,B组切肝65%。于术后第1,3,5天收集血标本5mL测定血糖、GLP-1、胰岛素(In)和胰升血糖素(G1)。同时用酶法分离制备肝细胞悬液。以Fura-2/AM荧光指示剂,用荧光分光光度仪检测肝切除后肝细胞的荧光强度及GLP-1对荧光强度的影响。结果B组肝切除术后血糖明显增高(P<0.05),血浆GLP-1也明显高于A组(P<0.001),尤以术后第1天更显著;In则明显下降(P<0.001),而G1手术后升高,但差异无显著性(P>0.05),术后In/GL值明显下降(P<0.05)。所测正常肝细胞[Ca2+]i为(707.46±122.59)nmol/L,肝切除术后第1,3,5天肝细胞[Ca2+]i较正常肝细胞略降低(P>0.05);加入GLP-1后肝细胞[Ca2+]i略有升高(P>0.05)。结论大鼠肝切除术后存在明显胰岛素抵抗,主要系因胰岛素水平明显下降,致In/G1值也明显降低的结果;GLP-1的拟胰岛素作用并非通过增加肝细胞[Ca2+]in而实现的。

亚砷酸对人肝癌细胞生长增殖及分化的影响

目的探讨亚砷酸对人肝癌细胞BEL-7402增殖、分化的作用.方法通过体外细胞培养,用四氮唑盐(MTT)比色法观察细胞生长曲线的变化,台盼蓝拒染法观察细胞群体倍增时间(TD)的改变,并分别用自动化学发光法、生化法检测亚砷酸对细胞甲胎蛋白(AFP)合成及谷氨酰转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,用苏木精-伊红(HE)染色法及透射电镜观察细胞的分化形态特点.结果亚砷酸(1.0～8.0 μmol/L)能抑制BEL-7402细胞生长增殖,呈剂量、时间依赖性.亚砷酸(8.0 μmol/L)对BEL-7402细胞AFP合成及GGT、LDH活性有显著的抑制作用,HE染色及透射电镜观察可见部分细胞呈现分化的形态改变.结论亚砷酸体外能够抑制人肝癌细胞生长增殖,并具有一定的诱导分化作用.

2型糖尿病相关因素与血清肝细胞生长因子水平关系探讨

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清肝细胞生长因子(HGF)变化状况和其血脂状况、血糖代谢控制状况、血压(BP)的高低、体重指数(BMI)的大小关系。方法:采用ELISA双抗体夹心法来测定T2DM患者60例及和血清健康者40例HGF水平进行比较,并且进行腰围、臀围、体质量的常规测定,同时又对空腹血糖、高密度脂蛋白胆固醇、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、甘油三酯、尿酸和尿微量白蛋白与肌酐比值(Alb/Cr)进行测定。结果:2型糖尿病患者血清HGF水平明显高于对照组(P<0.01);明显高于有血管病变的2型糖尿病患者血清肝细胞生长因子水平比较无血管病变的2型糖尿病患者显著增高(P<0.05);糖化血红蛋白、空腹血糖、收缩压、低密度脂蛋白胆固醇和血清HGF水平之间的是呈正比关系(即r=0.53,r=0.54,r=0.58,r=0.72,P值均<0.01);而高密度脂蛋白胆固醇和HGF水平之间是负相关(对应的系数为r=-0.53,P<0.01)。结论:T2DM患者血清HGF增高,血管病变的T2DM者增高更为显著;糖尿病血管病变严重程度完全可以用血清肝细胞生长因子作为指标来反映,同时血压、血糖、血脂等是影响血清肝细胞生长因子水平的重要因素。

溶酶体相关膜蛋白3过表达促进肝细胞脂质沉积

目的探讨溶酶体相关膜蛋白3(lysosome associated membrane protein 3,LAMP3)对肝细胞脂质代谢的作用。方法以肝癌细胞系Huh7为研究对象,利用qRT-PCR及Western blot法检测游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)0.4 mmol/L处理后肝细胞LAMP3表达变化;过表达LAMP3后,分别使用油红染色及甘油三酯检测试剂盒检测肝细胞内脂滴及甘油三酯沉积情况;采用ATP及β-羟基丁酸检测试剂盒检测细胞内ATP及β-羟基丁酸含量变化;过表达LAMP3,使用qRT-PCR、Western blot法检测脂质合成相关基因PPARγ与SCD-1及脂质分解相关基因CPT1A与PGC-1α表达变化。结果 FFAs处理后肝细胞Huh7中LAMP3表达显著上调(P<0.05);过表达LAMP3可显著促进肝细胞内脂滴和甘油三酯的沉积(P<0.05);过表达LAMP3对肝细胞内ATP及β-羟基丁酸含量的影响差异无统计学意义(P>0.05);过表达LAMP3可促进PPARγ及SCD-1表达(P<0.05),但对CPT1A、PGC-1α表达的影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LAMP3可通过调控脂肪合成促进肝细胞内脂质沉积。

血清总胆汁酸测定在肝脏疾病中的临床意义

胆汁酸是人体内的一种内源性有机阴离子,是胆固醇经肝细胞代谢的最终产物,为胆汁中的主要成分,经胆汁排入小肠,并进行肠肝循环。当肝细胞损伤、胆道梗阻及小肠疾病时,均可以引起胆汁酸的代谢紊乱。

酒精和肝微循环

乙醇主要在肝细胞代谢，酒精性肝损伤以中央静脉处显著，组织的低氧血症在酒精性肝损伤发生机制中的作用已受到重视。

乙醛蛋白加合物在酒精性肝病中的致病作用

酒精性肝病(ALD)的发病机制相当复杂.近年来对乙醛蛋白加合物(Acetaldehyde-Protein Adduct,APA)的深入研究表明,乙醛蛋白加合物不仅可作为直接毒物,而且可作为抗原诱生免疫反应,产生相应抗体,引起肝细胞炎症、坏死及纤维组织增生.