肝特异性对比剂MR扫描联合异常糖链糖蛋白、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体L3检测在乙肝相关性肝细胞癌诊断中的应用价值

目的探讨肝特异性对比剂MR扫描联合异常糖链糖蛋白(TAP)、甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体L3(AFP-L3)检测在乙肝相关性肝细胞癌(HCC)诊断中的应用价值。方法将62例乙肝相关性HCC患者纳入HCC组,53例良性肝病患者纳入良性肝病组。检测两组的TAP、AFP和AFP-L3,计算AFP-L3/AFP(AFP-L3%);对患者行上腹部MR平扫及肝特异性对比剂增强扫描,分析两组的MR影像表现。绘制受试者工作特征(ROC)曲线并分别探讨MR扫描、TAP、AFP、AFP-L3%单独及联合检测对乙肝相关性HCC的诊断价值。结果HCC组的TAP、AFP及AFP-L3%显著高于良性肝病组,差异具有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,MR扫描、TAP、AFP、AFP-L3%单独及联合检测乙肝相关性HCC的曲线下面积(AUC)分别为0.904、0.742、0.772、0.826、0.931,联合检测的诊断效能最高。结论肝特异性对比剂MR扫描联合TAP、AFP、AFP-L3%检测对于乙肝相关性HCC的诊断具有重要的临床价值。

黄芪甲苷衍生物HHQ16上调α1酸性糖蛋白改善肝细胞脂质沉积

目的 研究黄芪甲苷衍生物HHQ 16对肝细胞脂质沉积的作用及机制。方法 在AML12肝细胞上用游离脂肪酸构建脂质沉积模型,检测细胞的甘油三酯和油红染色等反映肝细胞脂质沉积情况。通过实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测α1酸性糖蛋白(ORM)及其上游相关调控因子表达。通过siRNA技术对ORM1的表达进行干扰,确定ORM1是否介导HHQ16的作用。结果 HHQ16显著改善FFA导致的肝脂质沉积,同时HHQ16升高ORM表达,干扰主要亚型ORM1表达后HHQ16改善肝细胞脂质沉积作用被逆转。结论 HHQ16通过升高ORM改善肝细胞脂质沉积。

肝癌细胞膜上转铁蛋白受体和去唾液酸糖蛋白受体数量的变化

目的:研究肝癌细胞膜摄取转铁蛋白受体的变化。方法：采用免疫组化及配体受体结合法分别测定正常肝脏、肝癌组织及癌旁肝组织转铁蛋白受体及去唾液酸糖蛋白受体的含量。结果：肝癌组织中转铁蛋白受体的含量高于癌旁及正常肝组织，而去唾液酸糖蛋白受体却明显低于癌旁及正常肝组织。结论：该变化有利于肝癌细胞对转铁蛋白的有效提取，也增加了肝癌细胞对高度唾液酸化的转铁蛋白的相对特异性摄取。

肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体的流式细胞分析

建立肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体 (ASGPR)的流式细胞分析方法 (FCM ) ,对正常及损伤鼠肝细胞、肝癌细胞 (BEL 740 2 )表面的ASGPR作同步比较分析 .以异硫氰酸荧光素标记的新半乳糖白蛋白 (FITC NGA)为ASGPR的特异性配体 ,以培养的正常肝细胞 (L 0 2 )为靶细胞 ,建立肝细胞表面ASGPR的FCM .测定并计算正常及损伤鼠肝细胞 ,BEL 740 2细胞与同一浓度的FITC NGA同步反应后的平均荧光强度 (MIF)值 .FITC NGA与L 0 2细胞表面ASGPR趋近饱和结合的浓度为 0 4mg/L ,该浓度下正常及损伤鼠肝细胞 ,BEL 740 2细胞的MIF值分别为 2 2 8 7、 5 81、 1 13.该结合可以被至少 5 0倍于FITC NGA的NGA或10mmol/L的EDTA完全抑制 .FCM能够良好地揭示FITC NGA同ASGPR之间的受配体结合特性 .该方法证实BEL 740 2细胞表面几乎没有ASGPR ,损伤鼠肝细胞表面ASGPR的数量较正常鼠肝细胞显著减少 .

基于去唾液酸糖蛋白受体的循环肝癌细胞磁性分选检测法及其改良

目的:介绍一种肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)富集和检测系统,并对该系统进行改良,以提高循环肿瘤细胞的检出率.方法:去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是一种特异表达于肝实质细胞膜的跨膜蛋白.我们建立了一种基于ASGPR的磁性分选和Heppar1免疫鉴定的循环肝癌细胞富集和计数系统.首先以生物素化去唾液酸胎球蛋白作为配体与肝癌细胞结合,然后用抗生物素抗体磁珠进行间接磁性标记,从而磁性捕获循环肝癌细胞,接着用Heppar1进行免疫荧光染色鉴定,并对阳性细胞进行计数.文献报道和实际操作中发现,检测过程中采用肝素抗凝会引起细胞悬液中出现凝胶,影响细胞通过分离柱,降低分离效率.我们将部分步骤改用乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)替代肝素抗凝,采用Hep3B肝癌细胞掺入试验对两种方法回收情况进行比较.结果:部分步骤改用EDTA抗凝后,细胞悬液中未出现凝胶现象.细胞掺入试验显示,5mL健康志愿者外周血中分别掺入10、30、90、270和810个Hep3B细胞,在每个掺入水平,改良法Hep3B细胞的平均回收率均≥70%,回收效率明显增加(P<0.05).结论:基于ASGPR的循环肝癌细胞富集和计数系统是一种具有临床应用潜能的循环肝癌细胞检测方法.经改良后能够有效消除细胞悬液中凝胶形成的现象,肝癌细胞回收效率较原检测法明显提高.

血清肝细胞生长因子和富亮氨酸α2糖蛋白1水平与子痫前期及急性肾损伤的相关性分析

目的探讨血清肝细胞生长因子(HGF)、富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)水平与子痫前期及急性肾损伤(AKI)的相关性。方法选取延安大学附属医院2020年6月至2022年6月收治的110例子痫前期患者(PE组)和121例妊娠期高血压患者(GH组),另选择51例健康孕妇为对照组。记录受试者血清HGF、LRG1、血尿素氮、血肌酐水平及估算肾小球滤过率(eGFR)。根据是否发生AKI将子痫前期患者分为AKI组和非AKI组。采用Pearson相关性方法分析血清HGF、LRG1与肾功能指标的相关性,多因素Logistic回归模型分析子痫前期患者AKI的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HGF、LRG1对子痫前期患者发生AKI的预测价值。结果PE组和GH组血清LRG1、血尿素氮、血肌酐水平均高于对照组、且PE组均高于GH组,PE组和GH组血清HGF水平、eGFR均低于对照组、且PE组均低于GH组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。110例子痫前期患者中49例发生AKI(AKI组)、61例未发生AKI(非AKI组)。子痫前期患者血清HGF水平与血尿素氮、血肌酐呈负相关(r=-0.420,P<0.001;r=-0.398,P=0.001),与eGFR呈正相关(r=0.547,P<0.001);血清LRG1水平与血尿素氮、血肌酐呈正相关(r=0.416,P<0.001;r=0.502,P<0.001),与eGFR呈负相关(r=-0.685,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,重度子痫前期、LRG1是子痫前期患者发生AKI的独立危险因素(均P<0.05),HGF是独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,HGF、LRG1联合预测的曲线下面积大于二者单独预测(Z=4.339、4.942,均P<0.001)。结论子痫前期患者血清HGF水平降低、LRG1水平升高,低水平HGF和高水平LRG1与患者发生AKI有关。

去唾液酸糖蛋白受体2基因在肝细胞性肝癌中的表达及意义

目的检测去唾液酸糖蛋白受体2(asialoglycoprotein receptor 2,ASGR2)基因在肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平,探讨ASGR2在HCC发生、发展中的作用和意义。方法以RT-PCR法检测55例HCC患者、55例非肝癌的其他肿瘤患者和33例非肿瘤的其他疾病对照患者外周血液中ASGR2基因的表达水平,并分析其意义。结果肝癌组和非肝癌的其他肿瘤组患者血液中ASGR2基因阳性表达率分别为85.5%、65.5%,两组差异有统计学意义(P<0.05),肝癌组和非肿瘤的其他疾病对照组ASGR2基因阳性表达率分别为85.5%、78.8%,两组差异无统计学意义(P>0.05),ASGR2基因在3组患者外周血液中的表达水平有明显差异(P<0.05)。ASGR2基因的表达与HCC患者的性别、年龄、AFP、肝硬化、肿瘤家族史等临床病理特征均无统计学意义(P>0.05)。结论 ASGR2基因的表达水平可能与HCC发生、发展有关,检测ASGR2的水平有望作为HCC早期发病的预测指标。

去唾液酸糖蛋白受体介导的新型肝细胞靶向磁共振对比剂的体外实验研究

目的 :探讨去唾液酸糖蛋白受体(Asialoglycoprotein receptor,ASGPR)介导的新型肝细胞靶向磁共振对比剂(Fe-HSA-LA)对大鼠正常肝细胞(BRL 3A)的靶向性及利用MR检测的可行性。方法:制备Fe-HSA-LA,透射电镜(TEM)观测其表征,MR检测其T2弛豫率。采用CCK-8法检测Fe-HSA-LA的细胞毒性。以10μg Fe/mL和50μg Fe/mL浓度的Fe-HSA-LA和PEG-USPIO分别孵育BRL 3A细胞及Colon26细胞后普鲁士蓝染色,对细胞悬液进行MR T2加权成像及T2map成像,利用原子吸收光谱法(AAS)测定各组标记细胞的结合铁量。结果:Fe-HSA-LA和PEG-USPIO的Z-平均水合粒径分别为(53.38±17.07)nm和(16.57±4.18)nm,Zeta电位分别为(-23.3±9.10)mV和(2.57±0.83)mV,T2弛豫率分别为168.4 mM-1s-1和416.3 mM-1s-1。细胞毒性实验表明,Fe-HSA-LA浓度≤50μg Fe/mL时,BRL 3A细胞存活率达到95%以上。普鲁士蓝染色显示BRL 3A细胞结合的Fe-HSA-LA含量最高(P<0.05)。磁共振检测显示,当Fe-HSA-LA浓度≥3.125μg Fe/mL时,Fe-HSA-LA标记的BRL 3A细胞的信号降低最明显,细胞内的铁含量最高(P<0.05)。标记细胞R2值和细胞内铁含量之间具有良好的相关性。结论:Fe-HSA-LA对BRL 3A细胞具有靶向效应,可采用3.0T MR对其进行监测。

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白化学结构分析及对前成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响

目的:成熟的鲫鱼卵经提取、分离纯化得到唾液酸糖蛋白(sialyglycoproteins of Carassius auratus eggs,CA-SGP),分析其化学结构,及对前成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响。方法:采用水提法从成熟鲫鱼卵中提取水溶性蛋白,经阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱分离纯化鲫鱼卵水溶性蛋白得到CA-SGP,测定其基本组成,采用高效凝胶液相色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子质量和纯度,PMP柱前衍生高效液相色谱法测定其单糖组成;采用噻唑蓝法测定MC3T3-E1细胞的增殖率,酶联免疫法测定Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,COLⅠ)和骨钙素(osteocalcin,OCN)的分泌量及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性,茜素红染色法测定矿化结节的数量。结果:得到单一的组分CA-SGP,在高效凝胶过滤色谱色谱图上呈现单一的糖和蛋白的检测重叠峰,在凝胶电泳图上呈现单一弥散性条带,其蛋白质含量为14.33%,己糖含量为62.81%,N-乙酰神经氨酸(N-acetylneurainic acid,Neu5Ac)含量为19.72%。单糖组成测定结果显示:CA-SGP主要由甘露糖、葡萄糖胺、半乳糖胺组成,其物质的量比为7.61∶6.70∶1.00;MC3T3-E1细胞与CA-SGP共同孵育后,其增殖率显著增加,COLⅠ和OCN的分泌量分别增加了39.28%和83.06%,ALP活性提高了285.08%,矿化结节的数量增加了96.41%,说明CA-SGP显著促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化。结论:CA-SGP为富含Neu5Ac的糖蛋白,具有显著促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的作用,对开发抗骨质疏松功能性食品具有重要意义。

去唾液酸糖蛋白受体介导的肝脏靶向性研究进展

去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)又称半乳糖受体,主要表达于哺乳动物肝窦状隙的肝实质细胞表面,参与多种生理功能。多年来ASGPR一直被用于介导药物和基因的肝靶向递送以及肝脏成像等方面的研究,目前已取得许多进展。ASGPR介导的药物肝靶向递送研究主要集中在抗肿瘤药物、降胆固醇药物等。基因肝靶向递送多见于反义药物。肝脏成像研究包括评价肝脏功能、鉴别肝细胞肝癌和肿瘤肝转移灶等。近年来ASGPR的靶向性应用研究还进一步扩展到肝细胞立体培养、肝细胞筛选及肝细胞移植等领域。本文就这些内容作一综述。

无唾液酸胎球蛋白修饰脂质体在小鼠体内的肝实质细胞靶向性研究

目的 :研究经无唾液酸胎球蛋白 (asialofetuin ,AF)修饰后 ,脂质体达到小鼠肝实质细胞靶向的可能性。方法 :用放射性同位素标记的方法测定普通长循环脂质体 (stericallystabilizedliposomes,SSL)、AF 修饰普通脂质体(AF linkednormalliposomes,AF NL)及AF 修饰长循环脂质体 (AF linkedstericallystabilizedliposomes,AF SSL)在小鼠血、心、肝、脾、肺、肾等各器官及肝内不同细胞中的分布。结果 :SSL、AF NL及AF SSL的血中半衰期分别为14.44、4.73、11.49h ;整个肝中的分布AF NL >AF SSL >SSL ,经t化极差 q法检验 ,三者之间差异均存在显著性 ;肝不同细胞 (即实质与非实质细胞 )中脂质体的浓度均为AF NL >AF SSL >SSL(P <0 .0 5 ) ,但实质细胞与非实质细胞的浓度比为AF NL≈AF SSL SSL(P <0 .0 5 )。结论 :经AF修饰后 ,无论是否长循环 。

肝去唾液酸糖蛋白受体显像:三维分段肝功能评估的前景

去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)是哺乳动物肝细胞表面的特异性受体,肝硬化和肝癌时ASGPR水平下降。利用99mTcGSA进行该受体的显像,能够得到HH15、LHL15、[R]0、R0等指标用于肝功能的评估;将这种功能性显像与单光子发射型计算机断层显像(SPECT)技术相结合,可以模拟肝脏切除的范围,并预测术后剩余肝脏的功能。此技术在国际上是一个新的课题,在国内尚无开展,用它来数字化的评估手术风险对患者手术方式的选择及预后具有重要影响。笔者结合正在进行的这方面部分研究,向读者作一介绍,以期在临床上发挥更好的作用。

肝细胞癌唾液酸化的路易斯寡糖-X抗原和E-上皮钙粘蛋白的表达及其意义

探讨唾液酸化的路易斯寡糖 X抗原 (sialylLewis X ,SLeX)和E 上皮钙粘蛋白 (E cadherin ,ED)表达与肝细胞癌(HCC)转移和预后的关系。应用免疫组织化学方法 ,检测分析 110例HCC组织中SLeX及ED蛋白表达 ,结合随访资料分析。结果显示 ,在HCC中 ,SLeX和ED阳性表达率分别为 39 1%和 4 4 5 %。SLeX阳性表达的HCC转移率高(P <0 0 5 )、分化程度和患者 >5年生存率低 (P <0 0 5 ) ;ED阳性表达的HCC转移率低 (P <0 0 5 )、分化程度和患者>5年生存率高 (P <0 0 5 )。SLeX表达与ED表达呈负相关 (r =- 0 5 3,P <0 0 0 1)。SLeX和ED表达与HCC转移和患者生存期密切相关 。

肝细胞癌中唾液酸化的路易斯寡糖-X抗原和P16基因蛋白的表达及其意义

目的 :探讨唾液酸化的路易斯寡糖 X抗原 (sialylLewis X ,SLeX)和P16基因蛋白表达与肝细胞癌 (HCC)转移和预后的关系。方法 :应用免疫组织化学方法 ,检测分析 110例HCC组织中SLeX及P16蛋白表达 ,结合随访资料分析。结果 :在HCC中 ,SLeX和P16阳性表达率分别为 3 9.1%和 3 4.5 %。SLeX阳性表达的HCC转移率高 (P <0 .0 5 )、分化程度和患者 >5年生存率低 (P <0 .0 5 ) ;P16阳性表达的HCC转移率低 (P <0 .0 5 )、分化程度和患者 >5年生存率高 (P <0 .0 5 )。表达SLeX与P16表达呈负相关 (r =- 0 .5 6,P <0 .0 0 1)。结论 :SLeX和P16表达与HCC转移和患者生存期密切相关 。

非唾液酸糖蛋白受体显像在评估肝储备功能方面的应用价值

目的 探讨肝非唾液酸糖蛋白受体显像在评估肝储备功能方面的临床应用价值。方法 静注T 新半乳糖白蛋白行肝非唾液酸糖蛋白受体显像 ,利用标准核医学设备和计算机软件获得肝非唾液酸糖蛋白受体浓度ASGPR ,测定常用肝储备功能指标和吲哚绿 1 5min滞留率。结果 对照组和肝硬化肝功能Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级组 [ASGPR]分别为 0 780±0 1 6 3、0 576± 0 1 50、0 51 2± 0 1 2 4和 0 2 6 5± 0 1 58,除肝功能Ⅰ级和肝功能Ⅱ级组无显著性差异外 (P >0 0 5) ,其余各组间均存在显著性差异 (P <0 0 0 1 ) ;对照组和肝硬化组 [ASGPR]与凝血酶原时间 (% )、血清白蛋白血胆碱脂酶、吲哚青绿1 5min滞留率呈显著正相关 (均P <0 0 0 1 ) ,与血总胆红素呈负相关 (P =0 1 54 )。结论 肝非唾液酸糖蛋白受体显像是一种有推广价值的评估肝储备功能的新方法 。

去唾液酸糖蛋白受体在乙型肝炎病毒感染者精子中表达的初步研究

目的检测乙型肝炎病毒(HBV)感染者精子中去唾液酸糖蛋白受体(ASGP R)的表达,并与HBV阴性男性精子比较,探讨ASGP-R是否参与介导HBV侵入人精子。方法用ASGP-R单抗,通过免疫印迹(Western blot)和流式细胞术检测ASGP-R在乙肝表面抗原(+)/乙肝e抗原(+)[HBsAg(+)/HBeAg(+)]者(双阳性组,n=16)、HBsAg(+)/HBeAg(一)者(单阳性组,n=28)和HBsAg(一)者(阴性组,n=35)精子中表达差异。结果 ASGP-R于人精子的胞质中高表达,于胞膜低表达;胞质中ASGP-R水平在阴性组、单阳性组及双阳性组中逐渐升高,双阳性组和单阳性组的胞膜上ASGP-R的阳性率均高于阴性组(P均<0.05)。结论人精子胞膜和胞质中均存在ASGP-R;HBV可能通过人精子表面的ASGP-R进入精子,目HBV可能通过某种机制使ASGP-R的表达量增加。

去唾液酸糖蛋白受体介导的肝肿瘤靶向载药系统研究进展

去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是一种主要表达在肝窦状隙和基底外侧细胞表面的受体,它能专一性识别、结合并内吞末端具有半乳糖或乙酰氨基半乳糖残基的去唾液酸糖蛋白类物质。基于这一特性,ASGPR受体介导的肝肿瘤靶向治疗引起了研究者们的广泛关注。本文从糖基化前药、小分子纳米药物载体和糖基化基因复合物3个方面对近3年来该领域的最新研究进展进行综述。

去唾液酸糖蛋白受体及其在药物肝靶向递送中的应用

去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)是肝细胞特异性表达的受体,且是一种高效的内吞型受体,去唾液酸糖蛋白、半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺等糖分子对其有高亲和性.该综述回顾了ASGPR的发现历程、结构特征、生物学功能、表达模式、胞吞特点.总结了影响ASGPR与其配体亲和、介导胞吞的影响因素(包括配体类型、触角数量、空间距离与颗粒粒径).概述了早期ASGPR与其特异性配体在药物递送中的应用.最后介绍了最近利用N-乙酰半乳糖胺的缀合或修饰来实现肝靶向核酸药物递送的研究进展.

唾液酸化触珠蛋白对乙型肝炎相关肝细胞肝癌的辅助诊断价值

目的探讨唾液酸化触珠蛋白(Sia-Hp)对乙型肝炎相关肝细胞肝癌(HCC)的辅助诊断价值。方法选取乙型肝炎相关肝硬化患者236例,其中肝硬化伴HCC患者121例(HCC组)、肝硬化不伴HCC患者115例(肝硬化组),以107名健康体检者作为正常对照组。自建检测血清Sia-Hp水平的凝集素-酶联免疫吸附试验(Lectin-ELISA)方法。采用Spearman等级相关分析评估各项指标之间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价Sia-Hp、甲胎蛋白(AFP)诊断肝硬化合并HCC的效能。结果HCC组、正常对照组、肝硬化组血清Sia-Hp水平分别为1.76(1.32~2.22)、1.60(1.17~1.70)、0.85(0.11~1.56)AU/mL,3组之间依次降低(P<0.001)。Spearman等级相关分析结果显示,HCC组和肝硬化组Sia-Hp与AFP无相关性(r=0.09,P>0.05)。在HCC组中,血清Sia-Hp水平与TNM分期有关(P<0.05),与有无微血管侵犯(MVI)、肿瘤大小无关(P>0.05)。肝硬化组不同Child-pugh分级患者之间血清Sia-Hp水平差异均无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,Sia-Hp、AFP以及二者联合检测模型DIAHCC诊断肝硬化合并HCC的AUC分别为0.83、0.78、0.92,Sia-Hp和联合检测模型DIAHCC诊断AFP阴性(AFP<20μg/L)患者肝硬化合并HCC的AUC分别为0.84、0.88。结论血清Sia-Hp或可作为肝硬化合并HCC的辅助诊断指标之一。