水芹水提物在鸭原代肝细胞培养中对DHBV抑制作用的初步研究

目的：应用鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）体外肝细胞培养模型，研究中草药水芹（ＳＱ）抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的作用。方法：制取北京雏鸭原代肝细胞（５０万／ｍｌ／孔／２４孔板）于３７℃，ＣＯ２培养２４ｈ存活后，除对照组外，给药组每天换药１次，连续加药５ｄ并测定ＤＮＡ的含量。结果：①在肝细胞毒性实验中，ＳＱ对鸭肝细胞无毒性，半数有毒浓度（ＣＤ５０）大于１００００μｇ·ｍｌ－１。②在ＤＨＢＶ感染鸭的原代肝细胞培养中能够保护肝细胞，连续给药培养７ｄ，肝细胞的贴壁状态、形态和存活量均优于对照组。③对ＤＨＢＶＤＮＡ有明显的抑制作用，其抑制率（２５００μｇ·ｍｌ－１）为６４％，半数有效浓度（ＥＤ５０）为１１２０．８μｇ·ｍｌ－１，选择指数（ＳＩ）大于９。结论：实验结果提示，ＳＱ对ＤＨＢＶ有一定的抑制作用。

原代肝细胞培养技术研究现状及其新药研发中的应用

通过查阅近期有关文献,综述了国内外原代肝细胞分离、培养技术研究情况及其药代动力学与毒理学方面的应用。

原代肝细胞培养在药物代谢研究中的应用

新鲜分离和单层培养的肝细胞已应用于药理、毒理学研究的各个方面,尤其是人原代肝细胞培养成为评价细胞色素P450诱导与抑制的理想体外模型。本文介绍了原代肝细胞的分离。

高机能肝细胞培养支架--海藻酸/半乳糖化壳聚糖海绵体的开发

重症肝功能衰竭是导致死亡的主要疾病之一。目前,肝移植是其唯一有效的临床治疗手段,但供体不足及伦理等问题,使不能及时得到治疗而死亡的患者正在逐年增多,随着组织工程学的发展,人们都寄希望于生物型人工肝脏。笔者正在研究开发三维立体肝细胞培养支架材料,探索体外肝组织再构筑技术和方法,实现高效生物型人工肝脏。笔者研究根据半乳糖残基与肝实质细胞表面的脱唾液酸糖蛋白受体的特异性结合作用,利用半乳糖残基化学改性天然高分子多糖壳聚糖,改善壳聚糖的肝实质细胞亲和性,并制成三维多孔海藻酸／半乳糖化壳聚糖海绵体肝细胞培养支架。从培养细胞形态学和肝功能等生化学分析角度考察了用该支架培养肝实质细胞的聚集体形成及肝功能等。

复合胶原纳米粒子在猪肝细胞培养中的应用

目的:制备聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖(PLA-O-CMC)纳米材料和Ⅰ型胶原复合物进行猪肝细胞的体外培养。方法:用超声乳化法制备PLA-O-CMC纳米粒子,扫描电镜对其进行表征。采用Ⅳ型胶原酶原位循环灌流法分离猪肝细胞。将肝细胞分为:Ⅰ组(裸细胞培养组)、Ⅱ组(复合胶原纳米粒子细胞混合培养组)进行培养,观察肝细胞形态结构及功能变化。结果:PLA-0-CMC纳米粒子及Ⅰ型胶原为肝细胞的生长提供了良好的支架和外环境,体外肝细胞的生长也从平面型向三维型迈出了较大的一步。培养猪肝细胞能保持良好的活性和白蛋白分泌功能。结论:PLA-0-CMC纳米粒子及Ⅰ型胶原体为肝细胞生长的良好载体。

原代小鼠肝细胞培养方法的比较

目的:比较3种不同培养条件下原代小鼠肝细胞的形态以及肝细胞功能,寻找适合于原代小鼠肝细胞体外培养的培养基配方。方法:采用改良Seglen两步胶原酶灌注法分离原代小鼠肝细胞,糖原染色观察细胞纯度,在贴壁4 h后用基础培养基、基础培养基加DMSO(DMSO组)、基础培养基加DMSO和EGF(DMSO+EGF组)等3种不同的条件培养肝细胞。镜下观察肝细胞形态,用MTT法检测细胞活力,生化分析仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平以及用ELISA法检测细胞培养上清液中白蛋白水平。结果:成功分离小鼠原代肝细胞,肝细胞纯度达95%以上;原代肝细胞培养至96 h时,DMSO组仍能较好地维持细胞形态,基础培养基组的细胞活力比DMSO组和DMSO+EGF组分别降低了66.87%和67.16%(P<0.05),且基础培养基组的LDH水平均高于DMSO组和DMSO+EGF组(P<0.05)。此外DMSO组在96 h时仍能维持较高水平的白蛋白分泌,比基础培养基组和DMSO+EGF组分别增加了185%和24.2%(P<0.05)。结论:小鼠原代肝细胞培养基中加入DMSO对于维持肝细胞的形态和功能有促进作用,本研究为体外原代肝细胞培养模型的建立和优化提供了实用的方法。

可用于3D肝细胞培养的甘草次酸修饰海藻酸钠凝胶球的制备

制备了叔胺改性甘草次酸[GA-N(CH3)2]修饰的海藻酸钠[ALG-GA-N(CH3)2],并在温敏性琼脂糖的辅助作用下,利用微流体技术获得了高通量、单分散且粒径可控的ALG-GA-N(CH3)2微凝胶.考察了Span 80含量、疏水配体取代度、样品浓度和水/油相流速对微液滴制备的影响.研究结果表明,叔胺基改性可显著改善甘草次酸的亲水性;在Span 80质量分数为2.0%,疏水配体取代度小于12%,样品浓度小于15mg/m L,水相流速为1.5 m L/h,油相流速为6 m L/h条件下,可获得高通量、单分散及粒径为200μm的适用于细胞包封培养的微凝胶球.同时提供了一种三维培养肝细胞的新方法,为其在组织工程中的应用奠定了基础.

贯通多孔聚酯基PolyHIPE支架在肝细胞培养中的应用

以生物相容性好且可降解的端基双键化的聚(ε-己内酯)(PCL)或聚(4-甲基-ε-己内酯)(PMCL)为基体,通过乳化剂Hypermer T96制备高内相乳液(HIPE)。该乳液在紫外光引发下,通过后加入的季戊四醇四-3-巯基丙酸酯(PETMP)与碳碳双键化的PCL(PCL-AC)或者PMCL(PMCL-AC)发生巯基-烯点击反应而交联成聚高内相乳液(PolyHIPE),经冷冻干燥得到PolyHIPE三维多孔支架。采用扫描电子显微镜、差示扫描量热仪、万能材料试验仪对支架的微观形貌、热力学以及力学性能进行了表征。通过体外细胞毒性实验以及肝细胞培养实验对支架的生物学性能进行了评估。力学性能测试结果表明:在乳液制备过程中,去离子水温度对支架的力学性能影响更为显著。体外细胞毒性以及肝细胞培养结果表明:支架无细胞毒性,且支架的刚性越小越有利于肝细胞的增殖和功能表达。

三明治肝细胞培养模型及其在中药肝毒性评价中的应用

随着中药的广泛使用,安全性逐渐成为影响其临床应用的关键因素之一。肝脏作为机体主要的代谢场所,是药物毒性反应主要的靶器官之一,而使用高效、简便且可靠的体外模型对中药肝毒性进行评价和预警是当前毒理学研究的热点。三明治肝细胞培养模型能表达肝细胞血窦侧与胆管侧的转运体,形成功能性胆小管网络,并具有代谢能力,是研究药物肝胆转运和胆汁淤积的重要工具。对三明治肝细胞培养模型的特点、构建、影响因素及其在中药肝毒性评价中的应用进行综述,为中药肝毒性的评价方法研究提供参考。

鸭胚肝细胞培养的研究

取１５日龄左右的鸭胚肝脏，经清洗、剪碎后，加入最终浓度为０．１２５％的胰酶，３７℃消化１５～２０分钟，以含犊牛血清的１９９培养基为营养液，置含５％ＣＯ＿２培养箱内培养７２小时，可制成鸭胚肝细胞单层培养物，若向培养基中加入１０％的鸭胚尿囊液，能促进细胞的生长，接种鸭肝炎病毒后，感染细胞可在４８小时出现ＣＰＥ，９６小时形成空斑。

肝移植新方法：自体肝细胞培养再移植

据好医生网10月20日报道，人体肝脏移植在拯救生命的时候是带有一定风险性，因为机体存在排异的危险。但是科学家一种新的技术发明可以解决这一问题：将需要肝脏移植的病人自己的肝细胞培养后进行移植，这样就不存在免疫系统排斥的情况。

壳聚糖球形多孔微载体支持下人肝细胞L-02的高浓度细胞培养

背景:微载体培养技术作为一项体外高浓度细胞培养技术,近年来已在肝细胞的体外培养中得到应用。目的:对壳聚糖球形多孔微载体培养的人肝细胞L-02进行定时的形态学观察。方法:以自制的壳聚糖球形多孔微载体样本为支架来培养人肝细胞L-02设为实验组;无壳聚糖球形多孔微载体支持下人肝细胞的培养设为对照组。对两组细胞进行定时的细胞计数,并对实验组进行形态学观察,包括倒置相差生物显微镜观察和扫描电子显微镜观察。结果:两组培养的细胞数量均呈现前3d增长,在第3天细胞数量达到最高值;而且实验组3个样本培养的细胞数明显高于对照组无微载体培养的细胞数量(P<0.05),实验组各样本之间差异无显著性意义(P>0.05);倒置相差生物显微镜下动态观察,可见前3d微载体表面黏附生长的肝细胞则逐渐增多,第3天可见大部分微载体表面有许多肝细胞黏附成团,总的存活率均在90%以上,且肝细胞保持着良好的形态学结构;扫描电子显微镜观察,微载体表面、切面和内部均可看到有许多球状肝细胞紧密黏附。提示,以自制的壳聚糖球形多孔微载体作为一种支架,在体外三维环境下可以进行高浓度细胞培养。

用于生物人工肝的细胞培养及其应用

人工肝研究已发展到混合性生物人工肝阶段,其主要部分——培养有活性的肝细胞对生物人工肝发展起着决定性作用,本文就肝细胞培养方法及其在生物人工肝中的应用作一概述。

培养肝细胞在蛋白质组学研究中的应用

目的研究一种简便的肝细胞培养方法以培养出足够量的单一类型细胞,从而获得尽可能多的蛋白量进行细胞蛋白质组学分析。方法采用肝组织块贴壁法培养并传一代(目的是去组织块及其他间质细胞)。收集细胞蛋白并进行SDS-PAGE及双向凝胶电泳。结果本实验方法可获得高密度、高纯度、高活力的肝实质细胞,细胞裂解后得到的蛋白质电泳图谱效果好。结论实验方法操作简单、经济、高效,能够满足一般实验室进行细胞蛋白质组学分析。