原代肝细胞外泌体对肝星状细胞活化的影响

目的探讨原代肝细胞外泌体对肝星状细胞(HSC)活化的影响。方法在原位两步胶原酶灌流法的基础上,分别分离培养小鼠原代肝细胞及HSC,采用肝细胞糖原染色法和细胞角蛋白18(CK-18)细胞化学染色法鉴定原代肝细胞,采用α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)细胞免疫荧光染色法鉴定原代HSC;采用exoEasy Maxi Kit试剂盒提取肝细胞外泌体,用电镜法、纳米颗粒跟踪分析(NTA)及蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定肝细胞外泌体;将肝细胞外泌体与活化HSC共培养24 h,采用逆转录-实时定量PCR(qRT-PCR)法检测HSC中α-SMA及Ⅰ型胶原(COL 1 A 1)mRNA表达。结果原位两步胶原酶灌流法成功分离培养获得小鼠原代肝细胞及HSC,肝细胞糖原染色法及CK-18细胞化学染色法证实原代肝细胞纯度>95%,免疫荧光染色显示HSC的α-SMA阳性率>90%;exoEasy Maxi Kit试剂盒提取的肝细胞外泌体在电镜下呈圆形或椭圆形,NTA结果显示其直径约140 nm,Western blot实验可见外泌体标志物分化抗原9(CD9)和肿瘤易感基因101(TSG101)表达;与空白对照组比较,HSCs与肝细胞外泌体共培养后HSCs的α-SMA及COL 1 A 1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论成功提取原代肝细胞外泌体,该外泌体可抑制HSC活化。