肝干细胞与肝再生、肝癌的关系

肝干细胞是存在于肝脏组织中的一类具有自我更新和向前分化为成熟肝细胞、胆管细胞等的不成熟细胞,这类细胞是生理性肝细胞更新和病理性肝损伤修复的起源细胞.肝癌是人类常见的恶性肿瘤,传统认为肝癌起源于肝细胞突变和异常增生,新近研究提示,肝癌起源于肝干细胞的异常分化和增生.肝癌干细胞学说为肝癌发生机制研究和肝癌防治开辟了全新的思路.

新型分化培养基增强HepG2肝细胞功能的研究

目的探讨自行研发的肝细胞成熟培养基(Hepatic Maturation Medium,HMM)是否能够提高肝肿瘤细胞系HepG2的肝细胞功能,并联合3D培养开发一种更适于HepG2的培养体系。方法从细胞库中取得人类肝癌细胞株HepG2。分别用DMEM及HMM进行细胞的2D及3D培养,通过定量PCR、PAS染色、尿素合成等方法进行功能评价,最后在3D模型下比较DMEM及HMM培养的HepG2与氯丙嗪肝毒性的敏感性,综合评价HMM对HepG2的作用。结果HMM可以提高HepG2的糖原合成能力,并使其CYP3A4、NTCP、ALB、CPS1、G6PC等肝细胞功能基因的表达水平分别上调4.7±0.2、1.3±0.1、1.4±0.1、4.9±0.2、5.6±0.1倍。当HMM联合3D培养后,相对于2D培养HepG2,其CYP3A4、NTCP、CPS1、G6PC等肝细胞功能基因的表达水平及尿素合成能力进一步提高6.5±0.6、2.0±0.03、2.3±0.2、77±1.2、479±196倍。此外,HMM显著改善了3D环境下的HepG2对于氯丙嗪毒性的敏感性。结论不论是在2D还是3D条件下,HMM均可以改善HepG2的肝细胞功能,HMM联合3D培养将有利于HepG2为基础的研究。

肝干细胞的基础及应用研究

肝脏具有强大的再生能力．很早就有人提出肝千细胞存在的假说。1958年Wilson和Leduc在研究小鼠营养性肝损伤的修复机制中发现，增殖的毛细血管细胞（终末胆管细胞）具有干细胞样特性，可分化为肝细胞及胆管细胞，于是首次提出原始肝细胞的概念。这一研究提示肝内可能存在具有双向或多向分化潜能的肝干细胞或肝祖细胞。从定义上讲，肝干细胞应当具有无限增殖能力及多向分化潜能。体内有多种细胞符合肝千细胞的特征，如肝脏胚胎发育过程中出现的胎肝干细胞及成肝细胞、成年肝内存在的兼件肝干细胞及其子代细胞卵圆细胞、特定情况下的成熟肝细胞和骨髓／造血干细胞等。

间充质干细胞促进肝再生的研究进展

肝脏发源于胚胎内胚层,成体以后,肝脏修复、再生可通过3个途径完成：（1）通常肝组织成熟肝细胞经过有丝分裂,使肝脏体积和功能得到恢复;（2）当肝脏严重受损时,可激活卵圆细胞增殖、分化为肝细胞和胆管上皮细胞;（3）通过骨髓干细胞的参与,骨髓干细胞是肝细胞的重要肝外来源,在特定环境下可分化成肝干细胞及肝细胞,从而参与肝功能的修复和重构。

体外诱导人胎盘来源间充质干细胞向肝细胞分化

背景:间充质干细胞是治疗肝功能衰竭的重要细胞来源,将其诱导分化为肝细胞后能提高肝功能衰竭的治疗效果。目的:探讨胎盘组织来源间充质干细胞在体外诱导分化为成熟肝细胞的可行性,为其用于肝功能衰竭治疗奠定基础。方法:从人胎盘组织中分离培养人胎盘来源间充质干细胞,采用流式细胞分析、多向诱导分化等方法鉴定。应用多细胞因子将胎盘间充质干细胞向肝细胞诱导分化22 d,采用免疫荧光染色检测肝细胞标志物的表达变化,糖原染色检测细胞的糖原合成能力。结果与结论:①倒置显微镜下可见分离培养的细胞为梭形或成纤维细胞样细胞,增殖迅速,传10代后细胞形态未见明显变化;②流式细胞分析结果显示CD73、CD90、CD105、CD44、CD166、CD29、CD54、HLA-ABC在胎盘间充质干细胞中阳性率超过95%,而CD34、CD45、CD117、CD14、CD19、CD133、CD31、HLA-DR均为阴性;③经成脂、成骨、成软骨细胞诱导分化后,油红O、茜素红、阿辛蓝染色均为阳性;④向肝细胞诱导分化22 d后,呈圆形或多角形、细胞界限明显的典型肝细胞形态,免疫荧光染色显示大量细胞表达肝细胞表面标志物白蛋白、细胞角蛋白18、HepPar1、CYP7A1,糖原染色为阳性;⑤结果表明,从人胎盘组织分离培养的细胞为间充质干细胞,人胎盘间充质干细胞在体外可诱导分化为成熟肝细胞,有望为肝功能衰竭治疗提供可靠的肝细胞来源。

皮肤细胞可变为肝细胞

格拉德斯通研究所和加利福尼亚大学圣弗朗西斯科分校（UCSF）的科学家取得重大突破：他们发现一种方法，可以把皮肤细胞转变为功能完全正常的成熟肝细胞，甚至在移植到经过模拟肝衰竭处理的实验室动物身上时也是如此。

骨髓干细胞和肝细胞移植

肝细胞移植经过近30年的发展，正由动物实验向临床过渡，初步结果显示，肝细胞移植在急慢性肝衰竭和遗传代谢性肝病方面具有很好的应用前景。最近有数篇文献报道，存在于骨髓中的干细胞，在体内外均能分化为功能完备的肝细胞。用骨髓干细胞替代成熟肝细胞进行移植治疗肝病，有望使细胞移植在肝病治疗方面取得重大突破。本文将就骨髓干细胞用于肝细胞移植的研究现状、应用前景进行综述。

同种异体MSC移植在大鼠肝内定居的病理检测

目的:探索大鼠骨髓间质干细胞(MSC),在同种异体移植后受体大鼠肝脏的定居分布情况. 方法:以绿色荧光蛋白标记从大鼠骨髓中分离培养的MSC,分别从大鼠尾静脉和门静脉注入同种异体正常和肝脏损伤大鼠体内,于移植后的第7 d,分别完整取肝,通过荧光检测和常规病理、免疫组织化学检查,研究MSC在大鼠肝脏内定居分布情况. 结果:经不同途径移植MSC,在受体大鼠肝脏内均有定居.在肝脏受损的大鼠肝内,其已成功地分化为成熟的肝细胞和卵圆细胞,并能长期存活,在肝脏未受损的大鼠,MSC仅少量分化为卵圆细胞,所移植的MSC 定居于肝脏和是否分化为成熟肝细胞、卵圆细胞与其移植途径无明显关系,与肝脏是否受损伤相关. 结论:植入MSC是肝脏卵圆细胞的细胞来源,并且可以分化为成熟的肝细胞.干细胞定居于肝脏数量与肝脏是否受损伤关系密切,与移植途径无关.

细胞间相互作用影响iPSc来源肝细胞的成熟

获得功能性的肝细胞可用于研究肝细胞再生机理,并可为细胞移植和药物筛选提供生物材料。该研究采用四步法诱导多能干细胞分化成肝细胞,比较传代和不传代分化细胞的形态和肝细胞特异标志的差异表达。结果发现,利用诱导多能干细胞分化可获得白蛋白(albumin,ALB)阳性的成熟肝细胞,不传代法获得的细胞更接近于肝细胞形态,两组均获得甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)和ALB阳性表达的细胞;GATA6(GATA binding protein 6)和HNF4A(hepatocyte nuclear factor 4 alpha)表达水平没有显著性差异,但不传代法分化细胞的AFP和ALB表达量高于传代法,存在显著性差异。结果提示,细胞因子与细胞间、多细胞间相互作用等因素影响多能干细胞的分化,细胞间相互作用有利于肝细胞定向诱导分化过程中肝细胞的成熟。

丁酸钠诱导体外培养的大鼠肝卵圆细胞分化为成熟肝细胞

目的 探讨分化刺激剂丁酸钠对体外培养的大鼠肝卵圆细胞分化的影响。 方法 从喂养含0.1％乙硫氨酸的胆碱缺乏性饮食4-6周的大鼠肝脏中分离出肝卵圆细胞,用免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法对其进行鉴定。用0.7 5 mmol/L丁酸钠处理大鼠肝卵圆细胞后,姬姆萨染色观察细胞表型改变,western blot检测细胞白蛋白的表达水平。 结果 免疫细胞化学结果显示分离出的细胞既表达成熟肝细胞的标志物白蛋白,也表达胆管细胞的标志物细胞角蛋白19,RT-PCR结果显示这些细胞还表达干细胞的标志物c-kit,但不表达造血干细胞的标志物CD3(?),表明这些细胞是大鼠肝前体细胞--肝卵圆细胞。0.7 5 mmol/L丁酸钠能诱导大鼠肝卵圆细胞出现明显的表型改变,细胞变大、变圆,核浆比减小,且双核细胞数增多,约占总细胞数的50％左右,同时western blot的结果显示0.75 mmol/L丁酸钠能够提高大鼠肝卵圆细胞白蛋白的表达水平。 结论 分化刺激剂丁酸钠能诱导体外培养的大鼠肝卵圆细胞向成熟肝细胞分化。

病毒性肝炎：总论

胚胎干细胞分化为肝细胞的研究进展（综述）——周庆军等（浙江杭州浙江大学生命科学学院310012）：《生物工程学报》，2005，21（2）：171-176[目前，细胞移植作为终末期肝病的辅助治疗方法，移植的细胞必须满足在受体肝脏中存活、增殖并可分化为成熟肝细胞两个重要条件，但目前应用的肝细胞来源有限。其功能随着培养时间的延长而逐渐下降等问题限制了这一治疗策略的广泛开展。

体外定向诱导E14小鼠胚胎干细胞为肝细胞

目的 探索体外定向诱导胚胎干细胞分化为肝细胞。 方法 常规方法培养E14小鼠胚胎干细胞(ESC)后,进行悬滴(?)悬浮培养,形成胚胎体,再进行分阶段定向诱导,在培养第9-12天、第12-18天以及第15-18天分别加入酸性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子和制瘤素M。利用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分析特异性基因mRNA的表达,并用吲哚氰绿(ICG)摄取和过碘酸雪夫反应(PAS)分析细胞的分化及功能。 结果 在诱导培养的第13天,细胞出现肝细胞样改变。RT-PCR分析可见,在诱导的第6天和第12天分别可以检测到内胚层或卯黄囊分化标志基因--甲状腺素运载蛋白和α1抗胰蛋白酶的mRNA表达,第6天出现未成熟肝细胞标志基因--甲胎蛋白mRNA表达,第9天,第15天和第18天分别开始出现成熟肝细胞的特异性标志基因--白蛋白、葡萄糖6磷酸酶、酪氨酸氨基转移酶mRNA表达。同时,ESC源性肝细胞表现为ICG摄取和PAS反应阳性,经过诱导,ICG阳性细胞数约占85.1％。 结论 ESC源性肝细胞具备肝细胞特性,ESC有可能成为肝细胞治疗的替代供体细胞。

甲胎蛋白在肝癌细胞系HepG2不同亚群中的差异表达分析

甲胎蛋白（AFP）对原发性肝癌的诊断及预后有临床意义，病理学证实其在肝癌组织中的表达具有显著异质性，但其分布规律及意义尚不明确。成熟肝细胞AFP表达为阴性，原始幼稚细胞（如被认为是肝祖细胞的卵圆细胞）AFP表达常为阳性。肝癌组织中AFP差异表达可能反映肝癌细胞在分化程度上的差异。利用流式细胞荧光激活分选法可获得组织中具有原始干细胞特征的成体细胞，

肝干细胞

1958年Wilson和Leduc在研究小鼠营养性肝损伤的修复机制中发现,增殖的毛细胆管细胞(终末胆管细胞)具有干细胞样特性,可分化为肝细胞及胆管细胞,于是首次提出原始肝脏细胞的概念.

肝癌干细胞研究进展

肝癌发生机制有两种：其一，癌变由肝脏干细胞（LSC）的异常分化引起；其二，癌变由成熟肝细胞去分化而致。要证明肝癌干细胞的存在性，两个基本的问题必须给予系统地阐述。第一，肝癌起源于肝干细胞吗？其次，肝癌中含有具有癌干细胞特性的细胞吗？许多年来通过化学制剂实验性诱导肝癌发生过程，肝中癌前结节的发现支持了肝癌起源于成熟肝细胞的去分化。最近，随着小卵圆细胞在肝癌发生的作用逐渐被认知，产生了肝癌是由于肝干细胞的成熟受阻的假设。通过对肝癌细胞成分分析，证实了具有干细胞特征细胞群的存在（如永生化、转移性、治疗抵抗性）。